相区别。 1.设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： (1)恒温培养箱：36C±1℃。 (2)冰箱：20 ~5℃ (3)恒温水浴箱：46C±1℃ (4)天平：感量为0.1g。 (5)均质器。 (6)拒熙 (7)无菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及 吸头。 (8)无菌维形瓶：容量250mL、500mL (9)无菌培养皿：直径90mm。 (10)灭菌玻璃珠：直径为5mm (1)pH计或H比色管或精密pH试纸 (12)灭菌刀、剪子、镊子等 (13)菌落计数器。 2.培养基和试剂 (1)月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤 ①成分：蛋白陈或胰酪陈200g,氯化钠50g,乳糖5.0g酸氢二钾(K:HPO,) 275g酸 与细 KH,P04)2.75g,月桂基硫酸钠0.1g,蒸馏水1000ml ②制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH6.8±0.2。分装到有玻璃小倒管的试管 中，每管10mL。121℃高压灭菌15min. (2)煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤 ①成分：蛋白胨10.0g,乳糖10.0g,牛胆粉(oxgall或oxbile)溶液200mL,0.1%煌 绿水溶液13.3ml 800m ②制法：将蛋白胨、乳糖溶于约500mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200mL(将20.0g 脱水牛胆粉溶于200mL蒸馏水中，调节pH至7.0~7.5)，用蒸馏水稀释到975mL,调节 pH72士0.1，再加入0.1%煌绿水溶液13.3mL,用燕馏水补足到1000mL,用棉花过滤后， 分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。 (3)结品紫中性红胆盐琼脂(VRBA) ①成分：蛋白胨7.0g,酵母音3.0g,乳糖10.0g,氯化钠5.0g,胆盐或3号胆盐1.5g, 中性红0.03g,结晶紫0.002g,琼脂15g~18g,蒸馏水1000mL。 ②制法：将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调节pH7.40.1。煮沸2 mim,将培养基冷却至45C~50℃倾注平板。使用前临时制备，不得超过3h。 (4)磷酸盐缓冲液见菌落总数的测定中磷酸盐缓冲液的配制方法。 (5)无菌生理盐 见菌落总数的测定中无菌生理盐水的配制方法 (6)I mol/L NaOH ①成分：NaOH40.0g,蒸馏水1000mL。 ②制法：称取40.0g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。 (7)Imol/LHCI ①成分：浓盐酸90mL,蒸馏水1000m ②制法：移取浓盐酸90mL,用蒸馏水稀释至1000mL,121C高压灭菌15mim。 (8)革兰氏染液 ①结晶紫染色液：结晶紫1.0g,95%乙醇20mL,1%草酸铵水溶液80mL。 相区别。 1. 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： （1）恒温培养箱：36℃±1℃。 （2）冰箱：2℃～5℃。 （3）恒温水浴箱：46℃±1℃。 （4）天平：感量为0.1 g。 （5）均质器。 （6）振荡器。 （7）无菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、10 mL（具0.1 mL刻度）或微量移液器及 吸头。 （8）无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。 （9）无菌培养皿：直径90 mm。 （10）灭菌玻璃珠：直径为5 mm。 （11）pH计或pH比色管或精密pH 试纸。 （12）灭菌刀、剪子、镊子等。 （13）菌落计数器。 2. 培养基和试剂 （1）月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤 ① 成分：胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g，氯化钠5.0 g，乳糖5.0 g，磷酸氢二钾（K2HPO4） 2.75 g，磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75 g，月桂基硫酸钠0.1 g，蒸馏水1 000 mL。 ② 制法：将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH6.8±0.2。分装到有玻璃小倒管的试管 中，每管10 mL。121℃高压灭菌15 min。 （2）煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤 ① 成分：蛋白胨10.0 g，乳糖10.0 g，牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液200 mL，0.1%煌 绿水溶液13.3 mL，蒸馏水800 mL。 ② 制法：将蛋白胨、乳糖溶于约500 mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200 mL（将20.0 g 脱水牛胆粉溶于200 mL蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975 mL，调节 pH7.2±0.1，再加入0.1%煌绿水溶液13.3 mL，用蒸馏水补足到1 000 mL，用棉花过滤后， 分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。121℃高压灭菌15 min。 （3）结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA） ① 成分：蛋白胨7.0 g，酵母膏3.0 g，乳糖10.0 g，氯化钠5.0 g，胆盐或3号胆盐1.5 g， 中性红0.03 g，结晶紫0.002 g，琼脂 15 g～18 g，蒸馏水1 000 mL。 ② 制法：将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调节pH 7.4±0.1。煮沸2 min，将培养基冷却至45℃～50℃倾注平板。使用前临时制备，不得超过3 h。 （4）磷酸盐缓冲液 见菌落总数的测定中磷酸盐缓冲液的配制方法。 （5）无菌生理盐水 见菌落总数的测定中无菌生理盐水的配制方法。 （6）1 mol/L NaOH ① 成分：NaOH 40.0 g，蒸馏水1 000 mL。 ② 制法：称取 40.0 g 氢氧化钠溶于 1 000 mL 蒸馏水中，121℃高压灭菌 15 min。 （7）1 mol/LHCl ① 成分：浓盐酸90 mL，蒸馏水1 000 mL ② 制法：移取浓盐酸90 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，121℃高压灭菌15 min。 （8）革兰氏染液 ① 结晶紫染色液：结晶紫 1.0 g，95%乙醇 20 mL，1%草酸铵水溶液 80 mL