实验三氨基酸分离——双向层析法 、实验目的 学习双向纸层析的原理和操作方法,进行混合氨基酸的分离分析。 二、实验原理 纸层析是以滤纸作支持物,用一定的溶剂系统展开,使混合样品达到分离分 析的层析方法。其一般操作是将样品溶解在适当溶剂中,点样在滤纸的一端;再 选用适当的溶剂系统,从点样的一端通过毛细现象向另一端展开,展开完毕,取 出滤纸晾干或烘干,再以适当的显色剂或紫外灯、荧光灯下观察其图谱。样品经 展开后其一物质在纸层析谱上的位置常用比移值R来表示 原点至纸层析斑点中心点的距离 原点至溶剂前沿的距离 纸层析可看作是溶质(样品)在固定相与流动相之间的连续抽提,由于溶质 在两相之间的分配系数不同而达到分离。一定的物质在两相间有固定的分配系 数,因而在恒定条件(液剂、P、温度)下,各物质有固定的R值,据此可达到 分析鉴定的目的。 由于滤纸纤维可吸收20~25%的水分;且其中6~7%以氢键形式与纤维素上 羟基结合,一般条件下难脱去;所以纸层析实际上是以水相作固定相,展开的溶 剂作流动相 纸层析操作按溶剂展开方向可分为上行、下行和径向三种。氨基酸分离一般 用上行法。上行法又分单向(成分较为简单的样品)和双向(单向时斑点重叠分 离不开,于是在其垂直方向用另一种溶剂系统展层)。双相层析谱可分辨十几种 以上的样品。 层析滤纸要求: (1)质地均匀,平整无折痕,厚薄适当,溶剂能匀速展开。 (2)机械强度好,溶剂展开后能保持原状,不易折到。 (3)有一定纯度而少杂质,以免影响层析图谱背景。 (4)纤维松紧适宜,一般选用中速滤纸,或根据溶剂选择。如丁醇类粘度 大,宜用快速滤纸:而氯仿、石油醚展开快,宜用慢速滤纸 66 原点至溶剂前沿的距离 原点至纸层析斑点中心点的距离 实验三 氨基酸分离——双向层析法 一、实验目的 学习双向纸层析的原理和操作方法，进行混合氨基酸的分离分析。 二、实验原理 纸层析是以滤纸作支持物，用一定的溶剂系统展开，使混合样品达到分离分 析的层析方法。其一般操作是将样品溶解在适当溶剂中，点样在滤纸的一端；再 选用适当的溶剂系统，从点样的一端通过毛细现象向另一端展开，展开完毕，取 出滤纸晾干或烘干，再以适当的显色剂或紫外灯、荧光灯下观察其图谱。样品经 展开后其一物质在纸层析谱上的位置常用比移值 Rf来表示。 Rf = 纸层析可看作是溶质（样品）在固定相与流动相之间的连续抽提，由于溶质 在两相之间的分配系数不同而达到分离。一定的物质在两相间有固定的分配系 数，因而在恒定条件（液剂、PH、温度）下，各物质有固定的 Rf值，据此可达到 分析鉴定的目的。 由于滤纸纤维可吸收 20～25%的水分；且其中 6～7%以氢键形式与纤维素上 羟基结合，一般条件下难脱去；所以纸层析实际上是以水相作固定相，展开的溶 剂作流动相。 纸层析操作按溶剂展开方向可分为上行、下行和径向三种。氨基酸分离一般 用上行法。上行法又分单向（成分较为简单的样品）和双向（单向时斑点重叠分 离不开，于是在其垂直方向用另一种溶剂系统展层）。双相层析谱可分辨十几种 以上的样品。 层析滤纸要求： （1）质地均匀，平整无折痕，厚薄适当，溶剂能匀速展开。 （2）机械强度好，溶剂展开后能保持原状，不易折到。 （3）有一定纯度而少杂质，以免影响层析图谱背景。 （4）纤维松紧适宜，一般选用中速滤纸，或根据溶剂选择。如丁醇类粘度 大，宜用快速滤纸；而氯仿、石油醚展开快，宜用慢速滤纸