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5实验用具 50ml离心管(3只/个材料)、1.5ml离心管(3只/个材料)、研钵(每 人1套)、小剪刀、棉纱手套、不锈钢药匙、10ml移液管、50ml离心管架、 1.5ml离心管盒、吸耳球、1ml移液枪、1ml吸头、1ml吸头盒、100μ1移 液枪、200μ1吸头、200μ1吸头盒、10μ1移液枪、10μ1吸头、10μ1吸 头盒、冰盒、各种规格的试剂瓶若干个。 6试剂 液氮、改良SDS提取液【1.5%SDS(WV),100 mMTris-HCI(pH8.O), 20 nMEDTA(pH8.0),500 nMNaCl,3.0%PVP(WW),0.2%B-巯基乙醇 (VV)小、氯仿-异戊醇(24:1)无水乙醇、70%乙醇、TE、RNA酶(10mg/ml)、 琼脂糖、TAE、5 MNaCl、DNA分子量标记、EB溶液(O.5μgml) 7实验步骤 (1)、在电子天平上称取1.0克用小剪刀剪去主脉的幼嫩叶片,于液态N2 中研磨成粉末。 (2)、用不锈钢药匙把粉末立即转入50ml离心管中,加入15ml经65℃预 热的改良SDS提取液,于65℃水浴锅中裂解60min,其间轻摇数次。 (3)、加入l5ml氯仿-异戊醇,用MicroBio Mixer Genius或双手上下颠倒 震荡10min(第一次去蛋白)。 (4)、4000rpm,离心10min。 (5)、用1ml移液枪转上清液于新的50ml离心管中。 4 5 实验用具 50ml 离心管(3 只/个材料)、1.5ml 离心管(3 只/个材料)、研钵(每 人 1 套)、小剪刀、棉纱手套、不锈钢药匙、10ml 移液管、50ml 离心管架、 1.5ml 离心管盒、吸耳球、1ml 移液枪、1ml 吸头、1ml 吸头盒、100μl 移 液枪、200μl 吸头、200μl 吸头盒、10μl 移液枪、10μl 吸头、10μl 吸 头盒、冰盒、各种规格的试剂瓶若干个。 6 试剂 液氮、改良 SDS 提取液【1.5%SDS(W/V),100mMTris-HCl(pH8.0), 20mMEDTA(pH8.0),500mMNaCl,3.0%PVP(W/V),0.2%β-巯基乙醇 (V/V)】、氯仿-异戊醇(24:1)、无水乙醇、70%乙醇、TE、RNA 酶(10mg/ml)、 琼脂糖、TAE、5M NaCl、DNA 分子量标记、EB 溶液(0.5μg/ml) 7 实验步骤 (1)、在电子天平上称取 1.0 克用小剪刀剪去主脉的幼嫩叶片,于液态 N2 中研磨成粉末。 (2)、用不锈钢药匙把粉末立即转入 50ml 离心管中,加入 15ml 经 65℃预 热的改良 SDS 提取液,于 65℃水浴锅中裂解 60min,其间轻摇数次。 (3)、加入 15ml 氯仿-异戊醇,用 MicroBio Mixer Genius 或双手上下颠倒 震荡 10min(第一次去蛋白)。 (4)、4000rpm,离心 10min。 (5)、用 1ml 移液枪转上清液于新的 50ml 离心管中
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