8 浙江大学 遗传学第十一章 43 ②. 沉降分析： IPTG阻遏蛋白复合物＋lacO+序列： DNA沉降系数为40S； IPTG阻遏蛋白复合物：沉降系数为7S； IPTG阻遏蛋白复合物(同位素标记)+DNA序列：超速梯度 沉降分析有同位标记的沉降系数为40S。 ③. 序列特异结合： 阻遏蛋白只与正常的乳糖操纵子（lac O）序列结合，而 不与lacOc 的序列结合。 浙江大学 遗传学第十一章 44 ⑶. 蛋白的结晶分析： 刘毅斯（Lewis M.， 1996 )等成功地测定了 阻遏蛋白的晶体结构， 与诱导物以及与DNA 序 列的结合的结构。 阻遏蛋白： 360个氨基酸； 功能蛋白： 同聚四聚体。 浙江大学 遗传学第十一章 45 操纵元调控位点的精细分析： 浙江大学 遗传学第十一章 46 ㈢、色氨酸操纵元： 1．色氨酸操纵元模型： 由雅各布（Jacob F.）和莫诺（Monod J.）提出，具有合成 代谢途径典型的操纵元模型。 操纵元：包括色氨酸合成有关的5种酶的结构基因； 大量色氨酸时：大肠杆菌5种酶的转录同时受到抑制； 色氨酸不足时：这５种酶的基因开始转转录； 色氨酸：作为阻遏物而不是诱导物参与调控结构基因的 转录。 ∴ trp操纵元是一个典型的可阻遏操纵元模型(repressible operon)。 色氨酸操纵元模型结构： 5种结构基因：trpE、D、C、B、A； 调控结构：启动子、操纵子、前导序列、弱化子； 阻遏物trpR基因：与trp操纵元相距较远； 浙江大学 遗传学第十一章 48 2.色氨酸操纵元的负调控： ⑴. 阻遏调控： trpR基因编码无辅基阻遏物 ¨ 与色氨酸结合 ¨形成 有活性的色氨酸阻遏物 ¨ 与操纵子结合 ¨ 阻止转录； 色氨酸不足：阻遏物三维空间结构发生变化 ，不能 与操纵子结合，操纵元开始转录； 色氨酸浓度升高：色氨酸与阻遏物结合，空间结构 发生变化，可与操纵子结合，阻止转录。8 浙江大学 遗传学第十一章 43 ②. 沉降分析： IPTG阻遏蛋白复合物＋lacO+序列： DNA沉降系数为40S； IPTG阻遏蛋白复合物：沉降系数为7S； IPTG阻遏蛋白复合物(同位素标记)+DNA序列：超速梯度 沉降分析有同位标记的沉降系数为40S。 ③. 序列特异结合： 阻遏蛋白只与正常的乳糖操纵子（lac O）序列结合，而 不与lacOc 的序列结合。 浙江大学 遗传学第十一章 44 ⑶. 蛋白的结晶分析： 刘毅斯（Lewis M.， 1996 )等成功地测定了 阻遏蛋白的晶体结构， 与诱导物以及与DNA 序 列的结合的结构。 阻遏蛋白： 360个氨基酸； 功能蛋白： 同聚四聚体。 浙江大学 遗传学第十一章 45 操纵元调控位点的精细分析： 浙江大学 遗传学第十一章 46 ㈢、色氨酸操纵元： 1．色氨酸操纵元模型： 由雅各布（Jacob F.）和莫诺（Monod J.）提出，具有合成 代谢途径典型的操纵元模型。 操纵元：包括色氨酸合成有关的5种酶的结构基因； 大量色氨酸时：大肠杆菌5种酶的转录同时受到抑制； 色氨酸不足时：这５种酶的基因开始转转录； 色氨酸：作为阻遏物而不是诱导物参与调控结构基因的 转录。 ∴ trp操纵元是一个典型的可阻遏操纵元模型(repressible operon)。 色氨酸操纵元模型结构： 5种结构基因：trpE、D、C、B、A； 调控结构：启动子、操纵子、前导序列、弱化子； 阻遏物trpR基因：与trp操纵元相距较远； 浙江大学 遗传学第十一章 48 2.色氨酸操纵元的负调控： ⑴. 阻遏调控： trpR基因编码无辅基阻遏物 ¨ 与色氨酸结合 ¨形成 有活性的色氨酸阻遏物 ¨ 与操纵子结合 ¨ 阻止转录； 色氨酸不足：阻遏物三维空间结构发生变化 ，不能 与操纵子结合，操纵元开始转录； 色氨酸浓度升高：色氨酸与阻遏物结合，空间结构 发生变化，可与操纵子结合，阻止转录