58 1．亚硝胺标准曲线绘制 准确吸取亚硝胺标准溶液 0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10ml，分别放 入小培养皿中，在小培养皿中分别加入 PH7 的磷酸缓冲溶液，使溶液的总体积 为 2.0ml，摇匀。在紫外光下照 1min。然后依次加入 0.5ml 显色剂 A，摇匀， 再加入 0.5ml 显色剂 B，使溶液呈玫瑰红色后，分别在 550nm 波长下用分光光 度计测定其吸光度，然后绘制其标准曲线。 2．样品的制备 液体样品：称取 10.0－20.0g 样品（根据样品中亚硝胺的含量大小称量）， 移入 100ml 容量瓶中，加入 0.5mol/L 氢氧化钠溶液，调整其浓度为 1mol/L， 摇匀后过滤，收集滤液备用。 固体样品：将固体样品捣碎或研磨搅拌均匀，称取 20.0g，用正丁醇饱和过 的 1mol/L 氢氧化钠溶液将其转移入 100ml 容量瓶中至刻度，摇匀后浸泡过夜， 最后离心取清液备用。 3．挥发性 N－亚硝胺总量的测定 吸取样品 50ml 清液置于蒸馏瓶内，将其进行夹层保温水蒸气蒸馏，收集馏 出液 25ml，用 300g/L 醋酸溶液调节其 PH 值至 3－4。再继续蒸馏，再收集馏出 液 25ml，用 0.5mol/L 氢氧化钠调至 PH7－8。在紫外光下照射 15min，通过强 碱性离子（氯离子型）交换柱（φ1cm×0.5cm）浓缩，用少量蒸馏水水洗，然 后用 1mol/L 氯化钠溶液洗脱亚硝酸根，然后分管收集洗脱液，每管 1ml，直至 所收集的洗脱液加入显色剂不显色为止。在管中各加入 1.0mlPH7 的磷酸缓冲溶 液、0.5ml 显色剂 A，摇匀，然后再加入 0.5ml 显色剂 B，待溶液呈玫瑰红色后， 在分光光度计以 550nm 波长下测定其吸光度，根据其吸光度，从标准曲线中查 得每管亚硝胺的含量，计算其总含量。 六、计算 X＝ m m1 ×1000 （3－2） 式中：X――挥发性 N－亚硝胺含量，μg/kg； m1――相当于挥发性 N－亚硝胺标准的量，μg； m――测定时样品溶液相当于样品的量，g。 注意事项 对于亚硝酸盐含量高的样品，由于二甲胺与亚硝酸盐在酸性条件下能结合 产生亚硝胺，因此，会影响 N－亚硝胺的测定结果。可以用同样的比色法计算 出亚硝酸盐相当于挥发性 N－亚硝胺含量 X0，然后再减去 X0得到实际样品中挥 发性 N－亚硝胺含量。58 1．亚硝胺标准曲线绘制 准确吸取亚硝胺标准溶液 0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10ml，分别放 入小培养皿中，在小培养皿中分别加入 PH7 的磷酸缓冲溶液，使溶液的总体积 为 2.0ml，摇匀。在紫外光下照 1min。然后依次加入 0.5ml 显色剂 A，摇匀， 再加入 0.5ml 显色剂 B，使溶液呈玫瑰红色后，分别在 550nm 波长下用分光光 度计测定其吸光度，然后绘制其标准曲线。 2．样品的制备 液体样品：称取 10.0－20.0g 样品（根据样品中亚硝胺的含量大小称量）， 移入 100ml 容量瓶中，加入 0.5mol/L 氢氧化钠溶液，调整其浓度为 1mol/L， 摇匀后过滤，收集滤液备用。 固体样品：将固体样品捣碎或研磨搅拌均匀，称取 20.0g，用正丁醇饱和过 的 1mol/L 氢氧化钠溶液将其转移入 100ml 容量瓶中至刻度，摇匀后浸泡过夜， 最后离心取清液备用。 3．挥发性 N－亚硝胺总量的测定 吸取样品 50ml 清液置于蒸馏瓶内，将其进行夹层保温水蒸气蒸馏，收集馏 出液 25ml，用 300g/L 醋酸溶液调节其 PH 值至 3－4。再继续蒸馏，再收集馏出 液 25ml，用 0.5mol/L 氢氧化钠调至 PH7－8。在紫外光下照射 15min，通过强 碱性离子（氯离子型）交换柱（φ1cm×0.5cm）浓缩，用少量蒸馏水水洗，然 后用 1mol/L 氯化钠溶液洗脱亚硝酸根，然后分管收集洗脱液，每管 1ml，直至 所收集的洗脱液加入显色剂不显色为止。在管中各加入 1.0mlPH7 的磷酸缓冲溶 液、0.5ml 显色剂 A，摇匀，然后再加入 0.5ml 显色剂 B，待溶液呈玫瑰红色后， 在分光光度计以 550nm 波长下测定其吸光度，根据其吸光度，从标准曲线中查 得每管亚硝胺的含量，计算其总含量。 六、计算 X＝ m m1 ×1000 （3－2） 式中：X――挥发性 N－亚硝胺含量，μg/kg； m1――相当于挥发性 N－亚硝胺标准的量，μg； m――测定时样品溶液相当于样品的量，g。 注意事项 对于亚硝酸盐含量高的样品，由于二甲胺与亚硝酸盐在酸性条件下能结合 产生亚硝胺，因此，会影响 N－亚硝胺的测定结果。可以用同样的比色法计算 出亚硝酸盐相当于挥发性 N－亚硝胺含量 X0，然后再减去 X0得到实际样品中挥 发性 N－亚硝胺含量