25g(mL样品+225mL稀释液，均质 10倍系列稀释 选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种LST肉汤管 36C±1℃48d2h 不产气 产气 GLB肉汤 36℃±1℃4gh42 大肠菌群阴性 大肠菌群阳性 查MPN表 报告结果 图1-21大肠菌群MPN计数法检验程序 (二)大肠菌群平板计数法（第二法） 大肠菌群平板计数法的检验程序见图1-2-2。 L.操作步骤 (1)样品的稀释：按大肠菌群MPN计数法进行。 (2)平板计数 ①根据对检样污染状况的估计，选取2一3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个 无菌平皿，每皿1ml。同时取1L生理盐水加入无菌平皿作空白对照。 ②及时将15mL~20mL冷至46C±1℃的结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)倾注于每 个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3mL一4mL VRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于36C±1C培养18h~24h。 (3)平板菌落数的选择：选取菌落数在15C℉U~150C℉U之间的 ，分别计数平 上出现的典型可聚大肠菌商家·臭面客为紫红色，菌陈周同有红色的测盖沉淀不 菌落直径为0.5mm或更大。 (4)证实试验：从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于 BGLB肉汤管内，36℃±1℃培养24h~48h,观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报 为大肠菌群阳性 (5)大肠菌群平板计数的报告：经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以计数的 板典型和可疑菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g(mL)样品中大肠菌群数。例如，10样 品稀释液1mL,在VRBA平板上有1O0个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤 （二）大肠菌群平板计数法（第二法） 大肠菌群平板计数法的检验程序见图 1-2-2。 1. 操作步骤 （1）样品的稀释：按大肠菌群MPN计数法进行。 （2）平板计数 ① 根据对检样污染状况的估计，选取2～3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种2个 无菌平皿，每皿1 mL。同时取1 mL生理盐水加入无菌平皿作空白对照。 ② 及时将15 mL～20 mL冷至46℃±1℃的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）倾注于每 个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL～4 mL VRBA覆盖平板表层。翻转平板，置于36℃±1℃培养18 h～24 h。 （3）平板菌落数的选择：选取菌落数在15 CFU～150 CFU之间的平板，分别计数平板 上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环， 菌落直径为0.5 mm或更大。 （4）证实试验：从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于 BGLB肉汤管内，36℃±1℃培养24 h～48 h，观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气，即可报 告为大肠菌群阳性。 （5）大肠菌群平板计数的报告：经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以计数的平 板典型和可疑菌落数，再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。例如，10-4样 品稀释液1 mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤 检 样 25 g (mL)样品+225 mL 稀释液，均质 10 倍系列稀释 选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种LST肉汤管 36℃±1℃ 产气 BGLB 肉汤 不产气 产 气 48h±2h 不产气 大肠菌群阴性 大肠菌群阳性 查 MPN 表 报告结果 36℃±1℃ 48h±2h 图1-2-1 大肠菌群 MPN 计数法检验程序