强酸性阳离子交换树脂 弱酸性阳离子交换树脂 R -NR3-OH RNHt3.OH 强碱性阴离子交换树脂 弱碱性阴离子交换树脂 交换反应如下：R-SOH+MX RSO M'+H'X- R-N'ROH+H'X RN'RX*+H'OH 虽然交换反应都是平衡反应，但在层析柱上进行时，由于连续添加新的交换溶液， 平衡不断按正反应方向进行直至完全。结合到树脂上的离子，可通过改变缓冲液的H或增 加离子强度被洗脱下来。 四、凝胶层析(gel chromatography) 凝胶层析即分子筛层析，是选用孔径大小一定的凝胶，将混合液中的小分子和大分子物 质“筛”开来的一种分离方法。当一混合的蛋白质溶液通过凝胶柱时，分子直径小于凝胶孔 隙的可以进入胶粒内部，分子直径大于孔隙的不能进入。因此，小分子蛋白质在前进路上通 过胶粒时遇到的阻力大，所以流速慢。相反地，大分子蛋白质不会进入胶粒内部，可以比较 顺利地通过胶粒微仁零石演鼎：昏以阻力小，流速快：由于流建不同，就可以把分子大小 不同的蛋白质分开，因为凝胶具有这种性能，所以把它称为“分子筛”（表2，表3）。 凝胶颗粒是多孔性的网络结构，凝胶作为一种层析介质，它是不带电荷的物质，在层 析时一般不换洗脱液，只是一种滤过作用，故又称为凝胶过滤。 用于生物材料分离的凝胶主要有以下几类：交联葡聚糖(Sephadex入聚丙烯酰胺凝胶 (Bio-Gel)琼脂糖凝胶(Sepharose)、交联琼脂糖(Sepharose-CL)(图9)。 表2交联葡聚糖凝胶的种类和规格 分离分子量的范围 及水量柱床体积 最小溶胀时间 克水克毫升/克 型 糖 多肽和蛋白质 干凝胶 凝胶 20-25℃90-100 G-10-700 -700 1.0 2.0 3 1 G-15 -1500 -1500 15 3.0 1 D-25 100-5000 100-5000 2.5 50 G-50 500-10000 500-10000 5.0 10.0 3 G-75 1000500001000-50000 9.512-15 3 G-100 1000-1000001000-100000 10 15-20 2 G-15010001500001000-150000 152030 72 5 G-20010002000001000-200000 203040 72 5强酸性阳离子交换树脂 弱酸性阳离子交换树脂 强碱性阴离子交换树脂 弱碱性阴离子交换树脂 交换反应如下：R－SO－ 3H ＋＋M ＋X － RSO－ 3M ＋＋H ＋X － R－N ＋ ROH－＋H ＋X － RN＋ RX＋＋H ＋OH－ 虽然交换反应都是平衡反应，但在层析柱上进行时，由于连续添加新的交换溶液， 平衡不断按正反应方向进行直至完全。结合到树脂上的离子，可通过改变缓冲液的 PH 或增 加离子强度被洗脱下来。 四、 凝胶层析（gel chromatography） 凝胶层析即分子筛层析，是选用孔径大小一定的凝胶，将混合液中的小分子和大分子物 质“筛”开来的一种分离方法。当一混合的蛋白质溶液通过凝胶柱时，分子直径小于凝胶孔 隙的可以进入胶粒内部，分子直径大于孔隙的不能进入。因此，小分子蛋白质在前进路上通 过胶粒时遇到的阻力大，所以流速慢。相反地，大分子蛋白质不会进入胶粒内部，可以比较 顺利地通过胶粒间的空隙而流出，所以阻力小，流速快。由于流速不同，就可以把分子大小 不同的蛋白质分开，因为凝胶具有这种性能，所以把它称为“分子筛”（表 2，表 3）。 凝胶颗粒是多孔性的网络结构，凝胶作为一种层析介质，它是不带电荷的物质，在层 析时一般不换洗脱液，只是一种滤过作用，故又称为凝胶过滤。 用于生物材料分离的凝胶主要有以下几类：交联葡聚糖（Sephadex）、聚丙烯酰胺凝胶 （Bio-Gel） 琼脂糖凝胶（Sepharose）、 交联琼脂糖（Sepharose-CL） （图 9）。 表 2 交联葡聚糖凝胶的种类和规格 分离分子量的范围 及水量 柱床体积 最小溶胀时间 克水/克 毫升/克干 型 糖 多肽和蛋白质 干凝胶 凝胶 20~25℃ 90~100℃ G-10 ~700 ~700 1.0 2.0 3 1 G-15 ~1 500 ~1 500 1.5 3.0 3 1 D-25 100~5 000 1 00~5 000 2.5 5.0 3 1 G-50 500~10 000 500~10 000 5.0 10.0 3 1 G-75 1 000~50 000 1 000~50 000 9.5 12~15 24 3 G-100 1 000~100 000 1 000~100 000 10 15~20 72 5 G-150 1 000~150 000 1 000~150 000 15 20~30 72 5 G-200 1 000~200 000 1 000~200 000 20 30~40 72 5 R －SO3 －.H ＋ R －N ＋R3.OH－ R －NH＋ 3.OH－