细胞表面,置2~8℃30分钟,然后置20~25℃30分钟,分别进行镜检,观察红细 胞吸附情况,结果应均为阴性 3.鸡胚检查法 在禽类组织或细胞中繁殖过的病毒种子需用鸡胚检查禽类病毒的污染。选 用9~11日和5~7日龄两组SPF鸡胚,每组至少5只,分别于尿囊腔和卵黄囊接种经 抗血清中和后的病毒悬液,每胚0.5ml。孵育7日后,取尿囊液用豚鼠和鸡红细胞 混合悬液做血球凝集试验,应为阴性。被接种的鸡胚至少80%存活7天,试验有 效 生产用细胞外源因子检查 1.非血吸附病毒检查 (1)细胞直接观察每批生产用细胞应留取5%(或不少于500m)细胞悬液 不接种 病毒,作为对照细胞加入与疫苗生产相同的细胞维持液,置与疫苗生产相同的 条件下培养,观察14天,在显微镜下观察是否有细胞病变出现,无细胞病变出现 者为阴性,符合要求。在观察期末至少有80%的对照细胞培养物存活,试验有效 (2)细胞培养试验上述试验观察期末,收取上清液混合后,取适量接种 于猴 源和人源的细胞培养物,如果疫苗病毒在非猴源或非人源其他细胞系上生产, 还应接种于同种不同批细胞。接种量应不少于总量的25%。每种细胞至少检查 5ml上清混合液,置与生产相同的培养条件下培养。无细胞病变者为阴性,符合 要求 2.血吸附病毒检查 对上述细胞直接观察及细胞培养试验的细胞培养物在观察期末取至少25% 细胞培养瓶进行血吸附病毒检査(方法同病毒种子批外源因子检査的血吸附病毒 检查 页码数:2005版药典附录第20页 附录ⅣA醋酸纤维素薄膜 电泳法 试剂(1)巴比妥缓冲液(pH8.6)称取巴比妥2·76g、巴比妥钠15.45g, 加水溶 解使成1000m (2)氨基黑染色液称取氨基黑10BO.sg,溶于甲醇50ml、冰醋酸10m及水40ml 的 混合液中。附录ⅣCSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (3)漂洗液量取乙醇45mi、冰醋酸5ml及水50ml,混匀 4)透明液量取冰醋酸25m、无水乙醇75ml,混匀 测定法取醋酸纤维素薄膜,裁成2cmX8cm膜条,将无光泽面向下,浸入巴比 妥缓冲液(pH8.6)中,待完全浸透,取出夹于滤纸中,轻轻吸去多余的缓冲液 后,将膜条无光泽面向上,置含巴比妥缓冲液(pH8.6)的电泳槽架上,通过滤 纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8.6)中。于膜条上距负极端2cm处,条状滴加蛋白含细胞表面，置 2～8℃ 30 分钟，然后置 20～25℃ 30 分钟，分别进行镜检，观察红细 胞吸附情况，结果应均为阴性。 3．鸡胚检查法 在禽类组织或细胞中繁殖过的病毒种子需用鸡胚检查禽类病毒的污染。选 用 9～11 日和 5～7 日龄两组 SPF 鸡胚，每组至少 5 只，分别于尿囊腔和卵黄囊接种经 抗血清中和后的病毒悬液，每胚 0.5ml。孵育 7 日后，取尿囊液用豚鼠和鸡红细胞 混合悬液做血球凝集试验，应为阴性。被接种的鸡胚至少 80%存活 7 天，试验有 效。 生产用细胞外源因子检查 1．非血吸附病毒检查 (1) 细胞直接观察 每批生产用细胞应留取 5%(或不少于 500ml)细胞悬液 不接种 病毒，作为对照细胞加入与疫苗生产相同的细胞维持液，置与疫苗生产相同的 条件下培养，观察 14 天，在显微镜下观察是否有细胞病变出现，无细胞病变出现 者为阴性，符合要求。在观察期末至少有 80%的对照细胞培养物存活，试验有效。 (2) 细胞培养试验 上述试验观察期末，收取上清液混合后，取适量接种 于猴 源和人源的细胞培养物，如果疫苗病毒在非猴源或非人源其他细胞系上生产， 还应接种于同种不同批细胞。接种量应不少于总量的 25%。每种细胞至少检查 5ml 上清混合液，置与生产相同的培养条件下培养。无细胞病变者为阴性，符合 要求。 2．血吸附病毒检查 对上述细胞直接观察及细胞培养试验的细胞培养物在观察期末取至少 25% 的 细胞培养瓶进行血吸附病毒检查(方法同病毒种子批外源因子检查的血吸附病毒 检查)。 页码数： 2005 版药典附录第 20 页 附录ⅣA 醋酸纤维素薄膜 电泳法 试剂 (1)巴比妥缓冲液(pH8．6) 称取巴比妥 2·76g、巴比妥钠 15．45g， 加水溶 解使成 1000ml。 (2)氨基黑染色液称取氨基黑 10B O．5g，溶于甲醇 50ml、冰醋酸 10ml 及水 40ml 的 混合液中。附录ⅣC SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (3)漂洗液量取乙醇 45mi、冰醋酸 5ml 及水 50ml，混匀。 (4)透明液 量取冰醋酸 25ml、无水乙醇 75ml，混匀。 测定法取醋酸纤维素薄膜，裁成 2cmX 8cm 膜条，将无光泽面向下，浸入巴比 妥缓冲液(pH8．6)中，待完全浸透，取出夹于滤纸中，轻轻吸去多余的缓冲液 后，将膜条无光泽面向上，置含巴比妥缓冲液(pH8．6)的电泳槽架上，通过滤 纸桥浸入巴比妥缓冲液(pH8．6)中。于膜条上距负极端 2cm 处，条状滴加蛋白含