中国药典三部附录(2005年版) 135种 页码数:2005版药典附录第44页 附录ⅥGA群脑膜炎球菌多糖 第一法测磷法(仲裁法) 本法用于测定细菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数(KD)和多糖在规定KD值 以前的回收率。 试剂(1)流动相取氯化钠11.7g、叠氮钠0.1g,加水使溶解成1000m,混匀 用O.lmol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.O (②)蓝色葡聚糖2000溶液取蓝色葡聚糖200020mg,加流动相使溶解成10ml (3)维生素B12溶液称取l0mg维生素B12,加流动相使溶解成10ml 色谱柱的制备取琼脂糖4B凝胶或琼脂糖CL-4B凝胶约200m,加流动相400m充分 搅拌,放置约1小时使其沉淀,倾去上层含悬浮颗粒的悬液。如此反复3~5次 后,加流动相200ml,混匀,抽去凝胶中的空气,装于1.5m×90cm色谱柱中,约 87cm高,,用流动相洗脱,流速为每小时15~20ml,以2~3倍柱床体积的流动相 洗脱(约500m1),使柱床平衡。 色谱柱的标定取蓝色葡聚糖2000溶液lm加于已平衡的色谱柱中,以流动相洗 脱,流速每小时15~20ml,用组分收集器收集洗脱液,每管收集3~5ml,照紫外 可见分光光度法(附录ⅡA),在波长260m处测定各管洗脱液的吸光度,以吸光 度为纵坐标,洗脱液体积(m1)为横坐标分别作图,260nm波长处的峰顶洗脱液体 积为空流体积V0 取维生素B12溶液lml,自“加于已平衡的色谱柱中起,同法操作,370nm波长处 的峰顶洗脱液体积为柱床体积ⅵ 测定法取供试品约lml(含多糖抗原3~5mg,如为冻干制品可用流动相溶解),加 于已标定的色谱柱中,用流动相洗脱,用组分收集器收集洗脱液,每管收集5ml 照磷含量测定法(附录ⅦA测定每管洗脱液的磷含量。以供试品每管洗脱液的磷 含量为纵坐标,洗脱液体积(m1)为横坐标作图,主峰峰顶洗脱液体积为vs 按下式计算 KD=ve-vO/Vi-V0。 式中KD为供试品分配系数 ve为供试品洗脱液体积,ml; V0为空流体积 Ⅵ为柱床体积 计算供试品在KD值<0.5的多糖回收率 Rx(%=Ax/At×100% 式中Rx为KD值<O.5供试品的多糖回收率 Ax为供试品在KD值<O.5各管洗脱液的磷含量之和; At为供试品所有管洗脱液的磷含量之和。 第二法仪器法 试剂与色谱柱的制备同第一法 色谱柱的标定取蓝色葡聚糖2000溶液lml与维生素B1溶液0.2m,混匀后加于 已平衡的色谱柱中,以流动相洗脱,流速每小时15~20m,检测波长206nm,用 组分收集器收集洗脱液,记录色谱图,色谱图中,第一峰为蓝色葡聚糖2000峰
中国药典三部附录（2005 年版） 135 种 页码数： 2005 版药典附录第 44 页 附录 VI G A 群脑膜炎球菌多糖 第一法测磷法(仲裁法) 本法用于测定细菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数(KD)和多糖在规定 KD 值 以前的回收率。 试剂 (1)流动相取氯化钠 11．7g、叠氮钠 0．1g，加水使溶解成 1000ml，混匀， 用 O．1mol／L 氢氧化钠溶液调节 pH 至 7．O。 (2)蓝色葡聚糖 2000 溶液 取蓝色葡聚糖 2000 20mg，加流动相使溶解成 10ml。 (3)维生素 B12 溶液称取 10mg 维生素 B12，加流动相使溶解成 10ml。 色谱柱的制备取琼脂糖 4B 凝胶或琼脂糖 CL-4B 凝胶约 200ml，加流动相 400ml 充分 搅拌，放置约 1 小时使其沉淀，倾去上层含悬浮颗粒的悬液。如此反复 3～5 次 后，加流动相 200ml，混匀，抽去凝胶中的空气，装于 1．5cm×90cm 色谱柱中，约 87cm 高，．用流动相洗脱，流速为每小时 15～20ml，以 2～3 倍柱床体积的流动相 洗脱(约 500m1)，使柱床平衡。 色谱柱的标定取蓝色葡聚糖 2000 溶液 lml 加于已平衡的色谱柱中，以流动相洗 脱，流速每小时 15～20ml，用组分收集器收集洗脱液，每管收集 3～5ml，照紫外 -可见分光光度法(附录ⅡA)，在波长 260nm 处测定各管洗脱液的吸光度，以吸光 度为纵坐标，洗脱液体积(m1)为横坐标分别作图，260nm 波长处的峰顶洗脱液体 积为空流体积 V0。 取维生素 B12 溶液 lml，自“加于已平衡的色谱柱中起，同法操作，370nm 波长处 的峰顶洗脱液体积为柱床体积 Vi。 测定法取供试品约 lml(含多糖抗原 3～5mg，如为冻干制品可用流动相溶解)，加 于已标定的色谱柱中，用流动相洗脱，用组分收集器收集洗脱液，每管收集 5ml， 照磷含量测定法(附录ⅦA)测定每管洗脱液的磷含量。以供试品每管洗脱液的磷 含量为纵坐标，洗脱液体积(m1)为横坐标作图，主峰峰顶洗脱液体积为 Ve。 按下式计算 KD=ve-v0/Vi-V0。 式中 KD 为供试品分配系数； Ve 为供试品洗脱液体积，ml； V0 为空流体积，ml； Vi 为柱床体积，ml。 计算供试品在 KD 值<0．5 的多糖回收率 Rx(％)=Ax/At×100％ 式中 Rx 为 KD 值<O．5 供试品的多糖回收率； Ax 为供试品在 KD 值<O．5 各管洗脱液的磷含量 之和； At 为供试品所有管洗脱液的磷含量之和。 第二法仪器法 试剂与色谱柱的制备同第一法。 色谱柱的标定取蓝色葡聚糖 2000 溶液 lml 与维生素 B12 溶液 0．2ml，混匀后加于 已平衡的色谱柱中，以流动相洗脱，流速每小时 15～20ml，检测波长 206nm，用 组分收集器收集洗脱液，记录色谱图，色谱图中，第一峰为蓝色葡聚糖 2000 峰
峰顶的洗脱液体积为空流体积ⅴo:第二峰为维生素B12的峰,峰顶的洗脱液体积 为柱床体积Vi 测定法取供试品约lm(含多糖抗原3~5mg,如为冻干制品可用流动相溶解), 加于已标定的色谱柱中,用流动相洗脱,流速为每小时15~20m,检测波长 206nm,用组分收集器收集洗脱液,记录色谱图,即得。 按下式计算 KD=Ve- VO/Vi-VO 式中KD为供试品分配系数 V为供试品洗脱液体积,ml K为空流体积,m1 Ⅵ为柱床体积,ml 计算供试品在KD值<O.5多糖回收率 Rx(%)=Ax/At*100% 式中凡为KD值<O.5供试品的多糖回收率(%) Ax为供试品在KD值<O.5的色谱图面积; A0为供试品色谱图总面积 【附注】过柱操作在10~20℃进行。 书页号:2005版药典三部附录71页 附录ⅪKIgG含 量测定法 (紫外-可见分光 光度法) 本法系依据免疫球蛋白G(gG)与相应的抗体特异性结合后,在适宜的电解 质、温度、pH条件下,产生凝集反应,形成抗原抗体复合物,根据供试品的吸 光度求出供试品中1gG的含量。 试剂(1)缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷(Iris)l242g、氯化钠9g、聚乙二醇 (PEG600050g、牛血清白蛋白(BSA)lg、叠氮钠(NaN3)lg,加水溶解,用10mo/L盐酸调 pH至74,加水稀释至1000ml (2)抗人lgG血清按说明书要求将冻干抗人lgG血清复溶,按标示效价取 量抗人IgG血清,加缓冲液稀释至抗体最终效价为1:4(例如,抗人IgG血清效价为 l:100,取原液2ml加抗体缓冲液48m),充分混匀,0.45μm膜过滤。4℃保存备用 lgG标准品溶液的制备用生理氯化钠溶液将IgG标准品在每lml含02~6·Omg范围内做 适当的系列稀释(通常做5个稀释度) 供试品溶液的制备用生理氯化钠溶液将供试品稀释成高、中、低3个稀释 度,其lgG含量均应在标准曲线范围内 测定法取供试品溶液10μl,加已预热至37℃的抗体液1m,混匀,每个稀释 度 做2管,37℃水浴中保温1小时,充分混匀,照紫外-可见分光光度法(附录ⅡA), 于波长340nm处分别测定吸光度 用lgG标准品溶液10μ替代供试品溶液,同法操作
峰顶的洗脱液体积为空流体积 V0；第二峰为维生素 B12 的峰，峰顶的洗脱液体积 为柱床体积 Vi。 测定法取供试品约 lml(含多糖抗原 3～5mg，如为冻干制品可用流动相溶解)， 加于已标定的色谱柱中，用流动相洗脱，流速为每小时 15～20 ml，检测波长 206nm，用组分收集器收集洗脱液，记录色谱图，即得。 按下式计算 KD=Ve-V0/Vi-V0 式中 KD 为供试品分配系数； V 为供试品洗脱液体积，ml, K 为空流体积，m1； Ⅵ为柱床体积，ml。 计算供试品在 KD 值<O．5 多糖回收率 Rx(％)=Ax/At*100％ 式中凡为 KD 值<O．5 供试品的多糖回收率(％)； Ax 为供试品在 KD 值<O．5 的色谱图面积； A0 为供试品色谱图总面积。 【附注】 过柱操作在 10～20℃进行。 书页号：2005 版药典三部附录 71 页 附录Ⅺ K IgG 含 量测定法 (紫外-可见分光 光度法) 本法系依据免疫球蛋白 G(IgG)与相应的抗体特异性结合后，在适宜的电解 质、温度、pH 条件下，产生凝集反应，形成抗原抗体复合物，根据供试品的吸 光度求出供试品中 IgG 的含量。 试剂 (1) 缓冲液 称取三羟甲基氨基甲烷(Tris)12.42g、氯化钠 9g、聚乙二醇 (PEG 6000)50g、牛血清白蛋白(BSA)1g、叠氮钠(NaN3)1g，加水溶解，用 1.0mol/L 盐酸调 pH 至 7.4，加水稀释至 1000ml。 (2) 抗人 IgG 血清 按说明书要求将冻干抗人 IgG 血清复溶，按标示效价取一 定 量抗人 IgG 血清，加缓冲液稀释至抗体最终效价为 1：4(例如，抗人 IgG 血清效价为 1：100，取原液 2ml 加抗体缓冲液 48ml)，充分混匀，0.45μm 膜过滤。4℃保存备用。 IgG 标准品溶液的制备 用生理氯化钠溶液将 IgG 标准品在每 1ml 含 0.2～6.0mg 范围内做 适当的系列稀释(通常做 5 个稀释度)。 供试品溶液的制备 用生理氯化钠溶液将供试品稀释成高、中、低 3 个稀释 度，其 IgG 含量均应在标准曲线范围内。 测定法 取供试品溶液 10μl，加已预热至 37℃的抗体液 1ml，混匀，每个稀释 度 做 2 管，37℃水浴中保温 1 小时，充分混匀，照紫外-可见分光光度法(附录Ⅱ A)， 于波长 340nm 处分别测定吸光度。 用 IgG 标准品溶液 10μl 替代供试品溶液，同法操作
计算标准品和供试品不同稀释度溶液的吸光度的均值。将标准品溶液的IgC 含量的对数对其相应的吸光度的对数进行直线回归,相关系数应不低于0.99;然 后将供试品溶液吸光度的对数值代入回归方程,求得值的反对数,再乘以稀释 倍数,求取每lm供试品溶液lgG含量(gL),再由供试品各稀释度IgG含量求平均值, 即为供试品IgG含量(g/L) 【附注】(1)全部反应管必须在10分钟内测量完毕 (2)设置紫外分光光度计狭缝宽度 Slit width)为2nm (3)每次测定可根据供试品IgG含量,适当调整标准品溶液中IgG含量范围 页码数:2005版药典附录第32页 附录ⅥF0一乙酰基测 定法 试剂(1)2mo/L盐酸羟胺溶液称取盐酸羟胺13.9g,加水溶解并稀释至IOO m,冷处保存 (2)3.5mol/L氢氧化钠溶液称取氢氧化钠14.Og,加水使溶解并稀释至10oml (3)}4mol/L盐酸溶液量取盐酸33.3ml,加水稀释至 lOOm的溶液 (4)0.37mol/L三氯化铁一盐酸溶液称取三氯化铁(FeCl3·6H20)10.Og,加 O.lmol/L盐酸溶液溶解并稀释至100m。 (5)碱性羟胺溶液取等体积的盐酸羟胺溶液(mol/L)与氢氧化钠溶液 (3.5mol/L混合。3小时内使用 对照品溶液的制备精密称取已干燥至恒重的氯化乙酰胆碱2.7mg(或溴化乙 酰胆碱28.3mg),置5oml量瓶中,加0.00lmol/L醋酸钠溶液(pH4.5)溶解并稀释 至刻度,摇匀。 供试品溶液的制备取供试品,用水稀释成O-乙酰基浓度为O.5~2.5mmol/L 的溶液。 测定法精密量取氯化乙酰胆碱(或溴化乙酰胆碱)对照品溶液O.2ml、0.4m、 O.6ml、O.8ml、1Om,分别置试管中,补加水至lml,加新鲜配制的碱性羟胺 溶液2m,摇匀,于室温放置4分钟,加4mol/L盐酸lm,调pH值至1.2±O.2,摇 匀,加O.37mol/L三氯化铁一盐酸溶液lm,摇匀,照紫外一可见分光光度法(附 录ⅡA),在波长540m处测定吸光度。另精密量取上述相应的系列对照品溶液, 自“补加水至lm※’起,除加酸与加碱性羟胺的次序颠倒外,同法操作,用作对应 的空白对照。 精密量取供试品溶液ln置试管中,自“加新鲜配制的碱性羟胺溶液2m※’起,同 法操作。并取供试品溶液Iml,同法操作,用作供试品的空白对照 将标准管各吸光度分别减去相应的空白对照管的吸光度,以标准管中所含的 对照品溶液的体积与对应的吸光度作直线回归,将供试品的吸光度减去供试品 溶液空白吸光度代入直线回归方程,计算出每Im供试品相当于对照品溶液的体 积( 供试品中O-乙酰基含量(mm0l/L)=E×2.5式中2.5为对照品溶液中乙酰胆碱的 含量(mmol/L)
计算标准品和供试品不同稀释度溶液的吸光度的均值。将标准品溶液的 IgG 含量的对数对其相应的吸光度的对数进行直线回归，相关系数应不低于 0.99；然 后将供试品溶液吸光度的对数值代入回归方程，求得值的反对数，再乘以稀释 倍数，求取每 1ml 供试品溶液 IgG 含量(g/L)，再由供试品各稀释度 IgG 含量求平均值， 即为供试品 IgG 含量(g/L)。 【附注】 (1) 全部反应管必须在 10 分钟内测量完毕。 (2) 设置紫外分光光度计狭缝宽度(Slit Width)为 2nm。 (3) 每次测定可根据供试品 IgG 含量，适当调整标准品溶液中 IgG 含量范围。 页码数： 2005 版药典附录第 32 页 附录ⅥF 0 一乙酰基测 定法 试剂 (1)2mol／L 盐酸羟胺溶液 称取盐酸羟胺 13．9g，加水溶解并稀释至 lOO ml，冷处保存。 (2)3．5mol／L 氢氧化钠溶液称取氢氧化钠 14．Og，加水使溶解并稀释至 100ml。 (3)4mol／L 盐酸溶液量取盐酸 33．3ml，加水稀释至 lOOml 的溶液。 (4)0．37mol／L 三氯化铁一盐酸溶液 称取三氯化铁(FeCl3·6H20)10．Og，加 O．1mol／L 盐酸溶液溶解并稀释至 100ml。 (5)碱性羟胺溶液 取等体积的盐酸羟胺溶液(2mol／L)与氢氧化钠溶液 (3．5mol／L)混合。3 小时内使用。 对照品溶液的制备精密称取已干燥至恒重的氯化乙酰胆碱 22．7mg(或溴化乙 酰胆碱 28．3mg)，置 50ml 量瓶中，加 0．001mol／L 醋酸钠溶液(pH4．5)溶解并稀释 至刻度，摇匀。 供试品溶液的制备 取供试品，用水稀释成 O-乙酰基浓度为 O．5～2．5mmol／L 的溶液。 测定法精密量取氯化乙酰胆碱(或溴化乙酰胆碱)对照品溶液 O．2ml、0．4ml、 O．6ml、O．8ml、1_Oml，分别置试管中，补加水至 lml，加新鲜配制的碱性羟胺 溶液 2ml，摇匀，于室温放置 4 分钟，加 4mol／L 盐酸 lml，调 pH 值至 1．2±O．2，摇 匀，加 O．37mol／L 三氯化铁一盐酸溶液 lml，摇匀，照紫外一可见分光光度法(附 录ⅡA)，在波长 540nm 处测定吸光度。另精密量取上述相应的系列对照品溶液， 自“补加水至 lml※’起，除加酸与加碱性羟胺的次序颠倒外，同法操作，用作对应 的空白对照。 精密量取供试品溶液 Iml 置试管中，自“加新鲜配制的碱性羟胺溶液 2ml※’起，同 法操作。并取供试品溶液 Iml，同法操作，用作供试品的空白对照。 将标准管各吸光度分别减去相应的空白对照管的吸光度，以标准管中所含的 对照品溶液的体积与对应的吸光度作直线回归，将供试品的吸光度减去供试品 溶液空白吸光度代入直线回归方程，计算出每 Iml 供试品相当于对照品溶液的体 积(E，m1)。 供试品中 O-乙酰基含量(mm01／L)=E×2．5 式中 2．5 为对照品溶液中乙酰胆碱的 含量(mmol／L)
页码数:2005版药典附录第22页 附录ⅣCSDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳法 大多数蛋白质与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复 合物,使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的净电荷,消除了 不同蛋白质分子的电荷效应,使蛋白质按分子大小分离 仪器恒压或恒流电源,垂直板或圆盘电泳槽和制胶模具 试剂(1)水(电阻率不低于18.2Mg.cm) (2)A液1.5mol/L三羟甲基氨基甲烷一盐酸缓冲液。称取三羟甲基氨基甲 烷18.15g,加适量水溶解,用盐酸调pH值至8.8,加水稀释至100ml (3)B液30%丙烯酰胺一0.8%N,N’一亚甲基双丙烯酰胺溶液(避光保存)。 (4C液1%十二烷基硫酸钠溶液。 (5)D液10%四甲基乙二胺溶液。 (6E液10%过硫酸铵溶液,临用前配制。 (刀F液O.5mol/L三羟甲基氨基甲烷一盐酸缓冲液。称取三羟甲基氨基甲 烷6.05g加适量水溶解,用盐酸调pl值至6.8,加水稀释至100ml (8)电极缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷3g、甘氨酸144g、十二烷基硫酸钠1g, 加适量水溶解,用盐酸调pH值至8.3,加水稀释至1000ml。 (9)供试品缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷O.303g、溴酚蓝2mg、十二烷基硫 酸钠O.8g,量取盐酸0.189m、甘油4ml,加水溶解并稀释至10m,此溶液用于非 还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,如用于还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,则再加 B-巯基乙醇2ml (10)分子量标准供试品的分子量应包括在使用的分子量标准范围之内 (11)固定液量取甲醇250ml、冰醋酸60ml,加水稀释至500ml (12)漂洗液量取乙醇100m、冰醋酸50m,加水稀释至1000m。 (13辅染液称取重铬酸钾10g,量取硝酸2ml加适量水溶解并稀释至200ml 用 前40倍稀释。 (14)银染液称取硝酸银2.04g,加水溶解并稀释至1000ml (15显色液称取碳酸钠30g加适量水溶解,加甲醛O.5m,并稀释至1000ml。 (16)终止液量取冰醋酸10ml加水稀释至1000m (1考马斯亮蓝染色液称取考马斯亮蓝R250lg,加入甲醇200ml、冰醋 酸 50m、水250m混匀。 页码数:2005版药典附录第50页 附录ⅨHSV40核酸序 列检查法 本法系通过设计两对特异引物扩增SV40VPl100bp(2220~2319)和大T抗原C-末端 4bp(2619~3070两个片段,采用聚合酶链反应(PCR检查供试品中是否存在SV40核 酸序列 供试品溶液及对照溶液的制备取供试品400μ1,加2%蛋白酶K溶液25μ1、10%
页码数： 2005 版药典附录第 22 页 附录ⅣC SDS 一聚丙烯酰胺凝胶电泳法 大多数蛋白质与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)按重量比结合成复 合物，使蛋白质分子所带的负电荷远远超过天然蛋白质分子的净电荷，消除了 不同蛋白质分子的电荷效应，使蛋白质按分子大小分离。 仪器恒压或恒流电源，垂直板或圆盘电泳槽和制胶模具。 试剂 (1)水(电阻率不低于 18．2MΩ．cm) (2)A 液 1．5mol／L 三羟甲基氨基甲烷一盐酸缓冲 液。称取三羟甲基氨基甲 烷 18．15g，加适量水溶解，用 盐酸调 pH 值至 8．8，加水稀释至 100ml。 (3)B 液 30％丙烯酰胺一 0．8％N，N’一亚甲基双丙烯酰胺溶液(避光保存)。 (4)C 液 1％十二烷基硫酸钠溶液。 (5)D 液 10％四甲基乙二胺溶液。 (6)E 液 10％过硫酸铵溶液，临用前配制。 (7)F 液 O．5mol／L 三羟甲基氨基甲烷一盐酸缓冲液。称取三羟甲基氨基甲 烷 6．05g 加适量水溶解，用盐酸调 pH 值至 6．8，加水稀释至 100ml。 (8)电极缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷 3g、甘氨酸 14.4g、十二烷基硫酸钠 1g， 加适量水溶解，用盐酸调 pH 值至 8．3，加水稀释至 1000ml。 (9)供试品缓冲液称取三羟甲基氨基甲烷 O．303g、溴酚蓝 2mg、十二烷基硫 酸钠 O．8g，量取盐酸 0．189ml、甘油 4ml，加水溶解并稀释至 10ml，此溶液用于非 还原 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，如用于还原 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，则再加 β-巯基乙醇 2ml。 (10)分子量标准供试品的分子量应包括在使用的分子量标准范围之内。 (11)固定液量取甲醇 250ml、冰醋酸 60ml，加水稀释至 500ml。 (12)漂洗液量取乙醇 100ml、冰醋酸 50ml，加水稀释至 1000m|。 (13)辅染液称取重铬酸钾 10g，量取硝酸 2ml 加适量水溶解并稀释至 200ml。 用 前 40 倍稀释。 (14)银染液称取硝酸银 2．04g，加水溶解并稀释至 1000ml。 (15)显色液称取碳酸钠30g加适量水溶解，加甲醛O．5ml，并稀释至1000ml。 (16)终止液量取冰醋酸 10ml 加水稀释至 1000ml。 (17)考马斯亮蓝染色液称取考马斯亮蓝 R250 1g，加入甲醇 200ml、冰醋 酸 50ml、水 250ml 混匀。 页码数： 2005 版药典附录第 50 页 附录ⅨH SV40 核酸序 列检查法 本法系通过设计两对特异引物扩增 SV40 VPl 100bp(2220～2319)和大 T 抗原 C-末端 451bp(2619～3070)两个片段，采用聚合酶链反应(PCR)检查供试品中是否存在 SV40 核 酸序列。 供试品溶液及对照溶液的制备取供试品 400μ1，加 2％蛋白酶 K 溶液 25μ1、10％
SDS溶液50μl、O.05mol/ L EDTA溶液(pH8.O)10u1,56℃培养1小时,用等体积的 酚 三氯甲烷(1:1)混合液抽提后,再用等体积的三氯甲烷抽提,加2倍体积的乙醇, 20℃放置16小时,以每分钟10000转离心15分钟,沉淀用75%乙醇溶液洗涤干燥 加无DNA酶和RNA酶的水10μ1,使溶解。阳性及阴性对照按上述方法与供试品同 时处理 引物 VPl上游引物:22205※ ACA CAG CAA CCA CAG TGG TTC-3’2240 VPl下游引物:23195※ GTA AAC AGC CCA CAA ATG TCA AC-3’2297 T抗原C末端上游引物:30705※- GAC CTG TGG CTG AGT TIG CTCA-3”3049 T抗原c末端下游引物:26195’ GCT TTA TTT GTA ACC ATT ATA AG-3’2 检查法(1)每个待扩增的供试品引物加量为30×10-12mol,DNA模板加量为1ul, 体积50μl。在PCR仪上以94℃先变性3分钟:94℃变性20秒、50℃C退火20秒、72℃ 延 伸40秒共进行40个循环;72℃延伸3分钟。 (2)扩增产物电泳检査:2%琼脂糖凝胶(每lm含1μg溴化乙锭,缓冲液为1×TAE, 在100ⅴ条件下电泳40分钟,检査扩增片段。VPl扩增片段为100bp,大T抗原C末端 片段为45bp 3)以同样模板重复扩增ⅤP片段,排除污染因素导致的非特异扩增;或将扩增 产物及对照从胶上移至 Hybond N尼龙膜上,与ⅤP探针进行免疫印迹试验以证明 所扩增片段确为VPI片段。 (4)以自动测序仪对供试品及阳性对照的大T抗原C末端扩增产物进行序列测 结果判定阳性对照应得到特异产物,阴性对照应无相应片段,则试验成立 若未能扩出VPl片段,则结果判定为未检出SV40核酸序列。 若扩增出VP片段,可重复试验1次,仍未扩增出ⅤP片段者,判定为未检出 SV40核酸序列。 若重试仍能扩增出ⅤP片段,则应扩增大T抗原C-末端片段,如扩增出大T抗原 C-末端片段,则其扩增产物和阳性对照扩增产物进行测序并比较,核酸序列 致判定为检出S40核酸序列:如未扩增出大T抗原C-末端片段,则可按上述步骤 (1)~(3)重复试验1次,如仍未扩增出大T抗原C末端片段,则可判定为未检出 SV40核酸序列。 页码数:2005版药典附录第24页 附录Ⅴ 除另有规定外,水溶液的pH值应以玻璃电极为指示电极、饱和甘汞电极为 参比电极的酸度计进行测定。酸度计应定期进行计量检定,并符合国家有关规 定。测定前,应采用下列标准缓冲液校正仪器,也可用国家标准物质管理部门 发放的标示pH值准确至0.0lp单位的各种标准缓冲液校正仪器 1.仪器校正用的标准缓冲液
SDS 溶液 50μl、O．05mol／L EDTA 溶液(pH8．O)10μ1，56℃培养 1 小时，用等体积的 酚 -三氯甲烷(1：1)混合液抽提后，再用等体积的三氯甲烷抽提，加 2 倍体积的乙醇， -20℃放置 16 小时，以每分钟 10000 转离心 15 分钟，沉淀用 75％乙醇溶液洗涤干燥， 加无 DNA 酶和 RNA 酶的水 10μl，使溶解。阳性及阴性对照按上述方法与供试品同 时处理。 引物 VPl 上游引物：2220 5※_ACA CAG CAA CCA CAG TGG TTC-3’2240 VPl 下游引物：2319 5※_GTA AAC AGC CCA CAA ATG TCA AC-3’2297 T 抗原 C_末端上游引物：3070 5※-GAC CTG TGG CTG AGT TTG CTC A-3’3049 T 抗原 c_末端下游引物：2619 5’一 GCT TTA TTT GTA ACC ATT ATA AG-3’2641 检查法 (1)每个待扩增的供试品引物加量为 30×10-12 mol，DNA 模板加量为 1μl， 总 体积 50μl。在 PCR 仪上以 94℃先变性 3 分钟；94℃变性 20 秒、50℃C 退火 20 秒、72℃ 延 伸 40 秒共进行 40 个循环；72℃延伸 3 分钟。 (2)扩增产物电泳检查：2％琼脂糖凝胶(每 lml 含 1μg 溴化乙锭)，缓冲液为 1×TAE， 在 100V 条件下电泳 40 分钟，检查扩增片段。VPl 扩增片段为 100bp，大 T 抗原 C_末端 片段为 451bp。 (3)以同样模板重复扩增 VPl 片段，排除污染因素导致的非特异扩增；或将扩增 产物及对照从胶上移至 Hybond N 尼龙膜上，与 VPl 探针进行免疫印迹试验以证明 所扩增片段确为 VPl 片段。 (4)以自动测序仪对供试品及阳性对照的大 T 抗原 C_末端扩增产物进行序列测 定。 结果判定 阳性对照应得到特异产物，阴性对照应无相应片段，则试验成立。 若未能扩出 VPl 片段，则结果判定为未检出 SV40 核酸序列。 若扩增出 VPl 片段，可重复试验 1 次，仍未扩增出 VPl 片段者，判定为未检出 SV40 核酸序列。 若重试仍能扩增出 VPl 片段，则应扩增大 T 抗原 C-末端片段，如扩增出大 T 抗原 C-末端片段，则其扩增产物和阳性对照扩增产物进行测序并比较，核酸序列一 致判定为检出 SV40 核酸序列；如未扩增出大 T 抗原 C-末端片段，则可按上述步骤 (1)～(3)重复试验 1 次，如仍未扩增出大 T 抗原 C_末端片段，则可判定为未检出 SV40 核酸序列。 页码数： 2005 版药典附录第 24 页 附录 V 除另有规定外，水溶液的 pH 值应以玻璃电极为指示电极、饱和甘汞电极为 参比电极的酸度计进行测定。酸度计应定期进行计量检定，并符合国家有关规 定。测定前，应采用下列标准缓冲液校正仪器，也可用国家标准物质管理部门 发放的标示 pH 值准确至 0．01pH 单位的各种标准缓冲液校正仪器。 1．仪器校正用的标准缓冲液
(1)草酸盐标准缓冲液精密称取在54~C±3~C干燥4~5小时的草酸三氢钾12.71g, 加水使溶解并稀释至1000ml。 (2)苯二甲酸盐标准缓冲液精密称取在115℃±5℃干燥2~3小时的邻苯二甲 酸氢钾10.21g,加水使溶解并稀释至1000nl 3)磷酸盐标准缓冲液精密称取在15℃士5℃干燥2~3小时的无水磷酸氢二钠 3.55g与磷酸二氢钾3.40g,加水使溶解并稀释至100mnl 至Bb(4)硼砂标准缓冲液精密称取硼砂3.81g(注意避免风化),加水使溶解并稀释 l,置聚乙烯塑料瓶中,密塞,避免空气中二氧化碳进入。 液,三、(5)氢氧化钙标准缓冲液于25℃,用无二氧化碳的水制备氢氧化钙的饱和溶 清液使用。存放时应防止空气中二氧化碳进入。一旦出现浑浊,应弃 去重配 上述标准缓冲溶液必须用pH值基准试剂配制。不同温度时各种标准缓冲液 的pH值如下表(表略)。 2.注意事项 测定pH值时,应严格按仪器的使用说明书操作,并注意下列事项。 (1)测定前,按各品种项下的规定,选择二种pH值约相差3个pH单位的标准缓 冲液,并使供试液的pH值处于二者之间 器欢)取与供试液pH值较接近的第一种标准缓冲液对仪器进行校正(定位),使仪 与表列数值一致 (3)仪器定位后,再用第二种标准缓冲液核对仪器示值,误差应不大于±0.02p 单位。若大于此偏差,则应小心调节斜率,使示值与第二种标准缓冲液的表列 数值相符。重复上述定位与斜率调节操作,至仪器示值与标准缓冲液的规定数 值相差不大于0.02pH单位。否则,需检查仪器或更换电极后,再行校正至符合 要求 (4)每次更换标准缓冲液或供试液前,应用纯化水充分洗涤电极,然后将水吸 尽,也可用所换的标准缓冲液或供试液洗涤。 用(S)在测定高pH值的供试品和标准缓冲液时,应注意碱误差的问题,必要时选 的玻璃电极测定 6)对弱缓冲液(如水)的pH值测定,先用苯二甲酸盐标准缓冲液校正仪器后测定 供试液,并重取供试液再测,直至pH值的读数在1分钟内改变不超过土0·05止;然 后再用硼砂标准缓冲液校正仪器,再如上法测定;二次pH值的读数相差应不超 过O.1,取二次读数的平均值为其pH值 (7)配制标准缓冲液与溶解供试品的水,应是新沸过并放冷的纯化水,其pH值 应为5.5~7.0。 (8)标准缓冲液一般可保存2~3个月,但发现有浑浊、发霉或沉淀等现象时 不能继续使用 页码数:2005版药典附录第67页 附录ⅪE白喉抗毒素效价测定法(家兔皮肤试验法) 本法系根据抗毒素能中和毒素的作用,将供试品与标准品进行对比试验 推算出每lml供试品中所含抗毒素的国际单位数(IU/m1) 试剂稀释液(硼酸盐缓冲盐水)称取氯化钠8.5g、硼酸4.5g、四硼酸钠
(1)草酸盐标准缓冲液精密称取在 54~C±3~C 干燥 4～5 小时的草酸三氢钾 12．71g， 加水使溶解并稀释至 1000ml。 （2）苯二甲酸盐标准缓冲液 精密称取在 115℃± 5℃干燥 2～3 小时的邻苯二甲 酸氢钾 10．21g，加水使溶解并稀释至 1000ml。 (3)磷酸盐标准缓冲液 精密称取在 115℃士 5℃干燥 2～3 小时的无水磷酸氢二钠 3．55g 与磷酸二氢钾 3．40g，加水使溶解并稀释至 1000ml。 (4)硼砂标准缓冲液精密称取硼砂 3．81g(注意避免风化)，加水使溶解并稀释 至 1000ml，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免空气中二氧化碳进入。 (5)氢氧化钙标准缓冲液 于 25℃，用无二氧化碳的水制备氢氧化钙的饱和溶 液，取上清液使用。存放时应防止空气中二氧化碳进入。一旦出现浑浊，应弃 去重配。 上述标准缓冲溶液必须用 pH 值基准试剂配制。不同 温度时各种标准缓冲液 的 pH 值如下表（表略）。 2．注意事项 测定 pH 值时，应严格按仪器的使用说明书操作，并注意下列事项。 (1)测定前，按各品种项下的规定，选择二种 pH 值约相差 3 个 pH 单位的标准缓 冲液，并使供试液的 pH 值处于二者之间。 (2)取与供试液 pH 值较接近的第一种标准缓冲液对仪器进行校正(定位)，使仪 器示值与表列数值一致。 (3)仪器定位后，再用第二种标准缓冲液核对仪器示值，误差应不大于±0．02pH 单位。若大于此偏差，则应小心调节斜率，使示值与第二种标准缓冲液的表列 数值相符。重复上述定位与斜率调节操作，至仪器示值与标准缓冲液的规定数 值相差不大于 0．02pH 单位。否则，需检查仪器或更换电极后，再行校正至符合 要求。 (4)每次更换标准缓冲液或供试液前，应用纯化水充分洗涤电极，然后将水吸 尽，也可用所换的标准缓冲液或供试液洗涤。 (5)在测定高 pH 值的供试品和标准缓冲液时，应注意碱误差的问题，必要时选 用适当的玻璃电极测定。 (6)对弱缓冲液(如水)的 pH 值测定，先用苯二甲酸盐标准缓冲液校正仪器后测定 供试液，并重取供试液再测，直至 pH 值的读数在 1 分钟内改变不超过±0·05 止；然 后再用硼砂标准缓冲液校正仪器，再如上法测定；二次 pH 值的读数相差应不超 过 O．1，取二次读数的平均值为其 pH 值。 (7)配制标准缓冲液与溶解供试品的水，应是新沸过并放冷的纯化水，其 pH 值 应为 5．5～7．0。 (8)标准缓冲液一般可保存 2～3 个月，但发现有浑浊、发霉或沉淀等现象时， 不能继续使用。 页码数： 2005 版药典附录第 67 页 附录ⅪE 白喉抗毒素效价测定法(家兔皮肤试验法) 本法系根据抗毒素能中和毒素的作用，将供试品与标准品进行对比试验， 推算出每 lml 供试品中所含抗毒素的国际单位数(IU／m1)。 试剂 稀释液(硼酸盐缓冲盐水) 称取氯化钠 8．5g、硼酸 4．5g、四硼酸钠
Na2B4(7·10H20)O.5g,加水使溶解至100mnl,过滤,灭菌后pH值为7.O~7.2 白喉抗毒素标准品溶液的制备取白喉抗毒素标准品适量,稀释至每lmI含 1/5IU,即与毒素等量混合后每O.Iml注射量中含1/300U。白喉抗毒素标准 品原液的一次吸取量应不低于0.5ml。 供试品溶液的制备将供试品稀释成数个稀释度,使每lm含抗毒素约 1/15IU,其稀释度间隔约为5%~10% 测定法将毒素稀释至每lml含20个试验量(1/300Lr),即与抗毒素等量混合后 每O.lml注射量中含1个试验量(1/300Ir)。定量吸取稀释后的抗毒素标准品溶液 及不同稀释度的供试品溶液分别加入小试管中,每管加入等量的稀释毒素溶 液,混合均匀,加塞,37℃结合1小时后,立即注射。 凡皮肤有发炎或大量斑点现象者不应使用。每份供试品溶液注射2只家兔,参部脱毛, 选用体重2~3kg的健康白皮肤家兔,试验前1日用适宜方法进行背部脱毛, 只家兔不能超过4份供试品溶液。每稀释度注射O.1ml于家兔皮内(应在近背脊 两侧)。每只家兔至少应包括3个不同注射部位(前、中、后)的对照试验。标准品 溶液与供试品溶液不得用同一支注射器注射 结果判定试验家兔于注射后48小时及72小时各观察1次,并测量反应面积 以48~72小时结果作最后判定。注射对照部位一般于48~72小时内轻度发红,其 直径应为10~14mm。供试品之效价应以与多数对照的反应强度相同之最高稀释 度判定之,但反应强度不得超过对照。有下列情况之一者应重试 (1)对照反应不符合规定标准 (2)供试品的稀释度过高或过低 (3)反应不规则。 【附注】毒素由国家药品检定机构提供,亦可自行制备,但应选经保存1年 以上、毒力适宜的毒素。试验用的毒素须以国家药品检定机构分发的标准抗毒 素准确标定其试验量(1/300Lr),并应每3个月复检一次。毒素应保存于2~8℃避 光处,并加入甲苯或其他适宜防腐剂。 页码数:2005版药典附录第34页 附录ⅥM苯酚 测定法 本法系依据溴酸盐溶液与盐酸反应产生溴,遇苯酚生成三溴苯酚,过量的 溴与碘化钾反应释岀碘,析岀的碘用硫代硫酸钠滴定液滴定,根据硫代硫酸 钠滴定液的消耗量,可计算出供试品中苯酚的含量。 测定法精密量取供试品lm,置具塞锥型瓶中,加水50ml,精密加人 0.02mol/L溴溶液(取溴酸钾O.56g,加溴化钾3g,加水溶解并稀释成1000m5~ 25ml(供试品含苯酚量0.3%~0.5%时加25ml,小于O.3%则加15m1),沿瓶壁加 入6mol/L盐酸溶液Ioml,摇匀,密塞,在暗处放置30分钟后,加25%碘化钾溶液 2ml于具塞锥型瓶颈口,稍启瓶塞,使流下,密塞,摇匀。以少量水洗瓶颈,用 硫代硫酸钠滴定液(O.02mol/L)滴定至近终点时,加淀粉指示液约O.5m,滴定 至蓝色消失。并将滴定的结果用空白试验校正。 按下式计算 苯酚含量(%)=(Vo-Vl)*c*15.69*1001000
(Na2 B4()7·10H20)O．5g，加水使溶解至 1000ml，过滤，灭菌后 pH 值为 7．O～7．2。 白喉抗毒素标准品溶液的制备取白喉抗毒素标准品适量，稀释至每 lml 含 1／5 IU，即与毒素等量混合后每 O．1ml 注射量中含 1／300 IU。白喉抗毒素标准 品原液的一次吸取量应不低于 0．5ml。 供试品溶液的制备将供试品稀释成数个稀释度，使每 lml 含抗毒素约 1／15 IU，其稀释度间隔约为 5％～10％。 测定法 将毒素稀释至每 lml 含 20 个试验量(1／300 Lr)，即与抗毒素等量混合后 每 O．1ml 注射量中含 1 个试验量(1／300 Lr)。定量吸取稀释后的抗毒素标准品溶液 及不同稀释度的供试品溶液分别加入小试管中，每管加入等量的稀释毒素溶 液，混合均匀，加塞，37℃结合 1 小时后，立即注射。 选用体重 2～3kg 的健康白皮肤家兔，试验前 1 日用适宜方法进行背部脱毛， 凡皮肤有发炎或大量斑点现象者不应使用。每份供试品溶液注射 2 只家兔，每 只家兔不能超过 4 份供试品溶液。每稀释度注射 O．1ml 于家兔皮内(应在近背脊 两侧)。每只家兔至少应包括 3 个不同注射部位(前、中、后)的对照试验。标准品 溶液与供试品溶液不得用同一支注射器注射。 结果判定试验家兔于注射后 48 小时及 72 小时各观察 1 次，并测量反应面积。 以 48～72 小时结果作最后判定。注射对照部位一般于 48～72 小时内轻度发红，其 直径应为 10～14mm。供试品之效价应以与多数对照的反应强度相同之最高稀释 度判定之，但反应强度不得超过对照。有下列情况之一者应重试： (1)对照反应不符合规定标准； (2)供试品的稀释度过高或过低； (3)反应不规则。 【附注】毒素由国家药品检定机构提供，亦可自行制备，但应选经保存 1 年 以上、毒力适宜的毒素。试验用的毒素须以国家药品检定机构分发的标准抗毒 素准确标定其试验量(1／300 Lr)，并应每 3 个月复检一次。毒素应保存于 2～8℃避 光处，并加入甲苯或其他适宜防腐剂。 页码数： 2005 版药典附录第 34 页 附录ⅥM 苯酚 测定法 本法系依据溴酸盐溶液与盐酸反应产生溴，遇苯酚生成三溴苯酚，过量的 溴与碘化钾反应释出碘，析出的碘用硫代硫酸钠滴定液滴定，根据硫代硫酸 钠滴定液的消耗量，可计算出供试品中苯酚的含量。 测定法精密量取供试品 lml，置具塞锥型瓶中，加水 50ml，精密加人 0．02mol／L 溴溶液(取溴酸钾 O．56g，加溴化钾 3g，加水溶解并稀释成 1000m1)15～ 25ml(供试品含苯酚量 0．3％～0．5％时加 25ml，小于 O．3％则加 15 m1)，沿瓶壁加 入 6mol／L 盐酸溶液 lOml，摇匀，密塞，在暗处放置 30 分钟后，加 25％碘化钾溶液 2ml 于具塞锥型瓶颈口，稍启瓶塞，使流下，密塞，摇匀。以少量水洗瓶颈，用 硫代硫酸钠滴定液(O．02mol／L)滴定至近终点时，加淀粉指示液约 O．5ml，滴定 至蓝色消失。并将滴定的结果用空白试验校正。 按下式计算 苯酚含量(％)=(Vo-V1)*c*15．69*100/1000
式中VO为空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液的体积,m VI为供试品消耗硫代硫酸钠滴定液的体积,ml c为硫代硫酸钠滴定液的浓度,mo/L: 15.69为苯酚相对分子质量的1/6。 【附注】(1)硫代硫酸钠滴定液(O.Imol/L)的制备及标定取硫代硫酸钠26g与 无水碳酸钠0·20g,加新沸过的冷水适量溶解并稀释成100mnl,摇匀,放置1个月 后滤过。取在120~C干燥至恒重的基准重铬酸钾O·15g,精密称定,置碘瓶中,加 水5oml溶解,加碘化钾2·Og,轻轻振摇使溶解,加稀硫酸(5.7-10040m,摇匀 密塞:在暗处放置10分钟后,加水250ml稀释,用本液滴定至近终点时,加淀粉 指示液(取可溶性淀粉O·5g,加水5m混悬后,缓缓倾λl0oml沸水中,随加随搅 拌,继续煮沸2分钟,冷却,倾取上层清液。本液应临用配制)3ml,继续滴定至 蓝色消失而显亮绿色,并将滴定的结果用空白试验校正。每lm硫代硫酸钠滴定 液(O·Imol/D)相当于4.903mg重铬酸钾。根据本液的消耗量与重铬酸钾的取用 量,算出本液的浓度,即得。 (2)硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/υ)的制备精密量取硫代硫酸钠滴定液 (o.lmol/L)l0oml,加水准确稀释至500m,摇匀 (3)可做限度测定。 页码数:2005版药典附录第26页 附录ⅤC崩解时限检查法 本法系用于检査曰服固体制剂在规定条件下的崩解情况。 崩解系指口服固体制剂在规定条件下全部崩解溶散或成碎粒,除不溶性包 衣材料或破碎的胶囊壳外,应全部通过筛网。如有少量不能通过筛网,但已软 化或轻质上漂且无硬心者,可作符合规定论 凡规定检査溶出度、释放度或融变时限的制剂,不再附录VC崩解时限检査 法进行崩解时限检查 片剂 仪器装置采用升降式崩解仪,主要结构为一能升降的金属支架与下端镶有 筛网的吊篮,并附有挡板 升降的金属支架上下移动距离为55mm±2mm,往返频率为每分钟30~32次 吊篮玻璃管6根,管长77.5mm±2.5mm,内径21.5mm,壁厚2mm:透明塑 料 板2块,直径90mm,厚6mm,板面有6个孔,孔径26mm不锈钢板1块(放在上面一块 塑料板上),直径9omm,厚lmm,板面有6个孔,孔径2mm;不锈钢丝筛网1张(放在 下面一块塑料板下),直径9omm,筛孔内径2.0mm:以及不锈钢轴1根(固定在上 面一块塑料板与不锈钢板上),长80mm。将上述玻璃管6根垂直置于2块塑料板的 孔中,并用3只螺丝将不锈钢板、塑料板和不锈钢丝筛网固定,即得(如图1) 单位: mI 图1(图略) 挡板为一平整光滑的透明塑料块,相对密度1.18~1.20,直径20.7mm± 0.15mm,厚9.5mm±O.15mm;挡板共有5个孔,孔径2mm,中央1个孔,其余4个 孔距中心6mm,各孔间距相等;挡板侧边有4个等距离的ⅴ形槽,Ⅴ形槽上端宽
式中 VO 为空白试验消耗硫代硫酸钠滴定液的体积，ml； V1 为供试品消耗硫代硫酸钠滴定液的体积，ml； c 为硫代硫酸钠滴定液的浓度，mol／L； 15．69 为苯酚相对分子质量的 1／6。 【附注】 (1)硫代硫酸钠滴定液(O．1mol／L)的制备及标定取硫代硫酸钠 26g 与 无水碳酸钠 0·20g，加新沸过的冷水适量溶解并稀释成 1000ml，摇匀，放置 1 个月 后滤过。取在 120~C 干燥至恒重的基准重铬酸钾 O·15g，精密称定，置碘瓶中，加 水 50ml 溶解，加碘化钾 2·Og，轻轻振摇使溶解，加稀硫酸(5．7—100)40ml，摇匀， 密塞；在暗处放置 10 分钟后，加水 250ml 稀释，用本液滴定至近终点时，加淀粉 指示液(取可溶性淀粉 O·5g，加水 5ml 混悬后，缓缓倾入 100ml 沸水中，随加随搅 拌，继续煮沸 2 分钟，冷却，倾取上层清液。本液应临用配制)3ml，继续滴定至 蓝色消失而显亮绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每 lml 硫代硫酸钠滴定 液(O·lmol／L)相当于 4．903mg 重铬酸钾。根据本液的消耗量与重铬酸钾的取用 量，算出本液的浓度，即得。 (2)硫代硫酸钠滴定液(0．02mol／L)的制备 精密量取硫代硫酸钠滴定液 (o．1mol／L)100ml，加水准确稀释至 500ml，摇匀。 (3)可做限度测定。 页码数： 2005 版药典附录第 26 页 附录 V C 崩解时限检查法 本法系用于检查曰服固体制剂在规定条件下的崩解情况。 崩解系指口服固体制剂在规定条件下全部崩解溶散或成碎粒，除不溶性包 衣材料或破碎的胶囊壳外，应全部通过筛网。如有少量不能通过筛网，但已软 化或轻质上漂且无硬心者，可作符合规定论。 凡规定检查溶出度、释放度或融变时限的制剂，不再附录 V C 崩解时限检查 法进行崩解时限检查。 一、片剂 仪器装置采用升降式崩解仪，主要结构为一能升降的金属支架与下端镶有 筛网的吊篮，并附有挡板。 升降的金属支架上下移动距离为 55mm±2mm，往返频率为每分钟 30～32 次。 吊篮 玻璃管 6 根，管长 77．5mm±2．5mm，内径 21．5mm，壁厚 2mm；透明塑 料 板 2 块，直径 90mm，厚 6mm，板面有 6 个孔，孔径 26mm 不锈钢板 1 块(放在上面一块 塑料板上)，直径 90mm，厚 lmm，板面有 6 个孔，孔径 22mm;不锈钢丝筛网 1 张(放在 下面一块塑料板下)，直径 90mm，筛孔内径 2．0mm；以及不锈钢轴 1 根(固定在上 面一块塑料板与不锈钢板上)，长 80mm。将上述玻璃管 6 根垂直置于 2 块塑料板的 孔中，并用 3 只螺丝将不锈钢板、塑料板和不锈钢丝筛网固定，即得(如图 1)。 单位：mm 图 1 （图略） 挡板为一平整光滑的透明塑料块，相对密度 1．18～1．20，直径 20．7mm± 0．15mm，厚 9．5mm±O．15mm；挡板共有 5 个孔，孔径 2mm，中央 1 个孔，其余 4 个 孔距中心 6mm，各孔间距相等；挡板侧边有 4 个等距离的 V 形槽，V 形槽上端宽
9.5mm,深2.55mm,底部开口处的宽与深度均为1.6mm(如图2)。 检查法将吊篮通过上端的不锈钢轴悬挂于金属支架单位:mm 图2(图略) 上,浸入1000m烧杯中,并调节吊篮位置使其下降时筛网距烧杯底部25mm,烧 杯内盛有温度为37~C土1℃的水,调节水位高度使吊篮上升时筛网在水面下 15mm处 除另有规定外,取供试品6片,分别置上述吊篮的玻璃管中,启动崩解仪进 行检査,各片均应在15分钟内全部崩解。如有1片不能完全崩解,应另取6片复 试,均应符合规定 薄膜衣片,按上述装置与方法检査,并可改在盐酸溶液(9一1OOO中进行检 查,应在30分钟内全部崩解。如有1片不能完全崩解,应另取6片复试,均应符 合规定 糖衣片,按上述装置与方法检查,应在1小时内全部崩解。如有1片不能完全 崩解,应另取6片复试,均应符合规定。 肠溶衣片,按上述装置与方法,先在盐酸溶液(9-1000中检查2小时,每片均不 得有裂缝、崩解或软化现象:继将吊篮取出,用少量水洗涤后,每管加入挡 板1块,再按上述方法在磷酸盐缓冲液(pH6.8)中进行检查,1小时内应全部崩 解。如有1片不能完全崩解,应另取6片复试,均应符合规定。 含片,除另有规定外,按上述装置和方法检查,各片均应在30分钟内全部崩 解或溶化。如有1片不能完全崩解,应另取6片复试,均应符合规定。 舌下片,除另有规定外,按上述装置和方法检查,各片均应在5分钟内全部崩 解并溶化。如有1片不能完全崩解,应另取6片复试,均应符合规定。 可溶片,除另有规定外,水温为15~25~C,按上述装置和方法检査,各片均应 在3分钟内全部崩解并溶化。如有1片不能完全崩解,应另取6片复试,均应符合 规定。 结肠定位肠溶片,除另有规定外,按上述装置照品种项下规定检查,各片在 盐酸溶液(9-1000及pH6.8以下的磷酸盐缓冲液中均应不释放或不崩解,而在 pH7.8~8.o的磷酸盐缓冲液中1小时内应全部释放或崩解,片心亦应崩解。如 有1片不能完全崩解,应另取6片复试,均应符合规定。 泡腾片,取1片,置250ml烧杯中,烧杯内盛有200m水,水温为15~25~C,有许 多气泡放出,当片剂或碎片周围的气体停止逸出时,片剂应溶解或分散在水 中,无聚集的颗粒剩留。除另有规定外,同法检查6片,各片均应在5分钟内崩 解。如有1片不能完全崩解,应另取6片复试,均应符合规定。 胶囊剂 硬胶囊剂或软胶囊剂,除另有规定外,取供试品6粒,按片剂的装置与方法 (如胶囊漂浮于液面,可加挡板)裣检査。硬胶囊应在30分钟内全部崩解,软胶囊应 在1小时内全部崩解。软胶囊可改在人工胃液中进行检査。如有1粒不能完全崩 解,应另取6粒复试,均应符合规定 肠溶胶囊剂,除另有规定外,取供试品6粒,按上述装置与方法,先在盐酸 溶液(Ω一100O中检査2小时,每粒的囊壳均不得有裂缝或崩解现象:继将吊篮 取出,用少量水洗涤后,每管加入挡板,再按上述方法,改在人工肠液中进行 检査,1小时内应全部崩解。如有1粒不能完全崩解,应另取6粒复试,均应符合 规定。 三、滴丸剂
9．5mm，深 2．55mm，底部开口处的宽与深度均为 1．6mm(如图 2)。 检查法将吊篮通过上端的不锈钢轴悬挂于金属支架单位：mm 图 2（图略） 上，浸入 1000ml 烧杯中，并调节吊篮位置使其下降时筛网距烧杯底部 25mm，烧 杯内盛有温度为 37~C 土 1℃的水，调节水位高度使吊篮上升时筛网在水面下 15mm 处。 除另有规定外，取供试品 6 片，分别置上述吊篮的玻璃管中，启动崩解仪进 行检查，各片均应在 15 分钟内全部崩解。如有 1 片不能完全崩解，应另取 6 片复 试，均应符合规定。 薄膜衣片，按上述装置与方法检查，并可改在盐酸溶液(9 一 lOOO)中进行检 查，应在 30 分钟内全部崩解。如有 1 片不能完全崩解，应另取 6 片复试，均应符 合规定。 糖衣片，按上述装置与方法检查，应在 1 小时内全部崩解。如有 1 片不能完全 崩解，应另取 6 片复试，均应符合规定。 肠溶衣片，按上述装置与方法，先在盐酸溶液(9-1000)中检查 2 小时，每片均不 得有裂缝、崩解或软化现象；继将吊篮取出，用少量水洗涤后，每管加入挡 板 1 块，再按上述方法在磷酸盐缓冲液(pH6．8)中进行检查，1 小时内应全部崩 解。如有 1 片不能完全崩解，应另取 6 片复试，均应符合规定。 含片，除另有规定外，按上述装置和方法检查，各片均应在 30 分钟内全部崩 解或溶化。如有 1 片不能完全崩解，应另取 6 片复试，均应符合规定。 舌下片，除另有规定外，按上述装置和方法检查，各片均应在 5 分钟内全部崩 解并溶化。如有 1 片不能完全崩解，应另取 6 片复试，均应符合规定。 可溶片，除另有规定外，水温为 15～25~C，按上述装置和方法检查，各片均应 在 3 分钟内全部崩解并溶化。如有 1 片不能完全崩解，应另取 6 片复试，均应符合 规定。 结肠定位肠溶片，除另有规定外，按上述装置照品种项下规定检查，各片在 盐酸溶液(9—1000)及 pH6．8 以下的磷酸盐缓冲液中均应不释放或不崩解，而在 pH7．8～8．o 的磷酸盐缓冲液中 1 小时内应全部释放或崩解，片心亦应崩解。如 有 1 片不能完全崩解，应另取 6 片复试，均应符合规定。 泡腾片，取 1 片，置 250ml 烧杯中，烧杯内盛有 200ml 水，水温为 15～25~C，有许 多气泡放出，当片剂或碎片周围的气体停止逸出时，片剂应溶解或分散在水 中，无聚集的颗粒剩留。除另有规定外，同法检查 6 片，各片均应在 5 分钟内崩 解。如有 1 片不能完全崩解，应另取 6 片复试，均应符合规定。 二、胶囊剂 硬胶囊剂或软胶囊剂，除另有规定外，取供试品 6 粒，按片剂的装置与方法 (如胶囊漂浮于液面，可加挡板)检查。硬胶囊应在 30 分钟内全部崩解，软胶囊应 在 1 小时内全部崩解。软胶囊可改在人工胃液中进行检查。如有 1 粒不能完全崩 解，应另取 6 粒复试，均应符合规定。 肠溶胶囊剂，除另有规定外，取供试品 6 粒，按上述装置与方法，先在盐酸 溶液(9 一 lOOO)中检查 2 小时，每粒的囊壳均不得有裂缝或崩解现象；继将吊篮 取出，用少量水洗涤后，每管加入挡板，再按上述方法，改在人工肠液中进行 检查，1 小时内应全部崩解。如有 1 粒不能完全崩解，应另取 6 粒复试，均应符合 规定。 三、滴丸剂
按片剂的装置,但不锈钢丝网的筛孔内径应为O.425mm;除另有规定外,取 供试品6粒,按上述方法检查,应在30分钟内全部溶散,包衣滴丸应在1小时内 全部溶散。如有1粒不能完全溶散,应另取6粒复试,均应符合规定。 以明胶为基质的滴丸,可改在人工胃液中进行检查 【附注】人工胃液取稀盐酸16.4ml,加水约800ml与胃蛋白酶10g,摇匀后,加 水稀释成1000ml,即得 人工肠液即磷酸盐缓冲液(含胰酶)pH6.8)(见二部附录ⅹⅤD缓冲液 书页号:2005版药典三部附录11页 附录IL鼻 用制剂 鼻用制剂系指直接用于鼻腔,发挥局部或全身治疗作用的生物制品。鼻用 制剂可分为鼻用液体制剂(滴鼻剂、洗鼻剂和鼻用喷雾剂)、鼻用半固体制剂(鼻 用软膏剂、鼻用乳膏剂和鼻用凝胶剂)、鼻用同体制剂鼻用散剂、鼻用粉雾剂 和鼻用棒剂)等。 鼻用制剂在生产与贮藏期间应符合下列有关规定 所用生物制品原液、半成品和成品的生产及质量控制应符合相关品种 要求 鼻用制剂通常含有如调节黏度、控制pH值、増加活性成分溶解、提高 制剂稳定性或能够赋形的辅料。除另有规定外,多剂量水性介质鼻用制剂应 添加适宜浓度的抑菌剂。制剂本身如有足够抑菌性能,可不加抑菌剂。 鼻用制剂多剂量包装容器应配有完整的滴管或适宜材料组合成套, 般应配有橡胶乳头或塱料乳头的螺旋盖滴管。容器应无毒并淸洗干净,不应 与药物或辅料发生理化作用,容器的瓶壁要有一定的厚度且均匀,除另有规 定外,装量应不超过10m1或5g 四、鼻用溶液制剂应澄清,不得有沉淀异物:鼻用混悬液可能含沉淀物, 但经振摇易分散:鼻用乳液可能有油水相分离,但经振摇易恢复成乳液。 五、鼻用制剂应无刺激性,对鼻黏膜及其纤毛不应产生副作用。如为水性 介质的鼻用制剂应等渗 六、除另有规定外,鼻用制剂还应符合相应剂型制剂通则项下有关规定, 如鼻用喷雾剂应符合喷雾剂的规定 除另有规定外,鼻用制剂应置2~8℃避光贮存和运输。 鼻用制剂应进行以下相应检查。 【重量差异或装量差异】除另有规定外,单剂量包装的鼻用固体制剂或半 固体制剂重(装量差异限度应符合规定 检查法取供试品20个,分别称量内容物,计算平均重量,超过平均重量的 ±10%者,不得过2个,并不得有超过平均重量的±20%者 凡规定检查含量均匀度的鼻用制剂,可不作重(装)量差异的检查 【装量】除另有规定外,单剂量包装的鼻用液体制剂应符合规定 取供试品10个,分别将内容物倾尽,测定其装量,均不得少于其标示量 多剂量包装的鼻用制剂,照最低装量检査法(附录VF)检查,应符合规定 【微生物限度】除另有规定外,照微生物限度检查法(附录ⅫG检查,应符
按片剂的装置，但不锈钢丝网的筛孔内径应为 O．425mm；除另有规定外，取 供试品 6 粒，按上述方法检查，应在 30 分钟内全部溶散，包衣滴丸应在 1 小时内 全部溶散。如有 1 粒不能完全溶散，应另取 6 粒复试，均应符合规定。 以明胶为基质的滴丸，可改在人工胃液中进行检查。 【附注】人工胃液取稀盐酸 16．4ml，加水约 800ml 与胃蛋白酶 10g，摇匀后，加 水稀释成 1000ml，即得。 人工肠液即磷酸盐缓冲液(含胰酶)(pH 6．8)(见二部附录 XV D 缓冲液)。 书页号：2005 版药典三部附录 11 页 附录I L 鼻 用制剂 鼻用制剂系指直接用于鼻腔，发挥局部或全身治疗作用的生物制品。鼻用 制剂可分为鼻用液体制剂(滴鼻剂、洗鼻剂和鼻用喷雾剂)、鼻用半固体制剂(鼻 用软膏剂、鼻用乳膏剂和鼻用凝胶剂)、鼻用同体制剂(鼻用散剂、鼻用粉雾剂 和鼻用棒剂)等。 鼻用制剂在生产与贮藏期间应符合下列有关规定。 一、所用生物制品原液、半成品和成品的生产及质量控制应符合相关品种 要求。 二、鼻用制剂通常含有如调节黏度、控制 pH 值、增加活性成分溶解、提高 制剂稳定性或能够赋形的辅料。除另有规定外，多剂量水性介质鼻用制剂应 添加适宜浓度的抑菌剂。制剂本身如有足够抑菌性能，可不加抑菌剂。 三、鼻用制剂多剂量包装容器应配有完整的滴管或适宜材料组合成套，一 般应配有橡胶乳头或塑料乳头的螺旋盖滴管。容器应无毒并清洗干净，不应 与药物或辅料发生理化作用，容器的瓶壁要有一定的厚度且均匀，除另有规 定外，装量应不超过 10m1 或 5g。 四、鼻用溶液制剂应澄清，不得有沉淀异物；鼻用混悬液可能含沉淀物， 但经振摇易分散；鼻用乳液可能有油水相分离，但经振摇易恢复成乳液。 五、鼻用制剂应无刺激性，对鼻黏膜及其纤毛不应产生副作用。如为水性 介质的鼻用制剂应等渗。 六、除另有规定外，鼻用制剂还应符合相应剂型制剂通则项下有关规定， 如鼻用喷雾剂应符合喷雾剂的规定。 除另有规定外，鼻用制剂应置 2～8℃避光贮存和运输。 鼻用制剂应进行以下相应检查。 【重量差异或装量差异】 除另有规定外，单剂量包装的鼻用固体制剂或半 固体制剂重(装)量差异限度应符合规定。 检查法取供试品 20 个，分别称量内容物，计算平均重量，超过平均重量的 ±10％者，不得过 2 个，并不得有超过平均重量的±20％者。 凡规定检查含量均匀度的鼻用制剂，可不作重(装)量差异的检查。 【装量】 除另有规定外，单剂量包装的鼻用液体制剂应符合规定。 取供试品 10 个，分别将内容物倾尽，测定其装量，均不得少于其标示量。 多剂量包装的鼻用制剂，照最低装量检查法(附录 VF)检查，应符合规定。 【微生物限度】 除另有规定外，照微生物限度检查法(附录ⅫG)检查，应符
