张东,等.组蛋白去乙酰化酶抑制剂协同紫杉醇对人肺癌细胞株抑制作用及机制 1273 Control TAX 24 h TSA 12 h 80 DNA Content DNA Content DNA Content DNA Conter 图3流式细胞仪检测各组H322细胞的凋亡情况 gure 3 Flow cytometric analysis of each group of H322 cells 表2各组H1299细胞周期及凋亡的影响 对照组H322和H1299细胞核为圆形、椭圆 Tabe2 Cell cycle and apoptosis changes of H299cel形,少量呈半月形;TSA组、紫杉醇组及联合应用 in each group(%,x±s) 组H1299细胞核多呈偏心性改变,细胞核呈马蹄 Cell proportion 铁样改变,伴有多核、空泡变性等死亡象,只有很 Group Go/GI phase s phase Gy/M phase 少的凋亡小体。TF组较其他组有更多的细胞死 Control53.25±4.5630.46±3.1416.29±2.12 亡。在 Hoechst33342染色下,TAX及TF组可见较 SA58.51±5.5428.23±3.0713.26±1.810.02±0.05 TAX6992±5.6318.80±2.3211.29±2.090.33±0.28 多H322细胞破碎及凋亡小体,TSA组有少量凋亡 78.82±6.3812.26±1.848.91±1.171.47±0.89 小体。见图5。 a p<0.05, comparing with control group with significant increase; P 23TSA对ERK及 Survivin蛋白表达的影响 0.05, comparing with control group with significant decreas 将正常组和TAX组的pERK表达水平分别 Abbreviations as in Table 1 与相应组的tRK进行比较,H322正常组 TAX 24 h TSA 12 h 400 180 160 80 000 DNA Content DNA Content DNA Conte DNA Content 图4流式细胞仪检测各组H1299细胞凋亡情况 Figure 4 Flow cytometric analysis of each group of H1299 cells pERK/ERK为1.26,TAX组pERK/ERK为1.42, Survivin蛋白的表达均增加,分别是正常对照组的 提示TAX应用后H322pERK蛋白表达略有增1.71倍、1.61倍;TSA下调 Survivin蛋白的表达,分 加;H1299正常组pERK/ERK为0.45,TAX组别是对照组的78%、46%。TSA联合TAX应用明显 pERK/ERK为0.23,pERK蛋白表达下降。TSA下调了由TAX引起的 Survivin蛋白的高表达 的单独应用下调了H322、H1299细胞中 PERK Survivin蛋白表达水平分别是TAX组的51% 蛋白的表达水平。TF组明显抑制pERK蛋白的33%。见图6。 表达,H322及H1299细胞均较TAX组下降。见 TAX和TF组均检测到PARP蛋白表达,TF组 图6 较TAX组PARP蛋白明显增强;而H1299各组均 TAX作用24h后H322及H1299细胞中未检测到剪切PARP蛋白。见图6。!"#$%"& ’() *)+ *, -. / -0 12345 67896:;86< 6=860:686; <>8>9:68<7? @=8=9:<87=? A 1B?4C 7.8;<:780; 9=897:78.@ 0=8=.:9879D 0989<:08=;D -9 / E 1B?4C 0<89>:9809 0789<:08=0 0089>:98.>D =8>0:080@D .8.7:.8.6 .8.9:.8.6 .877:.89= 08;@:.8=> )1"1$"4F4 %3$C GCHH 1%"1"%$F"I -%"J1 表 ! 各组 "#!$$ 细胞周期及凋亡的影响 %&’() ! *)(( +,+() &-. &/0/10232 +4&-5)2 06 "#!$$ +)((2 3- )&+4 5708/ !9" !:2# 3 !K.8.6" L"M13%FIN OF$2 P"I$%"H Q%"J1 OF$B 4FQIFRFP3I$ FIP%5345$ S !K .8.6" P"M13%FIN OF$B P"I$%"H N%"J1 OF$B 4FNIFRFP3I$ T5P%53458 )SS%5UF3$F"I4 34 FI ’3SH5 08 图 7 流式细胞仪检测各组 V799 细胞的凋亡情况 ,FNJ%5 7 ,H"O PW$"M5$%FP 3I3HW4F4 "R 53PB N%"J1 "R V799 P5HH4 图 ; 流式细胞仪检测各组 V09>> 细胞凋亡情况 ,FNJ%5 ; ,H"O PW$"M5$%FP 3I3HW4F4 "R 53PB N%"J1 "R V09>> P5HH4 张 东!等8 组蛋白去乙酰化酶抑制剂协同紫杉醇对人肺癌细胞株抑制作用及机制 对照组 V799 和 V09>> 细胞核为圆形% 椭圆 形"少量呈半月形$’A) 组%紫杉醇组及联合应用 组 V09>> 细胞核多呈偏心性改变" 细胞核呈马蹄 铁样改变"伴有多核%空泡变性等死亡象"只有很 少的凋亡小体& ’, 组较其他组有更多的细胞死 亡& 在 V"5PB4$777;9 染色下"’)X 及 ’, 组可见较 多 V799 细胞破碎及凋亡小体"’A) 组有少量凋亡 小体& 见图 6& !"# $%& 对 ’() 及 %*+,-,-. 蛋白表达的影响 将 正 常 组 和 ’)X 组 的 1YZ[ 表 达 水 平 分 别 与 相 应 组 的 $YZ[ 进 行 比 较 "V799 正 常 组 1YZ[ / $YZ[ 为 089<"’)X 组 1YZ[ / $YZ[ 为 08;9 " 提 示 ’)X 应 用 后 V799 1YZ[ 蛋 白 表 达 略 有 增 加 $V09>> 正 常 组 1YZ[ / $YZ[ 为 .8;6"’)X 组 1YZ[ / $YZ[ 为 .897"1YZ[ 蛋 白 表 达 下 降 & ’A) 的 单 独 应 用 下 调 了 V799%V09>> 细 胞 中 1YZ[ 蛋白的表达 水 平& ’, 组 明 显 抑 制 1YZ[ 蛋 白 的 表达"V799 及 V09>> 细胞均较 ’)X 组 下 降& 见 图 <& ’)X 作 用 9; B 后 V799 及 V09>> 细 胞 中 AJ%UFUFI 蛋白的表达均增加"分别是正常对照组的 08@0 倍%08<0 倍$’A) 下调 AJ%UFUFI 蛋白的表达"分 别是对照组的 @=\%;<\& ’A) 联合 ’)X 应用明显 下 调 了 由 ’)X 引 起 的 AJ%UFUFI 蛋 白 的 高 表 达 " AJ%UFUFI 蛋 白 表 达 水 平 分 别 是 ’)X 组 的 60\ % 77\& 见图 <& ’)X 和 ’, 组均检测到 ])Z] 蛋白表达"’, 组 较 ’)X 组 ])Z] 蛋白明显增强$ 而 V09>> 各组均 未检测到剪切 ])Z] 蛋白& 见图 <& !"#$ C M Y K