链构成,而另一条为单股含有BdU的DNA链。在结构上双股含BU的DNA 螺旋化程度较低,故对染色剂亲合力低,在用 Giemsa染色时其单体着色浅,只 有单股含BrdU的DNA链组成的单体则着色深而形成差别着色。应用姐妹染色单 体交换技术研究来自一个染色体的两条单体之间在同一个位点发生同源片段的 交换,称为姊妹染色单体互换。当姊妹染色体间存在同源片段交换时,可根据每 条单体夹杂着深浅不一的着色片段加以区分。由于姐妹染色单体的DNA序列相 同,SCE并不改变遗传物质组成,但SCE是由于染色体发生断裂和重接而产生的, 因此,SCE显示方法通常用来检测染色体断裂频率,用来研究药物和环境因素的 致畸效应。 、实验用品和材料 材料:人外周血(或培养细胞) 2.器械:光学显微镜、恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机、20w紫外线灯、 培养瓶、10ml刻度离心管、吸管、试管架、注射器(lm、2ml)、酒精灯、载玻 片、天平、小烧杯、染色缸、黑纸、擦镜纸。 3.试剂:RPM1640培养液、PHA、肝素、2xSSC、500ug/ml的BrdU、pH68 磷酸缓冲液、 Giemsa染液 4.试剂的配制 (1)500μ g/ml BrdU称取Buu42mg,加入84m无菌生理盐水,摇匀后 即成500μg/mnl的BrdU溶液,4℃冰箱避光保存, (2)2×SSC溶液先配制A液(0.30molL氯化钠:17.54克氯化钠溶解 在蒸馏水中,定容至l00om)和B液(0030mo柠檬酸钠:882克柠檬酸钠溶 解在蒸馏水中,定容至1000mn);使用时将A和B两溶液等体积混合即成2×SSC 溶液 (3)常规配制RPMI1640培养液、 Giemsa染液、肝素液。 实验方法与步骤 (一)细胞培养(人外周血淋巴细胞培养) 1.接种无菌抽取外周全血0.2~0.3ml(肝素抗凝),接种在5ml含有PHA 的RPM1640培养液中,37℃培养箱培养。 2.加BrdU培养24h后加500ug/ ml brdu液0.1ml,终浓度为10ug/m,7 链构成，而另一条为单股含有 BrdU 的 DNA 链。在结构上双股含 BrdU 的 DNA 螺旋化程度较低，故对染色剂亲合力低，在用 Giemsa 染色时其单体着色浅，只 有单股含 BrdU 的 DNA 链组成的单体则着色深而形成差别着色。应用姐妹染色单 体交换技术研究来自一个染色体的两条单体之间在同一个位点发生同源片段的 交换，称为姊妹染色单体互换。当姊妹染色体间存在同源片段交换时，可根据每 条单体夹杂着深浅不一的着色片段加以区分。由于姐妹染色单体的 DNA 序列相 同，SCE 并不改变遗传物质组成，但 SCE 是由于染色体发生断裂和重接而产生的， 因此，SCE 显示方法通常用来检测染色体断裂频率，用来研究药物和环境因素的 致畸效应。 二、实验用品和材料 1. 材料：人外周血（或培养细胞） 2. 器械：光学显微镜、恒温培养箱、恒温水浴箱、离心机、20w 紫外线灯、 培养瓶、10ml 刻度离心管、吸管、试管架、注射器（1ml、2ml）、酒精灯、载玻 片、天平、小烧杯、染色缸、黑纸、擦镜纸。 3. 试剂：RPMI1640 培养液、PHA、肝素、2×SSC、500g/ml 的 BrdU、pH6.8 磷酸缓冲液、Giemsa 染液。 4. 试剂的配制 （1）500g/ml BrdU 称取 Brdu 4.2mg，加入 8.4 ml 无菌生理盐水，摇匀后 即成 500g/ml 的 BrdU 溶液，4℃冰箱避光保存。 （2）2×SSC 溶液 先配制 A 液（0.30mol/L 氯化钠 ：17.54 克氯化钠溶解 在蒸馏水中，定容至 1000ml）和 B 液（0.030mol/L 柠檬酸钠：8.82 克柠檬酸钠溶 解在蒸馏水中，定容至 1000ml）；使用时将 A 和 B 两溶液等体积混合即成 2×SSC 溶液 （3）常规配制 RPMI1640 培养液、Giemsa 染液、肝素液。 三、实验方法与步骤 （一）细胞培养（人外周血淋巴细胞培养） 1. 接种 无菌抽取外周全血 0.2~0.3ml（肝素抗凝），接种在 5ml 含有 PHA 的 RPMI1640 培养液中，37℃培养箱培养。 2. 加 BrdU 培养 24h 后加 500μg/ ml BrdU 液 0.1 ml，终浓度为 10μg/ ml