PEG(polyethyeneglycol,聚乙二醇)作为融合剂。PEG具有促进原生质体触合的 作用。加入PEG后，再加入C2+和Mg2+等阳性离子。原生质体的融合受各种阳 离子和浓度的影响，与融合液的pH也有关，例如，在钙离子存在下，pH9,可得 到高的融合颜度，而缺乏钙离子时，低p,融合频度也高。 电融合技术是一项有效促成原生质体融合的手段。融合过程首先是原生质体 在电场中极化成偶极子，并沿电力线方向排列成串，然后，在加直流脉冲后，原 生质体膜被击穿，从而导致融合的发生。电融合的独到之处在于，融合过程可以 在显微镜的监视下进行，并可以在镜下挑出融合的原生质体：电融合为一个空间 定向、时间同步的可控过程，对细胞无任何毒害作用。 原生质休已经失去细胞壁，仅有一层厚约10m的细胞膜。它具有生物活性， 但不是正常的细胞，在普通培养基上不能生长。两个原生质体融合后，必须涂布 于再生培养基上，使其再生。所谓“再生“就是恢复细胞原来貌，能够再生长。 再生率常为百分之零点几至百分之几十。再生培养基以高渗培养基为主，增加高 渗培养基的渗透压或添加高于0.3mol/L的蔗糖溶液均可增加再生率。 (3)融合子的选择 在各菌落中选择融合子是很繁锁的，主要是依靠在选择培养基上的遗传标 记，有二个遗传标记互补，就可确定其为融合子。营养缺哈型标记选择是常规而 准确的选择手段。因为只有营养缺陷型得到互补后才可恢复正常生长。但应用原 生质体融合技术改良一些具有重要商品价值的南种时，利用营养缺陷型标记，往 往会造成一些优良性状的丢失，和所需代谢产量的下降，营养缺陷型的获得繁锁 费时，实践中人们采用了一些其它的方法。灭活原生质方法便是其中的一种。灭 活原生质体融合可以在很少或没有标记下进行，实验表明灭活亲株（单亲株或双 亲株)原生质体融合可以形成有生物活性的融合子，如在枯草芽孢杆菌中，用链 霉素灭活，在巨大芽孢杆菌中用热灭活，在天蓝链霉菌中用紫外线灭活，都获得 了成功。其重组率有的可接近或超过活亲株融合。此外，利用荧光染色也是一种 重要的方法，该方法是在双亲原生质体制备过程中，向酶解液中加入荧光色素使 其形成带有荧光色素的原生质体。 将融合的原生质体悬浮液置于带有显微操作器和落射荧光装置的立体型显 微镜下，挑选出融合的原生质体。个体上同时观察到双亲染色的两种荧光色素