第34卷第4期 病毒学报 2018年6月 CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY DO: 10.13242/jcnki. bingduxuebao 003389 恒温扩增HPV检测技术应用于子宫颈癌筛查 的效果评价研究 王林,姜明月2,曹雪芳2,李莉3,秦宇2,吴泽妮?,李婷媛?,吴婷凵,陈汶2 (1.厦门大学分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室 国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心,公共卫生学院,厦门361102; 2.国家癌症中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院流行病学研究室,北京100021; 3.新疆医科大学公共卫生学院,乌鲁木齐830011) 摘要:为了评价人乳头状瘤病毒( Human papillomavirus·HPV)恒温DNA扩增检测技术用于高危型HPV检测和 宫颈癌早期及癌前病变筛查的准确性和可行性。本研究于2016年6月至8月,在我国内蒙古地区招募2774例30 ~64岁有性生活史的妇女进行宫颈癌筛查;采用薄层液基细胞学技术完成细胞学诊断。采用恒温DNA扩增HPV 测技术( Iomega)和第二代杂交捕获技术( Hybrid Capture2,HC2)平行检测宫颈标本;对于 Iomega检测为 HPvl6/HPⅥ18阳性的标本和两种方法检测不一致的标本,使用线性探针法( INNO-LiPA)进行分型验证。以病理 诊断为金标准,评价 Iomega用于筛查宫颈上皮内瘤变( Cervical Intraepithelial Neoplasia,CIN)2级及以上患者的 灵敏度和特异度。结果表明, iomega与HC2检测高危型HPV的总一致率为9272%( Kappa=0.74),阳性一致 率为8678%阴性一致率为9377%;以 INNO-LiPA分型结果为标准, Iomega检出HPV16和HPV18的准确率 分别为9697%和8611%。以病理诊断为金标准, Iomega筛查CIN2+的灵敏度和特异度分别为87.76%和 294%。 Iomega能准确检测HPVl6、HPVl8和其他高危型别HPV,有较高的筛査灵敏度和特异度。 关键词:宫颈癌;人乳头状瘤病毒(HPV);筛査;恒温扩增 中图分类号:R3739文献标识码:A文章编号:1000-8721(2018)040498-07 宫颈癌是全世界范围内最常见的妇科恶性肿瘤这使得 HR-HPV检测成为一种有效的宫颈癌筛查 之一,对全世界妇女尤其是发展中国家妇女造成严技术,有望替代细胞学成为宫颈癌筛查的主要方 重的疾病负担[。宫颈癌的发生、发展是一个漫长法印。第二代杂交捕获检测技术( Hybrid Captu 的过程,从癌前病变进展为宫颈癌大约需要10~202,HC2)是目前国际认可的 HR-HPV DNA检测方 年。通过筛查和干预,可以阻断癌前病变向宫颈癌法,可以检测13种与宫颈癌相关的 HR-HPV 的进展,达到降低宫颈癌的发病率和死亡率的(HPV16、HPV18、HPV31、HPV33、HPV35、 HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56 目前宫颈癌筛查以细胞学为主,有效降低了宫HPV58、HPV59、HPV68),但无法分型。“人乳头 颈癌发病率,但是在发展中国家宫颈癌的发病率降瘤病毒(15种基因型)并16/18分型核酸检测试剂 低的不明显,主要原因是细胞学制片和诊断需要训盒(恒温扩增荧光法)( Iomega)”是一种基于核酸 练有素的专业人员,且容易受到多种主观因素的影恒温扩增原理的HPV检测技术,可检测15种 响,在卫生资源有限的国家和地区比较难于实施。HPV型别(HPV16、HPV18、HPV31、HPV33 随着宫颈癌病因学的研究和进展,大量研究表明高HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、 危型HPV( HR-HPV)的持续性感染是宫颈癌发生HPV53、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66 的必要条件。99%以上的宫颈癌患者中可检测到HPV8)并对HPV16和HPC18具体分型。与 HPV DNA,而HPV阴性者几乎不会发生宫颈HC2相比,该技术能鉴别高风险的HPV6和 癌[。HPV16和HPV18型别是引起宫颈癌最主 IPV18型别,同时增加了HPV53和HPV66型的 要的高危型别,占宫颈浸润癌的近70%。因此,检测。 INNO-LiPA HPV Genotyping Extra试剂盒 ( INNO-LIPA,比利时 Innogenetics公司)是一种基 收稿日期:2018-03-08;修回日期:201804-26 于聚合酶链反应和反向探针杂交原理的HPV基因 作者简介:王林(1991-),男,硕士研究生,从事肿瘤流行病学研 分型技术,可鉴别28种基因型别。 Kleter B等人 究,E-ma lin1217@163.com 大通讯作者:陈汶(1972),男,副研究员,从事肿瘤流行病学研使用 INNO-LiPA对1354例临床样本进行分型检 *. E-mail: chenwen(@ cicams ac cn 测,结果证明该实验与运用MY09/11引物的实验 21994-2018ChinaAcademicJOurnalElectronicpUblishingHouse.Allrightsreservedhttp:/www.cnki.net第３４卷 第４期 ２０１８ 年６月 病 毒 学 报 ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＶＩＲＯＬＯＧＹ Ｖｏｌ．３４ Ｎｏ．４ Ｊｕｎｅ ２０１８ 恒温扩增 ＨＰＶ检测技术应用于子宫颈癌筛查 的效果评价研究 王林１，姜明月２，曹雪芳２，李莉３，秦宇２，吴泽妮２，李婷媛２，吴婷１，陈汶２＊ （１．厦门大学 分子疫苗学和分子诊断学国家重点实验室， 国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，公共卫生学院，厦门３６１１０２； ２．国家癌症中心／中国医学科学院 北京协和医学院 肿瘤医院 流行病学研究室，北京 １０００２１； ３．新疆医科大学 公共卫生学院，乌鲁木齐 ８３００１１） 摘要：为了评价人乳头状瘤病毒（Ｈｕｍａｎｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ，ＨＰＶ）恒 温 ＤＮＡ 扩增检测技术用于高危型 ＨＰＶ 检 测 和 宫颈癌早期及癌前病变筛查的准确性和可行性。本研究于２０１６年６月至８月，在我国内蒙古地区招募２７７４例３０ ～６４岁有性生活史的妇女进行宫颈癌筛查；采用薄层液基细胞学技术完成细胞学诊断。采用恒温 ＤＮＡ 扩增 ＨＰＶ 检测技术（Ｉｓｏｍｅｇａ）和第二代杂交捕获技术（ＨｙｂｒｉｄＣａｐｔｕｒｅ２，ＨＣ２）平行检测宫颈标本；对 于Ｉｓｏｍｅｇａ检 测 为 ＨＰＶ１６／ＨＰＶ１８阳性的标本和两种方法检测不一致的标本，使用线性探针法（ＩＮＮＯ－ＬｉＰＡ）进行分型验证。以病理 诊断为金标准，评价Ｉｓｏｍｅｇａ用于筛查宫颈上皮内瘤变（ＣｅｒｖｉｃａｌＩｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌＮｅｏｐｌａｓｉａ，ＣＩＮ）２级及以上患者的 灵敏度和特异度。结果表明，Ｉｓｏｍｅｇａ与 ＨＣ２检测 高 危 型 ＨＰＶ 的 总 一 致 率 为９２．７２％（Ｋａｐｐａ＝０．７４），阳 性 一 致 率为８６．７８％，阴性一致率为９３．７７％；以ＩＮＮＯ－ＬｉＰＡ 分型结果为标准，Ｉｓｏｍｅｇａ检出 ＨＰＶ１６和 ＨＰＶ１８的准确率 分别为９６．９７％和８６．１１％。以病理诊断为金标准，Ｉｓｏｍｅｇａ筛 查 ＣＩＮ２＋ 的灵敏度和特异度分别为 ８７．７６％ 和 ８２．９４％。Ｉｓｏｍｅｇａ能准确检测 ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８和其他高危型别 ＨＰＶ，有较高的筛查灵敏度和特异度。 关键词：宫颈癌；人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）；筛查；恒温扩增 中图分类号：Ｒ３７３．９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１０００－８７２１（２０１８）０４－０４９８－０７ 收稿日期：２０１８－０３－０８；修回日期：２０１８－０４－２６ 作者简介：王林（１９９１－），男，硕 士 研 究 生，从事肿瘤流行病学研 究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗ＿ｌｉｎ１２１７＠１６３．ｃｏｍ ＊通讯作者：陈汶（１９７２－），男，副 研 究 员，从事肿瘤流行病学研 究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈｅｎｗｅｎ＠ｃｉｃａｍｓ．ａｃ．ｃｎ 宫颈癌是全世界范围内最常见的妇科恶性肿瘤 之一，对全世界妇女尤其是发展中国家妇女造成严 重的疾病负担［１］。宫颈癌的发生、发展是一 个 漫 长 的过程，从癌前病变进展为宫颈癌大约需要１０～２０ 年。通过筛查和干预，可以阻断癌前病变向宫颈癌 的 进 展，达到降低宫颈癌的发病率和死亡率的 目的［２］。 目前宫颈癌筛查以细胞学为主，有效降低了宫 颈癌发病率，但是在发展中国家宫颈癌的发病率降 低的不明显，主要原因是细胞学制片和诊断需要训 练有素的专业人员，且容易受到多种主观因素的影 响，在卫生资源有限的国家和地区比较难于实施［３］。 随着宫颈癌病因学的研究和进展，大量研究表明高 危型 ＨＰＶ（ＨＲ－ＨＰＶ）的持续性感染是宫颈癌发生 的必要条件［４］。９９％以上的宫颈癌患者中可检测到 ＨＰＶ ＤＮＡ，而 ＨＰＶ 阴 性 者 几 乎 不 会 发 生 宫 颈 癌［５］。ＨＰＶ１６和 ＨＰＶ１８ 型别是引起宫颈癌最主 要的高危 型 别，占 宫 颈 浸 润 癌 的 近７０％［６］。因 此， 这使得 ＨＲ－ＨＰＶ 检测成为一种有效的宫颈癌筛查 技术，有 望 替 代 细 胞 学 成 为 宫 颈 癌 筛 查 的 主 要 方 法［７］。第二代 杂 交 捕 获 检 测 技 术（ＨｙｂｒｉｄＣａｐｔｕｒｅ ２，ＨＣ２）是目前国际认可的 ＨＲ－ＨＰＶ ＤＮＡ 检测方 法，可 以 检 测 １３ 种 与 宫 颈 癌 相 关 的 ＨＲ－ＨＰＶ （ＨＰＶ１６、 ＨＰＶ１８、 ＨＰＶ３１、 ＨＰＶ３３、 ＨＰＶ３５、 ＨＰＶ３９、 ＨＰＶ４５、 ＨＰＶ５１、 ＨＰＶ５２、 ＨＰＶ５６、 ＨＰＶ５８、ＨＰＶ５９、ＨＰＶ６８），但 无 法 分 型。“人 乳 头 瘤病毒（１５种 基 因 型）并１６／１８分 型 核 酸 检 测 试 剂 盒（恒温 扩 增－荧 光 法）（Ｉｓｏｍｅｇａ）”是 一 种 基 于 核 酸 恒 温 扩 增 原 理 的 ＨＰＶ 检 测 技 术，可 检 测 １５ 种 ＨＰＶ 型 别 （ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、ＨＰＶ３１、ＨＰＶ３３、 ＨＰＶ３５、 ＨＰＶ３９、 ＨＰＶ４５、 ＨＰＶ５１、 ＨＰＶ５２、 ＨＰＶ５３、 ＨＰＶ５６、 ＨＰＶ５８、 ＨＰＶ５９、 ＨＰＶ６６、 ＨＰＶ６８）并 对 ＨＰＶ１６ 和 ＨＰＣ１８ 具 体 分 型。 与 ＨＣ２ 相 比，该 技 术 能 鉴 别 高 风 险 的 ＨＰＶ１６ 和 ＨＰＶ１８型别，同 时 增 加 了 ＨＰＶ５３和 ＨＰＶ６６型 的 检测。ＩＮＮＯ－ＬｉＰＡ ＨＰＶＧｅｎｏｔｙｐｉｎｇＥｘｔｒａ试剂盒 （ＩＮＮＯ－ＬｉＰＡ，比利时Ｉｎｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ公司）是 一 种 基 于聚合酶链反应和反向探针杂交原理的 ＨＰＶ 基因 分型技术，可鉴别２８种基因型别。ＫｌｅｔｅｒＢ［８］等人 使用ＩＮＮＯ－ＬｉＰＡ 对１３５４例临床样本进行分型检 测，结果证 明 该 实 验 与 运 用 ＭＹ０９／１１引 物 的 实 验 DOI:10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003389