混匀后,避光培养。 3.加秋水仙素在收获细胞前2h加秋水仙素(终浓度为0.2ugml培养液)。 (二)收获细胞和制备染色体玻片 收获细胞及染色体标本制片均与人类染色体标本的制备相同 (三)标本老化 将制好的染色体玻片置37℃培养箱2天或在60℃干烤箱烤片2h (四)差别染色—紫外线照射法 1.将老化好的染色体标本片放入一平皿中(最好用牙签放在玻片下面),在 玻片上盖一张稍大些的擦镜纸,使纸的四边垂于平皿中,滴加2×SSC液到纸上, 使擦镜纸全部润湿,使平皿中放入的2×SSC溶液与玻片水平,保证有充足的 2×SSC液渗至标本上保持标本湿润。 2.将平皿置于56℃的水浴箱中,使平皿底部接触水面。 3.在水浴箱上架一支20W的紫外线灯,使灯管与标本的距离6cm左右,开 灯照射30min。 4!.照射完毕,用镊子轻轻揭去擦镜纸,用自来水轻轻冲洗玻片 5.1:10 lema染料染色8~10min(不要着色过深) 6.自来水冲洗晾干后即成SCE标本 四、注意事项 BrdU溶液最好现用现配,一次用不完,必须4℃避光保存。 2.BrdU是强的致突变剂,使用浓度不易太高,在每毫升含25mg 左右的剂量下不影响细胞增殖。外周血培养24h后加入均可。 3.用紫外线照射诱发姐妹染色单体分化时,如紫外灯功率大,照射时间应 相应减少。一般在20w的紫外灯距标本距离应在6cm左右;如果在15w紫外线 灯照射时距离标本应在4cm左右。温度要控制在50℃~60℃(冬天最好是 55℃~60℃),但不应超过60℃。如果时间过长或温度过高都易造成染色体肿胀 五、预期实验结果及分析 (一)预期实验结果 在某些进入第二次复制中期的分裂相中,清晰可见姐妹染色单体分染为一深 浅图像,可观察到姐妹染色单体同源片段等位交换相。 (二)实验结果观察分析8 混匀后，避光培养。 3. 加秋水仙素 在收获细胞前 2h 加秋水仙素（终浓度为 0.2μg/ml 培养液）。 （二）收获细胞和制备染色体玻片 收获细胞及染色体标本制片均与人类染色体标本的制备相同。 （三）标本老化 将制好的染色体玻片置 37℃培养箱 2 天或在 60℃干烤箱烤片 2h。 （四）差别染色——紫外线照射法 1. 将老化好的染色体标本片放入一平皿中（最好用牙签放在玻片下面），在 玻片上盖一张稍大些的擦镜纸，使纸的四边垂于平皿中，滴加 2×SSC 液到纸上， 使擦镜纸全部润湿，使平皿中放入的 2×SSC 溶液与玻片水平，保证有充足的 2×SSC 液渗至标本上保持标本湿润。 2. 将平皿置于 56℃的水浴箱中，使平皿底部接触水面。 3. 在水浴箱上架一支 20W 的紫外线灯，使灯管与标本的距离 6 ㎝左右，开 灯照射 30min。 4. 照射完毕，用镊子轻轻揭去擦镜纸，用自来水轻轻冲洗玻片。 5. 1:10Giemsa 染料染色 8～10min（不要着色过深）. 6. 自来水冲洗晾干后即成 SCE 标本. 四、注意事项 1．BrdU 溶液最好现用现配，一次用不完，必须 4℃避光保存。 2．BrdU 是强的致突变剂，使用浓度不易太高，在每毫升含 25mg 左右的剂量下不影响细胞增殖。外周血培养 24h 后加入均可。 3．用紫外线照射诱发姐妹染色单体分化时，如紫外灯功率大，照射时间应 相应减少。一般在 20w 的紫外灯距标本距离应在 6cm 左右；如果在 15w 紫外线 灯照射时距离标本应在 4 ㎝左右。温度要控制在 50℃~60℃（冬天最好是 55℃~60℃），但不应超过 60℃。如果时间过长或温度过高都易造成染色体肿胀。 五、预期实验结果及分析 （一）预期实验结果 在某些进入第二次复制中期的分裂相中，清晰可见姐妹染色单体分染为一深 一浅图像，可观察到姐妹染色单体同源片段等位交换相。 （二）实验结果观察分析