环境条件，使用的试剂药品等都必须严格的加以规定。 5． 为保护所提取物质的生理活性及结构上的完整性，生化分离方法多采取温和的“多 阶式”进行（常说逐层剥皮式）。常常少至几个多至几十个步骤，并不断变换各种 分离方法，才能达到纯化目的。 （钓鱼法——亲和层析法） 6． 生化分离方法的最后均一性的证明与化学上纯度的概念并不完全相同，其均一性 的评定常常是有条件的或者只能通过不同角度测定，最后才能给出相对的“均一 性”结论。 （三）生化分离制备的基本原理 与一般化学分离方法原理有许多相同，相通之处。 用于生物化学分离制备的技术，大都根据混合物中的不同组分分配率的差异把它们 分配于可用机械方法分离的两个或几个物相中（有机溶剂抽提，盐析，结晶等）。或者 将混合物置于某一物相（大多数为液相）中，外加一定作用力，使各组分分配于不同 区域，从而达到分离目的（如电泳，超离心，超过滤）。 几乎所有有机大分子物质都不能融化和蒸发（除氨基酸脂肪酸，某些维生素外）。 只限于分配在固相和液相中，并在这两相之间相互交替进行分离纯化。 ———————————————— F1 A<——————A——————F2 A F1 B<——————B——————F2 B 运动方向 a 色谱：吸附色谱，离子交换，分配，分子筛等。 F1 为流体动力；F2 为表面能，范德瓦尔 斯力位阻效应，静电引力，极化度分子筛效应，渗透（扩散），偶极作用，缔合和解 离效应等。 b 电场力： F1 为静电引力；F2 为分子摩擦力，极化度动电作用 c.扩散方法： F1 为电动力，渗透力，流体动力；F2 为分子筛效应电动力。 d.结晶： F1 为结晶格子能；F2 扩散。 e.沉降： F1 为重力，离心力；F2 为分子摩擦效应。 上述分离依据：极性，离子性质及分子大小，分子大小及形状， 介质密度。 两物质彼此分开： F1 A﹣F2 A =ΔF A F1 B﹣F2 B =ΔF B ΔF A /ΔF B=ΔF ∴在分离混合物的各组分中，必须尽量设法扩大各组分之间的ΔF 的差别。 （四）生化分离制备实验的设计，大致可分为五个阶段： 1．确定制备物研究目的及建立相应的分析鉴定方法 目的：a.在原有实验方法的基础上加以改进，求更多更纯产品。 b.为了获得新物质： 无意识的：实验中发现异常情况的追究。 有目的的：去追踪引起某现象发生的物质基础。 鉴定方法： a.生物测定方法。 b.理化测定方法，如呈色法，色谱法，光谱法，电泳法， 核磁共振法等。环境条件，使用的试剂药品等都必须严格的加以规定。 5． 为保护所提取物质的生理活性及结构上的完整性，生化分离方法多采取温和的“多 阶式”进行（常说逐层剥皮式）。常常少至几个多至几十个步骤，并不断变换各种 分离方法，才能达到纯化目的。 （钓鱼法——亲和层析法） 6． 生化分离方法的最后均一性的证明与化学上纯度的概念并不完全相同，其均一性 的评定常常是有条件的或者只能通过不同角度测定，最后才能给出相对的“均一 性”结论。 （三）生化分离制备的基本原理 与一般化学分离方法原理有许多相同，相通之处。 用于生物化学分离制备的技术，大都根据混合物中的不同组分分配率的差异把它们 分配于可用机械方法分离的两个或几个物相中（有机溶剂抽提，盐析，结晶等）。或者 将混合物置于某一物相（大多数为液相）中，外加一定作用力，使各组分分配于不同 区域，从而达到分离目的（如电泳，超离心，超过滤）。 几乎所有有机大分子物质都不能融化和蒸发（除氨基酸脂肪酸，某些维生素外）。 只限于分配在固相和液相中，并在这两相之间相互交替进行分离纯化。 ———————————————— F1 A<——————A——————F2 A F1 B<——————B——————F2 B 运动方向 a 色谱：吸附色谱，离子交换，分配，分子筛等。 F1 为流体动力；F2 为表面能，范德瓦尔 斯力位阻效应，静电引力，极化度分子筛效应，渗透（扩散），偶极作用，缔合和解 离效应等。 b 电场力： F1 为静电引力；F2 为分子摩擦力，极化度动电作用 c.扩散方法： F1 为电动力，渗透力，流体动力；F2 为分子筛效应电动力。 d.结晶： F1 为结晶格子能；F2 扩散。 e.沉降： F1 为重力，离心力；F2 为分子摩擦效应。 上述分离依据：极性，离子性质及分子大小，分子大小及形状， 介质密度。 两物质彼此分开： F1 A﹣F2 A =ΔF A F1 B﹣F2 B =ΔF B ΔF A /ΔF B=ΔF ∴在分离混合物的各组分中，必须尽量设法扩大各组分之间的ΔF 的差别。 （四）生化分离制备实验的设计，大致可分为五个阶段： 1．确定制备物研究目的及建立相应的分析鉴定方法 目的：a.在原有实验方法的基础上加以改进，求更多更纯产品。 b.为了获得新物质： 无意识的：实验中发现异常情况的追究。 有目的的：去追踪引起某现象发生的物质基础。 鉴定方法： a.生物测定方法。 b.理化测定方法，如呈色法，色谱法，光谱法，电泳法， 核磁共振法等