致),即可开始观察,观察内容(定性、定位、定量等)视实验目标而 定。若需拍照并做光度测量,应在第一视野调好焦距后暂时推入激发光遮光 板,调节目镜分光板,使光100%进入摄影光路,打开数码摄影系统并设定 相关参数(视软件而定),其中最重要的是曝光参数,务必选定“自动曝光 点测光”(无软件差别)。软件准备好后打开激发光遮光板,在目镜监控下移 动载物台,选择距第一视野约两个视野的新视野,在摄影系统的预览窗口中 重新调焦,点击“黑平衡”后迅速点击摄影按钮。这样做可以避免视野被激发 光照射过久,导致荧光衰减而使拍摄到的荧光强度失真。 3.实验分组摄影:选择预知有荧光信号的标本(若有阳性对照组,通常 选之),按照上述摄影要求进行“自动曝光-点测光”,通过预览窗口选择荧光 图像清晰且背景接近全黑的曝光状态,记录此时软件显示的曝光时间:转换 为“手动曝光”,按刚才测定的曝光时间数值设定曝光时间,移到相距约两个 视野的新视野进行拍照(不做黑平衡):以后各组的拍照统一按此相同的曝 光时间摄影,才能保障各组的荧光强度差别,是真正的实验组间差别,而非 显微摄影的操作误差。 (三)开关机和机时要求 为了获得高能激发光,荧光显微镜用超高压汞灯或超高压金属短弧灯做光 源,灯管内电极在高电压下放电并蒸发金属蒸汽而发强光,灯管内蒸气压达 到≥10大气压。这种特殊状态对使用有特殊要求:(1)开机后2-5min才能 达预期亮度:(2)15min内灯管金属蒸发不均匀,若此时停电将导致金属蒸 汽凝结管壁而使再次开机时可能爆管,因此开机后15mi内严禁关机 (3)两次开机间隔不能小于5分钟,否则灯不亮且会降低灯管寿命;(4) 每次开机必损耗2h寿命,超过(哪怕只超lmin)就再减2h(计4h),依此 类推。所以一定要及时关机。以汞灯计,当前灯管优惠价￥2500(寿命 200h),每次开机将花费“￥12.5×n2”。而且,买一个进口灯管运输和报关需 时≥3月。故务必严格遵循上述(红字)要求,以免无谓的耽误和损失 附图一致），即可开始观察，观察内容（定性、定位、定量等）视实验目标而 定。若需拍照并做光度测量，应在第一视野调好焦距后暂时推入激发光遮光 板，调节目镜分光板，使光 100% 进入摄影光路，打开数码摄影系统并设定 相关参数（视软件而定），其中最重要的是曝光参数，务必选定“自动曝光- 点测光”（无软件差别）。软件准备好后打开激发光遮光板，在目镜监控下移 动载物台，选择距第一视野约两个视野的新视野，在摄影系统的预览窗口中 重新调焦，点击“黑平衡”后迅速点击摄影按钮。这样做可以避免视野被激发 光照射过久，导致荧光衰减而使拍摄到的荧光强度失真。 3. 实验分组摄影：选择预知有荧光信号的标本（若有阳性对照组，通常 选之），按照上述摄影要求进行“自动曝光-点测光”，通过预览窗口选择荧光 图像清晰且背景接近全黑的曝光状态，记录此时软件显示的曝光时间；转换 为“手动曝光”，按刚才测定的曝光时间数值设定曝光时间，移到相距约两个 视野的新视野进行拍照（不做黑平衡）；以后各组的拍照统一按此相同的曝 光时间摄影，才能保障各组的荧光强度差别，是真正的实验组间差别，而非 显微摄影的操作误差。 （三）开关机和机时要求 为了获得高能激发光，荧光显微镜用超高压汞灯或超高压金属短弧灯做光 源，灯管内电极在高电压下放电并蒸发金属蒸汽而发强光，灯管内蒸气压达 到≥10 大气压。这种特殊状态对使用有特殊要求：（1）开机后 2-5min 才能 达预期亮度；（2）15min 内灯管金属蒸发不均匀，若此时停电将导致金属蒸 汽凝结管壁而使再次开机时可能爆管，因此开机后 15min 内严禁关机； （3）两次开机间隔不能小于 5 分钟，否则灯不亮且会降低灯管寿命；（4） 每次开机必损耗 2h 寿命，超过（哪怕只超 1min）就再减 2h（计 4h），依此 类推。所以一定要及时关机。以汞灯计，当前灯管优惠价￥2500（寿命 200h），每次开机将花费“￥12.5×n2”。而且，买一个进口灯管运输和报关需 时≥3 月。故务必严格遵循上述（红字）要求，以免无谓的耽误和损失。 附图：