动物学杂志 Chinese Journal d zoology 42卷 环丙沙星标准品各0.0100g,溶于蒸馏水中(滴1.82精密度测定采用加入法,即分别于 加浓盐酸以助溶),配制成100g/m的恩诺沙日内实验的前中、末,分别取100ugm的恩诺 星、环丙沙星标准品母液4℃保存备用。 沙星、环丙沙星标准母液100叫,加至1m血淋 1.7.2标准曲线制备将100μg/m的恩诺沙巴样和1.0g肝胰腺、肌肉组织样品中,同1.5 星、环丙沙星标准品母液倍数稀释成10、5、1、节样品处理,HHC测定各组织中药物浓度。每 0.5、0.1、0.05咄g/ml标准溶液。取1.00m血淋样重复3次,记录恩诺沙星、环丙沙星的峰面 巴或1.00g肝胰腺、肌肉8份,除一份作空白对积,计算日内精密度;一周重复3次,每样重复 照外,其他7份分别加入以上相应体积的标准3次,计算日间精密度。 溶液,使之浓度为0.05~10μg/m,然后按1.51.9数据处理药物动力学模型拟合及相关 节的方法处理样品,用于HHC分析。以药物参数(分布半衰期1、消除半衰期lB、表观分 的峰面积为纵坐标,药物质量浓度为横坐标作布容积v/F、总体清除率C/F、中央室向周边 标准曲线,进行回归分析,求出回归方程和相关室转运速率常数k2周边室向中央室转运速 系数。以引起2倍基线噪音(S/N=2)的药物浓率常数k1、曲线下面积AUC.、最大药物浓 度为最低检测限①LOD)。 度时间rm、最大药物浓度Cm)计算采用 1.8回收率及方法精密度测定 ICPKP药动学软件 1.8.1回收率测定采用加标回收法,即取3 份1m血淋巴或1.00g肝胰腺、肌肉组织,分2结果 别加入100ugm和10ug/ml标准溶液100u 2.1恩诺沙星环丙沙星的色谱行为色谱图 及1ψg/m标准溶液50叫,使各组织样中恩诺 显示罗氏沼虾各组织中恩诺沙星和环丙沙星药 沙星及环丙沙星等药物的理论含量分别为10、物及杂质均能较好地分离,基线平稳,特异性 10.5μg,分别按1.5节的方法处理。根据恩诺 强,重现性好,同时样品中两种药物的保留时间 沙星和环丙沙星的标准曲线求出各组织中实测均不超过8mn,分析效率高环丙沙星保留时 药物含量。回收率(%)=样品实测浓度样品间少于恩诺沙星(图1)。 理论浓度×100% b b b 皇八:八L人 B 图1罗氏沼虾各组织中恩诺沙星、环丙沙星的色谱行为 Fig 1 HPLC chromatogram of ENR and CIP in the tissues of M. rosenbergii A.标准溶液(5ug/m)色谱行为;B.给药后6h血淋巴组织中色谱行为;C.给药后3h肝胰腺组织中色谱行为,D.加标准样品 (0.5ψgm)后肌肉组织中色谱行为。“a"所指示的色谱峰为环丙沙星峰,“b"所指示的色谱峰 A. HHC chromatogram from the standard sample of ENR and CIP: B Chromatogram from the hemolymph of M. rosenbergii at 6 h C. Chromatogram from hepatopancreas of M. rosenbergii at 3 h; D. Chromatogram from muscle of M. rosenbergii at 6 h Ptak"“a" means CIP,Peak“b” 01994-2007ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreservedhttp://www.cnki.net环丙沙星标准品各 01010 0 g ,溶于蒸馏水中(滴 加浓盐酸以助溶) ,配制成 100μgΠml 的恩诺沙 星、环丙沙星标准品母液 ,4 ℃保存备用。 11712 标准曲线制备 将 100μgΠml 的恩诺沙 星、环丙沙星标准品母液倍数稀释成 10、5、1、 015、011、0105μgΠml 标准溶液。取 1100 ml 血淋 巴或 1100 g 肝胰腺、肌肉 8 份 ,除一份作空白对 照外 ,其他 7 份分别加入以上相应体积的标准 溶液 ,使之浓度为 0105～10μgΠml ,然后按 115 节的方法处理样品 ,用于 HPLC 分析。以药物 的峰面积为纵坐标 ,药物质量浓度为横坐标作 标准曲线 ,进行回归分析 ,求出回归方程和相关 系数。以引起 2 倍基线噪音(SΠN = 2) 的药物浓 度为最低检测限(LOD) 。 118 回收率及方法精密度测定 11811 回收率测定 采用加标回收法 ,即取 3 份 1 ml 血淋巴或 1100 g 肝胰腺、肌肉组织 ,分 别加入 100μgΠml 和 10μgΠml 标准溶液 100μl 及 1μgΠml 标准溶液 50μl ,使各组织样中恩诺 沙星及环丙沙星等药物的理论含量分别为 10、 1、015μg ,分别按 115 节的方法处理。根据恩诺 沙星和环丙沙星的标准曲线求出各组织中实测 药物含量。回收率 ( %) = 样品实测浓度Π样品 理论浓度 ×100 %。 11812 精密度测定 采用加入法 ,即分别于一 日内实验的前、中、末 ,分别取 100μgΠml 的恩诺 沙星、环丙沙星标准母液 100μl ,加至 1 ml 血淋 巴样和 1100 g 肝胰腺、肌肉组织样品中 ,同 115 节样品处理 ,HPLC 测定各组织中药物浓度。每 样重复 3 次 ,记录恩诺沙星、环丙沙星的峰面 积 ,计算日内精密度 ;一周重复 3 次 ,每样重复 3 次 ,计算日间精密度。 119 数据处理 药物动力学模型拟合及相关 参数(分布半衰期 t1Π2α、消除半衰期 t1Π2β、表观分 布容积 VdΠF、总体清除率 CLΠF、中央室向周边 室转运速率常数 K12 、周边室向中央室转运速 率常数 K21 、曲线下面积 AUC0 - ∞ 、最大药物浓 度时间 Tmax 、最大药物浓度 Cmax ) 计算采用 MCPKP 药动学软件。 2 结 果 211 恩诺沙星、环丙沙星的色谱行为 色谱图 显示罗氏沼虾各组织中恩诺沙星和环丙沙星药 物及杂质均能较好地分离 ,基线平稳 ,特异性 强 ,重现性好 ,同时样品中两种药物的保留时间 均不超过 8 min ,分析效率高 ,环丙沙星保留时 间少于恩诺沙星(图 1) 。 图 1 罗氏沼虾各组织中恩诺沙星、环丙沙星的色谱行为 Fig. 1 HPLC chromatogram of ENR and CIP in the tissues of M. rosenbergii A. 标准溶液(5μgΠml) 色谱行为 ; B. 给药后 6 h 血淋巴组织中色谱行为 ; C. 给药后 3 h 肝胰腺组织中色谱行为 ; D. 加标准样品 (015μgΠml) 后肌肉组织中色谱行为。“a”所指示的色谱峰为环丙沙星峰“, b”所指示的色谱峰为恩诺沙星峰。 A. HPLC chromatogram from the standard sample of ENR and CIP ; B. Chromatogram from the hemolymph of M. rosenbergii at 6 h ; C. Chromatogram from hepatopancreas of M. rosenbergii at 3 h ; D. Chromatogram from muscle of M. rosenbergii at 6 h. Peak“a”means CIP ,Peak“b”means ENR. · 46 · 动物学杂志 Chinese Journal of Zoology 42 卷