安徽农业大学学报，2011,38(5)：788-791 Journal of Anhui Agricultural University [D0CNK1:34-1162/S.20110829.1431.017网络出版时间：2011-08-2914：31：37 [URLIhttp:/www.cnki.net/kcms/detail/34.1162.S.20110829.1431.017.html 茶树上冰核活性细菌的分离、鉴定及防治 孙健，何天良，江昌俊 (安徽农业大学茶叶生物化学与生物技术教育部重点实验室，合肥230036) 摘要：霜冻发生时从茶树上分离到1株冰核活性细菌，该菌株在-5℃下在2min内冻滴率达到85%，一个 冰核产生需要的细胞数约为5.4×103个，该菌株具有明显冰核活性。对该菌株进行16 S rDNA序列对比分析，判断 该菌株为萎蔫短小杆菌(Cur1 obacterium flaccumfaciens)。在-S℃条件下，药剂防治效率顺序为：次氯酸钙>Tween 80>藏红>亚甲蓝，在同一生态条件下的土壤中分离出1株拮抗菌，经鉴定该菌株为黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium). 关键词：冰核活性细菌；鉴定；药剂防除；拮抗菌 中图分类号：S571.1 文献标识码：A 文章编号：1672-352X(2011)05-0788-04 Identification and control of one strain of ice nucleation active (INA) bacteria isolated from the tea plant SUN Jian,HE Tian-liang,JIANG Chang-jun (Key laboratory of Tea Biochemistry and Biotechnology,Education of Ministry,Anhui Agricultural University,Hefei 230036) Abstract:One of ice nucleation active INA)bacteria was isolated from the tea plant when frost occurred, and the freezing percentage of this strain was 85%at-5C in 2 min.The cells/ice nuclei were about 5.4x10,and the strain shows significant ice nucleation activity.After 16S rDNA sequences of the isolates in GenBank were analyzed,the strain was identified as Curtobacterium flaccumfaciens.The efficiency of chemical control order at -5C was calcium hypochlorite>Tween 80>saffron>methylene blue.Under the same ecological condition,an- tagonist bacterium was isolated from the soil,which was identified as Phanerochaete chrysosporium. Key words:INA bacteria;identification;medicament control;antagonistic bacterium 茶树(Camillia sinensis)冻害的发生受多种因子 品采集范围为整个茶园，每种茶树采集10片老叶。 的影响。多数研究者认为，茶树低温冻害与低温及 对照菌株为大肠杆菌(Escherichia coli)。药剂选择 其持续时间，茶树品种以及茶树上附生的微生物有 次氯酸钙、Tween80、藏红和亚甲蓝。 关。冰核活性细菌的存在使茶树在-2~-3℃下 1.2试验方法 细胞水结冰从而诱发冻害。本试验从茶树上分离的1.2.1冰核细菌的分离用灭菌小刀切取采集的植 1株冰核活性细菌，通过对其鉴定，使用药剂和拮 物组织，并切成碎片状后，再加入无菌水于摇床中 抗菌对冰核活性细菌的室内防除，以期为茶树抗冻 以200rmin室温下振荡浸洗1h,然后取100L 提供理论依据。 浸洗液经10倍梯度稀释后涂布KB平板，置24℃ 恒温箱中培养2d。挑取所生长的单菌落进行划线分 1材料与方法 离纯化，用于分离菌株的冰核活性测定和鉴定。 1.1材料 1.2.2冰核活性的测定测定冰核活性采用Vai山 用于分离冰核活性细菌的材料于秋冬季霜冻发 发明，后又由Lindow改进的小液滴冻结法。待移 生后采集于安徽农业大学大杨店实验基地茶园。样 植到试管斜面上的菌落长好后，用无菌水直接加入 收稿日期：2011-05-10 作者简介：孙健，男，硕士研究生。 *通讯作者：江昌俊，男，教授，博士生导师。E-mail:jiangcj(@ahau.cdu.cn收稿日期: 2011-05-10 作者简介: 孙 健，男，硕士研究生。 * 通讯作者: 江昌俊，男，教授，博士生导师。E-mail：jiangcj@ahau.edu.cn 安徽农业大学学报, 2011, 38(5): 788-791 Journal of Anhui Agricultural University [DOI]CNKI：34-1162/S.20110829.1431.017 网络出版时间：2011-08-29 14:31:37 [URL]http:// www.cnki.net/kcms/detail/34.1162.S.20110829.1431.017.html 茶树上冰核活性细菌的分离、鉴定及防治 孙 健，何天良，江昌俊 1* (安徽农业大学茶叶生物化学与生物技术教育部重点实验室，合肥 230036) 摘 要：霜冻发生时从茶树上分离到 1 株冰核活性细菌，该菌株在﹣5℃下在 2 min 内冻滴率达到 85%，一个 冰核产生需要的细胞数约为 5.4×103 个，该菌株具有明显冰核活性。对该菌株进行 16S rDNA 序列对比分析，判断 该菌株为萎蔫短小杆菌（Curtobacterium flaccumfaciens）。在 -5℃条件下，药剂防治效率顺序为：次氯酸钙＞Tween 80＞藏红＞亚甲蓝。在同一生态条件下的土壤中分离出 1 株拮抗菌，经鉴定该菌株为黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)。 关键词：冰核活性细菌；鉴定；药剂防除；拮抗菌 中图分类号：S571.1 文献标识码：A 文章编号：1672−352X (2011)05−0788−04 Identification and control of one strain of ice nucleation active (INA) bacteria isolated from the tea plant SUN Jian, HE Tian-liang, JIANG Chang-jun (Key laboratory of Tea Biochemistry and Biotechnology, Education of Ministry, Anhui Agricultural University, Hefei 230036) Abstract: One of ice nucleation active ( INA) bacteria was isolated from the tea plant when frost occurred， and the freezing percentage of this strain was 85% at -5℃ in 2 min. The cells/ice nuclei were about 5.4×103 , and the strain shows significant ice nucleation activity. After 16S rDNA sequences of the isolates in GenBank were analyzed, the strain was identified as Curtobacterium flaccumfaciens. The efficiency of chemical control order at ﹣5℃ was calcium hypochlorite> Tween 80> saffron> methylene blue. Under the same ecological condition, an￾tagonist bacterium was isolated from the soil, which was identified as Phanerochaete chrysosporium. Key words: INA bacteria; identification; medicament control; antagonistic bacterium 茶树(Camillia sinensis)冻害的发生受多种因子 的影响。多数研究者认为，茶树低温冻害与低温及 其持续时间，茶树品种以及茶树上附生的微生物有 关。冰核活性细菌[1]的存在使茶树在﹣2 ~ ﹣3℃下 细胞水结冰从而诱发冻害。本试验从茶树上分离的 1 株冰核活性细菌，通过对其鉴定，使用药剂和拮 抗菌对冰核活性细菌的室内防除，以期为茶树抗冻 提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 用于分离冰核活性细菌的材料于秋冬季霜冻发 生后采集于安徽农业大学大杨店实验基地茶园。样 品采集范围为整个茶园，每种茶树采集 10 片老叶。 对照菌株为大肠杆菌（Escherichia coli）。药剂选择 次氯酸钙、Tween 80、藏红和亚甲蓝。 1.2 试验方法 1.2.1 冰核细菌的分离 用灭菌小刀切取采集的植 物组织，并切成碎片状后，再加入无菌水于摇床中 以 200 r·min-1 室温下振荡浸洗 1 h ，然后取 100 μL 浸洗液经 10 倍梯度稀释后涂布 KB 平板，置 24℃ 恒温箱中培养 2 d。挑取所生长的单菌落进行划线分 离纯化，用于分离菌株的冰核活性测定和鉴定。 1.2.2 冰核活性的测定 测定冰核活性采用 Vali [1] 发明，后又由 Lindow 改进的小液滴冻结法。待移 植到试管斜面上的菌落长好后，用无菌水直接加入