SDS聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围 *丙烯酰胺浓度(%) 线性分离范围(kD) 12~43 16~68 36~9 *双丙烯酰胺~丙烯酰胺摩尔比为1:29。 1.SDS聚丙烯酰胺凝胶的配制 (1)试剂 ①丙烯酰胺和N,N-亚甲双丙烯酰胺。以温热(利于溶解双丙烯酰胺)的去离子水 配制含有29%(w/)丙烯酰胺和1%(w/v)N,N∴-亚甲双丙烯酰胺的贮存液,丙烯酰胺和 双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸,这一脱氨基反应是光催化或碱催化 的,故应核实溶液的pH值不超过7.0。这一溶液置棕色瓶中贮存于室温,每隔几个月须重 新配制 小心:丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并容易吸附于皮肤。 ②十二烷基硫酸钠(SDS)。SDS可用去离子水配成10%(w/)贮存液保存于室 ③用于制备分离胶和积层胶的Tris缓冲液。 ④ TEMED(NNN,N-四甲基乙二胺)。 TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加 速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合 ⑤过硫酸铵。过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所必需的自由基。须 新鲜配制 ⑥Tris甘氨酸电泳缓冲液 (2)装置:使用不连续缓冲系统要求在垂直板凝胶上进行SDS聚丙烯酰胺电泳 2.SDS聚丙烯酰胺凝胶的灌制 (1)根据厂家说明书安装玻璃板。 (2)确定所需凝胶溶液体积,按下表给出的数值在一小烧杯中按所需丙烯酰胺浓度配 制一定体积的分离胶溶液。一旦加入 TEMED,马上开始聚合,故应立即快速旋动混合物并 进入下步操作。189 SDS 聚丙烯酰胺凝胶的有效分离范围 *丙烯酰胺浓度（%） 线性分离范围（kD） 15 12～43 10 16～68 7.5 36～94 5.0 57～212 *双丙烯酰胺～丙烯酰胺摩尔比为 1：29。 1. SDS 聚丙烯酰胺凝胶的配制 ⑴ 试剂 ①丙烯酰胺和 N, N’-亚甲双丙烯酰胺。以温热（利于溶解双丙烯酰胺）的去离子水 配制含有 29%（w/v）丙烯酰胺和 1%（w/v）N, N’-亚甲双丙烯酰胺的贮存液，丙烯酰胺和 双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸，这一脱氨基反应是光催化或碱催化 的，故应核实溶液的 pH 值不超过 7.0。这一溶液置棕色瓶中贮存于室温，每隔几个月须重 新配制。 小心：丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并容易吸附于皮肤。 ② 十二烷基硫酸钠（SDS）。SDS 可用去离子水配成 10%（w/v）贮存液保存于室 温。 ③用于制备分离胶和积层胶的 Tris 缓冲液。 ④TEMED(N,N,N’,N’-四甲基乙二胺)。TEMED 通过催化过硫酸铵形成自由基而加 速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。 ⑤过硫酸铵。 过硫酸铵提供驱动丙烯酰胺和双丙烯酰胺聚合所必需的自由基。须 新鲜配制。 ⑥Tris-甘氨酸电泳缓冲液。 ⑵ 装置： 使用不连续缓冲系统要求在垂直板凝胶上进行 SDS 聚丙烯酰胺电泳。 2．SDS 聚丙烯酰胺凝胶的灌制 ⑴ 根据厂家说明书安装玻璃板。 ⑵ 确定所需凝胶溶液体积，按下表给出的数值在一小烧杯中按所需丙烯酰胺浓度配 制一定体积的分离胶溶液。一旦加入 TEMED，马上开始聚合，故应立即快速旋动混合物并 进入下步操作