《珠江水产》总19朝 199210 细胞培养弱毒冻于 将收获后经安全性和抗原性检验合格,置-20℃保存的各批细胞培养弱毒湿苗,无 菌操作倒入大容量的玻璃瓶混合,然后按1:1的比例加入含5%蔗糖的脱脂牛奶作保 护剂、再按总量加入500单位/亳升青霉素和500微克/毫升链霉素,充分抵匀后,在无菌 室分装冻于瓶,每瓶5毫升,最后置真空冷冻干燥机进行冻干处理,出柜后在无菌室加 塞、抽真空、封腊。 三、细胞弱毒疫苗稀释度,剂量和保存期测定 1、稀释度 取84—1号弱毒株55、56、57代作毒种,分别制备细胞培养弱毒湿苗,以10-1 10-‘各种稀释度0,2毫升/尼剂量注射免安全长9~12厘米的当年草鱼,同时设空白对照 组。兔疫15天后以100LD50的强毒02毫升/尾的剂量攻击,观察15~20天,记录和统计 免疫鱼和对照鱼的显症死亡率,计算出各种稀释度的免疫保拉力。 2、剂量 用同一批细胞培养弱毒冻干苗10-~104各稀释度的三种不同剂量(010.2、 0,3升/尾)注射免疫全长9~12厘米的当年草鱼,同时设空白对照组。免疫15天后以 100LD50的强毒02毫升/尾的剂量攻击,观察15~20天,记录和计算比较各种稀释度不 同剂量的免疫保护力。 3、保存期 将同一批细胞培养弱毒冻干苗分别存放于室温、4℃、-20℃三种不同温度,经两个 月后间隔一定时间从各个保存温度随机取出一瓶,用065%生理盐水稀释成10-1~104 儿种浓度,以02毫升/尾注射免疫全长9~12厘米的当年草鱼。同时设空白对照组。免 疫15天后以100LD50的强毒02毫升/尾的剂量攻击,现察15天,检查其免疫保护力。 试验结果 弱毒株84-1号的安全性与免疫原性 1984~1989年,通过数十个野毒村料筛选出84-1号和89-2号两个毒力强的毒 株。84-1号毒株LD50为314,2号毒株LD50为382。其中84—1号毒株作为弱毒驯 化的种毒,几年来在PSF细胞中进行适应性培养,一直保持较强毒力。但在一定培养条 件下传至50代毒力显著减弱,回归感染死亡率仅30%;传至50代降至10%;传至53代毒 力更弱,注射接种草鱼不出现显症、死亡或其它异常现象,而且连续传至59代,均能保 持这种弱化性状(表1)。用这些筛选代作毒种制备的湿苗或冻干苗,均能达到安全《珠 江 水 产 》 总 19期 1992．10． 2、细胞 培养弱 毒冻 干苗 将 收获后 经安全性和抗 原性检验合 格，置 一20℃保存 的各批细胞培 养弱毒湿苗，无 菌操 作倒入 大容量 的玻璃 瓶混合 ，然 后按 l ·l的 比例加入含 5 蔗糖 的脱晴牛奶 作保 护剂 ，再 按总量加入 500单位／毫升 青霉 索和500微克／毫 升链 霉索 ，充分摇匀后，在无菌 室分装 冻干瓶 ， 每瓶 5毫升 ，最后置真 空冷冻干燥机进 行冻干处理 ，出柜后在无菌 室加 塞 抽真 空、封 腊。 三、细胞弱 毒疫苗稀 释度 ，剂量 和保存 期测 定 l、稀 释 度 取 84一 l号弱毒株 55、56、57代 作毒种，分别 制备 细胞 培养弱 毒 湿 苗， 以l0～～ 1O 各种稀释 度0．2毫升／尾剂量注 射免 疫全长 9～ 】2厘 米 的当年草鱼 ，同时设 空白对照 组 。免 疫l5天后 100LD50的强毒O．2毫升／尾的剂量攻 击，观 察 15～ 20天 ，记录和统讣 免疫鱼和 对照鱼的显症 死亡率，计算 出 各种稀释 度 的免 疫保 护力 。 2、 剂 量 用 同一批 细胞 培养 弱毒冻干茁 10-～ lo 各稀释度 的 三 种不 同剂量 (0．1、0．2、 0．3毫升／尾 )注射 免疫全 长 9～ 12厘 米的当年草鱼， 同时设 空 自对照 组。免疫 15天后 以 1001D50的强毒0．2毫升／尾 的剂量攻 击，观 察 15~20天，记录 和计算 比较 各种稀释度不 同剂量 的免 疫保 护力 。 S、 保 存 期 将同一批 细胞培 养弱毒冻干 苗分 别存放于室温 、4℃、一20℃三 种不 同温度 ，经两 个 月 后间隔一定时 间从 各个 保存 温度 随机 取出一瓶，用 0．65 生理盐水稀释成 1O ～ l0’t 几 种浓度， 以0．2毫升／尾注射 免疫 全长 9～l2厘米的当 年草 鱼。同时设 空白对照 组。 免 疫 l5天后 以100LD50的强毒0．2毫升／尾 的剂量 攻 击 ，观察 15天，检查 其免疫保 护力 。 试 验 结 果 一 、 弱毒株84一 l号 的安全性 与免疫原’巨 1984~ 1989年，通过数 十个野 毒材料筛 选出84～ l号和89～ 2号两 个 毒 力强 的毒 株。84一 l号 毒株LD50为3．14， 2号 毒株LDs0为 3．82。其 中84一 l号毒栋 作为 弱毒 驯 化 的种 毒， 几年来在 PSF细胞 中进行 适应 性培养，一直 保持较 强毒力 。但在一定培 养条 件下抟至 5O代毒力 显著减弱， 回归感染 死 亡率仅3O i传至 50代 降至 10 j传 至53代 毒 力更 弱，注射接种草鱼不出现显症、死亡或其它异常现象，而且连续传至59代，均能保 持 这种 弱毒 化性状 (表 1)。用 这些 筛选代作 毒种制备 的湿苗或冻 干苗 ，均能 达到安全 25 维普资讯 http://www.cqvip.com