5期 钱云云等:恩诺沙星在罗氏沼虾体内的药物代谢动力学 L/kg,C/F0.035L/h恕g,K20.01/h,K10.005/h,AUC291.898ugmh,Tm0.083h, and C6.293ug/ the main pharmacokinetic parameters of NER in hepatopancreas and muscle 1.94lh,tm70.732h,AUC 608. ug/ml th, tip 0.000 h, tips 59. 456 h, and AUC 217 039 ug/ml h. Ciprofloxacin the main active metabolite of enrofloxacin exists in relatively low levels in all the main tissues of the shrimp, but its kinetics in the heplymp ould ot be described by a one or tworcompartment open mdel Key words: Enrofloxacin; Macrobrachium rosenbergii; Pharmacokinetics 恩诺沙星( enrofloxacin,NR)为第三代喹诺相色谱仪;WH2型微型旋涡混合仪;F-20型高 酮类药物,属广谱抗菌药,抗菌力强,可用于治速分散均质机;氮气吹干仪;Y00型微量天 疗多种细菌感染性疾病,目前在水产动物病害平,T-16G台式离心机。 防治中应用极为广泛。但恩诺沙星代谢缓慢,1.4给药及样品采集恩诺沙星按照10mg/kg 容易残留于肝肌肉等动物组织中,长期摄入该虾体重剂量进行肌肉注射给药。分别于注射后 药容易引起关节和软骨损伤,大量药物还可能抽取0.3m血淋巴,置于预先装有等体积ACD 造成消化系统、泌尿系统甚至神经系统的损抗凝剂的1.5 ml eppendorf管中,同时取肝胰 害。目前恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的腺肌肉组织。所有样品均于-70℃保存备用 残留已引起广泛关注。我国关于恩诺沙星在水1.5样品处理 产动物体内的药物代谢动力学研究较少,仅见1.5.1血淋巴处理样品室温自然解冻,摇匀 恩诺沙星在鲤( Cyprinus carpio)、中国对虾后吸取0.5m于10ml具塞离心管中,加入提 ( Fenneropenaeus chinensis)、凡纳滨对虾取液(lm盐酸乙腈=43500,v/)7ml,旋涡 ( Litopenaeus vannamei)、中华绒螯蟹( Eriocheir混合仪剧烈混合2mn,于4℃8000r/min条件 sinensis))12~等体内的药物代谢动力学报道。鉴下离心10min,取上清液,40℃旋转蒸发至干 此,本实验应用高效液相色谱法(RPHC)研用1m流动相溶解,0.45μm滤膜过滤,滤液用 究了恩诺沙星在罗氏沼虾( Macrobrachium于 RPHAC分析 rosenberg)体内的代谢动力学规律,以期为恩诺1.52肝胰腺、肌肉组织样处理样品室温自 沙星在罗氏沼虾体内的残留检测以及安全用药然解冻,高速分散均质机捣碎2min,准确称取 提供理论依据。 1.00g的均质样品于10m离心管中,同时加入1 1材料与方法 m氯化钠溶液(1m)和1mlBS缓冲液(0.2 mLpH7.4)旋涡混合仪上混合5mn,加入10 1.1实验动物罗氏沼虾,平均体重约20g,m二氯甲烷后剧烈振荡5mn,于4℃8000r/ 购于上海市农贸市场,实验前暂养2周,水温mn条件下离心10min,上清液用以上方法重复 (25.0±10)℃连续充氧。 一次。收集二氯甲烷层,35℃旋转蒸发至干,用1 1.2药品和试剂恩诺沙星标准品(纯度高于m流动相及5m正己烷溶解去脂,0.45μm滤膜 98.0%批号931060-6)、环丙沙星( ciprofloxacin,过滤,滤液用于 RPHPLC分析。 CIP)标准品(纯度为9903%,批号005),购于1.6测定条件流动相:乙腈/四丁基溴化铵 Sigma公司;恩诺沙星原药(纯度为97.5%,批溶液(0.010ml)(磷酸调节至pH3.1)=5/95 号0405182),浙江医药股份有限公司新昌制药();色谱条件为 ZORBAX$BC8分析柱(5 厂惠赠;二氯甲烷、正己烷、乙腈、四丁基溴化铵μm,150m×.6mm,LD);检测波长:278m;流 等均为HHC级;磷酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二速:1.0m/min,柱温:40℃;自动进样量:10叫。 钠、氯化钠、柠檬酸三钠等均为国产分析纯 1.7标准曲线及最低检测限 1.3实验仪器与设备 Aglient--100型高效液1.7.1标准母液配制准确称取恩诺沙星和 2 01994-2007 China Academic Journal Electronic Publishing Ho ouse.allrightsreservedhttp://www.cnki.netLΠkg , CLΠF 01035 LΠh·kg , K12 0101Πh , K21 01005Πh ,AUC 2911898μgΠml·h , Tmax 01083 h ,and Cmax 61293μgΠml ; the main pharmacokinetic parameters of NER in hepatopancreas and muscle were t1Π2α 11941 h , t1Π2β 701732 h ,AUC 308107μgΠml·h , t1Π2α 01000 h , t1Π2β 591456 h ,and AUC 2171039μgΠml·h. Ciprofloxacin ,the main active metabolite of enrofloxacin ,exists in relatively low levels in all the main tissues of the shrimp ,but its kinetics in the hemolymph could not be described by a one2 or two2compartment open model. Key words:Enrofloxacin ; Macrobrachium rosenbergii ; Pharmacokinetics 恩诺沙星(enrofloxacin ,ENR) 为第三代喹诺 酮类药物 ,属广谱抗菌药 ,抗菌力强 ,可用于治 疗多种细菌感染性疾病 ,目前在水产动物病害 防治中应用极为广泛。但恩诺沙星代谢缓慢 , 容易残留于肝、肌肉等动物组织中 ,长期摄入该 药容易引起关节和软骨损伤 ,大量药物还可能 造成消化系统、泌尿系统甚至神经系统的损 害 [1 ] 。目前恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星的 残留已引起广泛关注。我国关于恩诺沙星在水 产动物体内的药物代谢动力学研究较少 ,仅见 恩诺 沙 星 在 鲤 ( Cyprinus carpio ) 、中 国 对 虾 ( Fenneropenaeus chinensis ) 、凡 纳 滨 对 虾 ( Litopenaeus vannamei) 、中华绒螯蟹 ( Eriocheir sinensis) [2～5 ]等体内的药物代谢动力学报道。鉴 此 ,本实验应用高效液相色谱法 (RP2HPLC) 研 究了 恩 诺 沙 星 在 罗 氏 沼 虾 ( Macrobrachium rosenbergii) 体内的代谢动力学规律 ,以期为恩诺 沙星在罗氏沼虾体内的残留检测以及安全用药 提供理论依据。 1 材料与方法 111 实验动物 罗氏沼虾 ,平均体重约 20 g , 购于上海市农贸市场 ,实验前暂养 2 周 ,水温 (2510 ±110) ℃,连续充氧。 112 药品和试剂 恩诺沙星标准品(纯度高于 9810 % ,批号 9310626026) 、环丙沙星 (ciprofloxacin , CIP) 标准品(纯度为 99103 % ,批号 00025) ,购于 Sigma 公司 ;恩诺沙星原药 (纯度为 9715 % ,批 号 04051822) ,浙江医药股份有限公司新昌制药 厂惠赠 ;二氯甲烷、正己烷、乙腈、四丁基溴化铵 等均为 HPLC 级 ;磷酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二 钠、氯化钠、柠檬酸三钠等均为国产分析纯。 113 实验仪器与设备 Aglient21100 型高效液 相色谱仪 ;WH22 型微型旋涡混合仪 ;FJ220 型高 速分散均质机 ;氮气吹干仪 ;J Y2002 型微量天 平 ;TGL216G台式离心机。 114 给药及样品采集 恩诺沙星按照 10 mgΠkg 虾体重剂量进行肌肉注射给药。分别于注射后 抽取 013 ml 血淋巴 ,置于预先装有等体积 ACD 抗凝剂[6] 的 115 ml eppendorf 管中 ,同时取肝胰 腺、肌肉组织。所有样品均于 - 70 ℃保存备用。 115 样品处理 11511 血淋巴处理 样品室温自然解冻 ,摇匀 后吸取 015 ml 于 10 ml 具塞离心管中 ,加入提 取液(1 molΠL 盐酸∶乙腈 = 4∶500 ,vΠv) 7 ml ,旋涡 混合仪剧烈混合 2 min ,于 4 ℃、8 000 rΠmin 条件 下离心 10 min ,取上清液 ,40 ℃旋转蒸发至干 , 用 1 ml 流动相溶解 ,0145μm 滤膜过滤 ,滤液用 于 RP2HPLC 分析。 11512 肝胰腺、肌肉组织样处理 样品室温自 然解冻 ,高速分散均质机捣碎 2 min ,准确称取 1100 g 的均质样品于 10 ml 离心管中 ,同时加入 1 ml 氯化钠溶液(1 molΠL) 和 1 ml PBS 缓冲液(012 molΠL ,pH 714) ,旋涡混合仪上混合 5 min ,加入 10 ml 二氯甲烷后剧烈振荡 5 min ,于 4 ℃、8 000 rΠ min 条件下离心 10 min ,上清液用以上方法重复 一次。收集二氯甲烷层 ,35 ℃旋转蒸发至干 ,用 1 ml 流动相及 5 ml 正己烷溶解去脂 ,0145μm 滤膜 过滤 ,滤液用于 RP2HPLC 分析。 116 测定条件 流动相 :乙腈Π四丁基溴化铵 溶液(01010 molΠL) (磷酸调节至 pH 311) = 5Π95 (vΠv) ;色谱条件为: ZORBAX SB2C18 分析柱 (5 μm ,150 mm ×416 mm ,I. D) ;检测波长 :278 nm ;流 速:110 mlΠmin ;柱温:40 ℃;自动进样量:10μl。 117 标准曲线及最低检测限 11711 标准母液配制 准确称取恩诺沙星和 5 期 钱云云等 :恩诺沙星在罗氏沼虾体内的药物代谢动力学 · 36 ·