第1章 发酵工程 2.无菌技术的常用方法。 微生物的纯培养与选择培养 能否杀死全 巴氏消毒法 部微生物 重难归纳 能 灼烧灭菌 1.平板划线法。 煮沸消毒法 无菌 灭 (1)原理：通过接种环在固体培养基表面连续划线的操 技术 菌 干热灭菌 作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 化学药物消毒法 关 (2)主要步骤：接种环灭菌→取菌种→第一次平板划线 键 湿热灭菌 操作→连续划线操作→培养。 紫外线消毒法 防止杂菌污染 (3)平板划线操作的注意事项。 特别提醒 ①操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要对 (1)消毒只能杀死一部分微生物，灭菌可以 接种环进行灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每 杀死物体内外所有的微生物（包括芽孢和孢子）。 次灼烧的目的如下表： (2)消毒和灭菌都是通过一定的理化手段，使微生物 第二次及之后每次 的蛋白质变性，失去生命活性。 第一次灼 划线结束灼 项目 烧接种环 划线之前灼烧接 (3)消毒与灭菌的原理是相同的，只是作用的条件不 烧接种环 种环 同，抑菌、灭菌的程度不同。 杀死上次划线后接 ?情境体验 种环上残留的菌种， 杀死接种环 护士给病人注射药液前，要用酒精棉球擦拭注射部位， 杀死接种环 使下次划线的菌种 上残留的菌 这属于消毒还是灭菌？无菌技术措施的选择有什么原则？ 目的 上原有的微 直接来源于上次划 种，避免菌种 提示属于消毒。 生物 线的末端，使每次划 污染环境和 无菌技术措施选择的原则如下。 线后的菌种数目 感染操作者 ①考虑效果：灭菌的效果比消毒要好」 减少 ②考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的 手等只能采用消毒的方法，而不能采用灭菌的方法。 ②灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太 ③对于那些培养基中需要、但加热会分解的化合物，如 高杀死菌种。 尿素、NaHCO,不能用高压蒸汽灭菌法灭菌，只能将其配成 ③第二次及之后的划线操作总是从上一次划线的末 溶液，使用特定的器材单独过滤灭菌。 端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐诚 典例剖析 少，最终得到由单个细菌繁殖而来的单菌落 ④划线时最后一区不要与第一区相连。 下列关于无菌技术的叙述，错误的是( ⑤划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。 A对操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌 (4)平板划线示意图及培养后菌落分布示意图如下图所 B.对培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 示。培养后一般可在最后一次的划线区找到单菌落，如下图 C,为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒 中的“4”区。 精灯火焰附近进行 D.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围 的物品接触 答案A 解析对操作的室间、操作者的衣着和手进行消毒 处理。 学以致用 2.稀释涂布平板法。 (1)原理：将菌液进行一系列的梯度稀释，当样品的稀释 无菌技术常围绕着如何避免杂菌污染展开。下列常见 度足够高时，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞。 的无菌技术属于灭菌处理的是( (2)主要操作环节：系列梯度稀释操作和涂布平板操作。 A用酒精擦拭双手 (3)接种工具：涂布器。 B.用紫外线照射实验操作台 (4)稀释涂布平板操作的注意事项。 C.对接种环进行灼烧处理 ①酒精灯与培养皿的距离要适宜。 D.用氯气消毒水源 ②移液管管头不要接触其他任何物体。 答案C ③移液管要在酒精灯火焰附近使用。 ④将涂布器末端从酒精中取出时，要让多余的酒精 11第1章 发酵工程 2.无菌技术的常用方法。 (1)消毒只能杀死一部分微生物,灭菌可以 杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。 (2)消毒和灭菌都是通过一定的理化手段,使微生物 的蛋白质变性,失去生命活性。 (3)消毒与灭菌的原理是相同的,只是作用的条件不 同,抑菌、灭菌的程度不同。 护士给病人注射药液前,要用酒精棉球擦拭注射部位, 这属于消毒还是灭菌? 无菌技术措施的选择有什么原则? 提示 属于消毒。 无菌技术措施选择的原则如下。 ①考虑效果:灭菌的效果比消毒要好。 ②考虑操作对象的承受能力:活体生物材料、操作者的 手等只能采用消毒的方法,而不能采用灭菌的方法。 ③对于那些培养基中需要、但加热会分解的化合物,如 尿素、NaHCO3,不能用高压蒸汽灭菌法灭菌,只能将其配成 溶液,使用特定的器材单独过滤灭菌。 典例剖析 下列关于无菌技术的叙述,错误的是( ) A.对操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌 B.对培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 C.为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒 精灯火焰附近进行 D.实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围 的物品接触 答案 A 解析 对操作的空间、操作者的衣着和手进行消毒 处理。 学以致用 无菌技术常围绕着如何避免杂菌污染展开。下列常见 的无菌技术属于灭菌处理的是( ) A.用酒精擦拭双手 B.用紫外线照射实验操作台 C.对接种环进行灼烧处理 D.用氯气消毒水源 答案 C 三 微生物的纯培养与选择培养 重难归纳 1.平板划线法。 (1)原理:通过接种环在固体培养基表面连续划线的操 作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 (2)主要步骤:接种环灭菌→取菌种→第一次平板划线 操作→连续划线操作→培养。 (3)平板划线操作的注意事项。 ①操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要对 接种环进行灼烧灭菌,划线操作结束时,仍需灼烧接种环,每 次灼烧的目的如下表: 项目 第一次灼 烧接种环 第二次及之后每次 划 线 之 前 灼 烧 接 种环 划 线 结 束 灼 烧接种环 目的 杀死接种环 上原有的微 生物 杀死上次划线后接 种环上残留的菌种, 使下次划线的菌种 直接来源于上次划 线的末端,使每次划 线 后 的 菌 种 数 目 减少 杀 死 接 种 环 上 残 留 的 菌 种,避免菌种 污 染 环 境 和 感染操作者 ②灼烧接种环,待其冷却后才能伸入菌液,以免温度太 高杀死菌种。 ③第二次及之后的划线操作总是从上一次划线的末 端开始,能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减 少,最终得到由单个细菌繁殖而来的单菌落。 ④划线时最后一区不要与第一区相连。 ⑤划线用力大小要适当,防止用力过大将培养基划破。 (4)平板划线示意图及培养后菌落分布示意图如下图所 示。培养后一般可在最后一次的划线区找到单菌落,如下图 中的“4”区。 2.稀释涂布平板法。 (1)原理:将菌液进行一系列的梯度稀释,当样品的稀释 度足够高时,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞。 (2)主要操作环节:系列梯度稀释操作和涂布平板操作。 (3)接种工具:涂布器。 (4)稀释涂布平板操作的注意事项。 ①酒精灯与培养皿的距离要适宜。 ②移液管管头不要接触其他任何物体。 ③移液管要在酒精灯火焰附近使用。 ④将涂布器末端从酒精中取出时,要让多余的酒精 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 􀤂 11