操作时应予注意。OD见光易变质，与过氧化氢混合成底物应用液后更不稳定，须现配置现用。在 试剂盒中，OD和2O2一般分成二组分，OPD可制成一定量的粉剂或片剂形式，片剂中含有发泡助 溶剂，使用更为方便。过氧化氢则配入底物缓冲液中，有制成易保存的浓缩液，使用时用燕馏水稀 释。先进的ELISA试剂盒中则直接配成含保护剂的工作浓度为0.02%202的应用液，只需加入0D 后即可作为底物应用液。 TWB经R即作用后共产物显蓝色，目视对比鲜明。TB性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与2O2 溶液混和即成应用液，可直接作底物使用。另外，TMB又有无致癌性等优点，因此在LISA中应用 日趋广泛。酶反应用HCL或H2S04终止后，TWB产物由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适吸收 波长为405nm。 ABTS虽不如OD和TB敏感，但空白值极低，也为一些试剂盒所采用。 另一种RP的底物为3-(4-羟基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,,HPPA,经RP作 用后，产物显荧光，可用荧光光度计测量。用于LISA的优点为可加宽定量测定的线性范围。 HRP对氢受体的专一性很高，仅作用于2O2、小分醇的过氧化物和尿素过氧化物(urea peroxide)。 202应用最多，但尿素过氧化物为固体，作为试剂较202方便、稳定。试剂盒供应尿素过氧化物 片剂，用蒸馏水溶解后，在底物缓冲液中密闭、低温(2一8℃)可稳定1年。 3.3.2AP的底物 AP为磷酸酯酶，一般采用对硝基苯磷酸酯(o-nitrophenyl phosphate,p-NPP)作为底物，可制成片 剂，使用方便。产物为黄色的对硝基酚，在405m波长处有吸收峰。用NaOH终止酶反应后，黄色可 稳定一时间。 AP也有发荧光底物（磷酸4-甲基伞酮），可用于ELISA作荧光测定，敏感度较高于用显色底物的比 色法。 3.4洗涤液 在板式LISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水。 3.5酶反应终止液 常用的RP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式LISA中一般采用 2mol/L. 3.6阳性对照品和阴性对照品 阳性对照品(positive control)和阴性对照品(negative control)是检验试验有效性的控制品，同 时也作为判断结果的对照，因此对照品，特别是阳性对照品的基本组成应尽量与检测标本的组成相 一致。以人血清为标本的测定，对照品最好也为人血清，因为正常人血清在各种LISA模式中可产 操作时应予注意。OPD 见光易变质，与过氧化氢混合成底物应用液后更不稳定，须现配置现用。在 试剂盒中，OPD 和 H2O2 一般分成二组分，OPD 可制成一定量的粉剂或片剂形式，片剂中含有发泡助 溶剂，使用更为方便。过氧化氢则配入底物缓冲液中，有制成易保存的浓缩液，使用时用蒸馏水稀 释。先进的 ELISA 试剂盒中则直接配成含保护剂的工作浓度为 0.02% H2O2 的应用液,只需加入 OPD 后即可作为底物应用液。 TMB 经 HRP 作用后共产物显蓝色，目视对比鲜明。TMB 性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与 H2O2 溶液混和即成应用液，可直接作底物使用。另外，TMB 又有无致癌性等优点，因此在 ELISA 中应用 日趋广泛。酶反应用 HCL 或 H2SO4 终止后，TMB 产物由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适吸收 波长为 405nm。 ABTS 虽不如 OPD 和 TMB 敏感，但空白值极低，也为一些试剂盒所采用。 另一种 HRP 的底物为 3-(4-羟基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA]，经 HRP 作 用后，产物显荧光，可用荧光光度计测量。用于 ELISA 的优点为可加宽定量测定的线性范围。 HRP 对氢受体的专一性很高，仅作用于 H2O2、小分醇的过氧化物和尿素过氧化物(urea peroxide)。 H2O2 应用最多，但尿素过氧化物为固体，作为试剂较 H2O2 方便、稳定。试剂盒供应尿素过氧化物 片剂，用蒸馏水溶解后，在底物缓冲液中密闭、低温（2～8℃）可稳定 1 年。 3.3.2 AP 的底物 AP 为磷酸酯酶，一般采用对硝基苯磷酸酯(p-nitrophenyl phosphate,p-NPP)作为底物，可制成片 剂，使用方便。产物为黄色的对硝基酚，在 405nm 波长处有吸收峰。用 NaOH 终止酶反应后，黄色可 稳定一时间。 AP 也有发荧光底物（磷酸 4-甲基伞酮），可用于 ELISA 作荧光测定，敏感度较高于用显色底物的比 色法。 3.4 洗涤液 在板式 ELISA 中，常用的稀释液为含 0.05%吐温 20 磷酸缓冲盐水。 3.5 酶反应终止液 常用的 HRP 反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式 ELISA 中一般采用 2mol/L。 3.6 阳性对照品和阴性对照品 阳性对照品(positive control)和阴性对照品(negative control)是检验试验有效性的控制品，同 时也作为判断结果的对照，因此对照品，特别是阳性对照品的基本组成应尽量与检测标本的组成相 一致。以人血清为标本的测定，对照品最好也为人血清，因为正常人血清在各种 ELISA 模式中可产