正在加载图片...
5期 季必霞等：大花蕙兰多倍体的高效诱导 559 1.2.2.2外部形态比较 1材料与方法 随机选取培养条件一致、生长状态良好的多倍 1.1供试材料 体和二倍体大花蕙兰组培苗各20株，测量株高、根 二倍体大花蕙兰‘红瀑布'组培材料选用安徽 长，并测量从顶部起第2~3对叶片的长、宽、厚度， 大学生命科学学院植物组培室保存的无菌苗。 求其平均值，重复3次。 1.2方法 成活率(%)=成活苗数/接种总数×100%(1) 1.2.1大花蕙兰多倍体的诱导 诱变率(%)=诱变苗数/接种总数×100%(2) 取2~3cm高的大花蕙兰无菌苗丛芽，将其浸 1.2.2.3叶片气孔、保卫细胞比较 人浓度分别为0%、0.01%、0.05%、0.1%的秋水仙 处理后的大花蕙兰组培苗培养30d后，撕取 素溶液中，处理时间分别为0、12、24、48h,每个处理 植株基部向上第2~3叶片下表皮制片，10×10倍 30株，重复3次。处理后用无菌水冲洗5次，灭菌滤 显微镜下随机观察10个视野的气孔器数目，计算 纸吸干表面水分，转接到MS+0.1~0.5mg·L-1 气孔频率：10×40倍显微镜下随机统计30个气孔 BA培养基，在25±2℃、光照强度2500K、每日光 保卫细胞的长、宽度，并统计保卫细胞中的叶绿体 照14h的条件下培养30d,观察记录生长情况。 数[)，求平均值。以相同生长阶段的二倍体大花 对形态上有明显变化的植株，进行染色体数量检 蕙兰叶片的相同部位作为对照。 测，从中筛选出多倍体变异株。 2结果与分析 1.2.2大花蕙兰多倍体的鉴定 1.2.2.1染色体倍性鉴定 2.1染色体倍性鉴定 取诱变后形态显著变化的大花蕙兰植株(134 根尖染色体压片表明：134株形态明显变异的 株)的根尖，卡诺氏固定液(3份95%酒精：1份冰 植株经过镜检，根据鉴定标准，13株是染色体加倍 醋酸)固定，3~4d后采用福尔根染色法]制片， 的植株。而其他为嵌合体植株，其中四倍体嵌合体 以二倍体大花蕙兰成熟植株作为对照。在100× 118株、八倍体嵌合体3株。另外，还发现少数非 油镜下每株随机选择10个视野观察、统计细胞的 整倍染色体的细胞。和对照相比，多倍体细胞体 染色体数目，将85%以上具有恒定一致的染色体 积、核仁明显增大，染色体数明显加倍。二倍体细 数作为该品种的染色体数目[，用Olympus Bx-51 胞、多倍体细胞的染色体数目分别为2n=2x=40 照相系统进行拍照。 (图1)、2n=4x=80(图1)。 152m 0 图1二倍体（左）与多倍体（右）染色体数目比较(×100) Fig.1 Comparison of chromosome number of diploid(left)and polyploid(right) 2.2秋水仙素处理对大花蕙兰诱导率的影响 随着秋水仙素浓度的增高，大花蕙兰的成活率逐渐 秋水仙素溶液处理大花蕙兰无菌苗丛芽的结 降低，当浓度为0.1%处理48h时，成活率达到最 果如表1所示：不同浓度秋水仙素和不同处理时间 低，为21.6%。而大花蕙兰多倍体的诱导率随着秋 对大花蕙兰丛芽的成活率和诱导率有明显影响。 水仙素的浓度的增加呈先上升后下降的趋势，以秋! >?@AB !# ! CD>? ¥~J^_‘‘abc’ð¼Xjõs)* JK;LMKKN!"ð¼fghvdef。 !# $ AB !# $# ! !"#$%&’(+, B $ % & ’( vJ^_‘defgh，"[ iyz±ji)* 、)# )!* 、)# )+* 、)# !* vklm nklV，wx{|±ji )、!$、$,、,- .，mnwx &) -，Ão& p。wx¨sdelqr+ p，set uvwÿl±，xyÜ /0 1 )# ! % )# + (2·3 4 ! 567 ¼ò%，þ $+ 8 $9、z{,z $ +)) :;、mHz { !, . v¼ò &) <，
|};Ú~。 ºÂªp®v!-，«¬~¡R ，>VõV~p§-。 !# $# $ !"#$%&’(EF !# $# $# ! GH’&IEF Bop¨ªp®vJ^_‘!-（!&, -）v
，l（& =+* ：! ），& % , < ¨rs«¬［!&］ â， ]¥~J^_‘!!-1i{。þ !)) > m-6õ !) n
、@Av «¬~¡(，" -+* ]ºÁÂ0v«¬~ ¡1iWô³v«¬~¡(［!,］ ，s ?:@(ABC 6;D+! {I{。 !# $# $# $ JKLMNO 6õB¼ò0、;Úìëv ~¥~J^_‘ð¼f $) -，R-、 Ú，AR> ¡/ $ % & vÚ、¢、£z， ¤¥¦Æ，Ão & p。 !§（*）E!§f¡F y³¨¡ >!))* （!） op（*）Eopf¡F y³¨¡ >!))* （$） !# $# $# & PQRS、TUVWNO wx¨vJ^_‘ð¼f¼ò &) < ¨，©B !-%ªº/ $ % & «â，!) > !) ª¬6
!) nv¢£(¡(， ¢£®；!) > ,) ª¬6 &) n¢£ g¯@AvÚ、¢z，Ag¯@AVv ~ ¡［!+］ ，¤¥¦Æ。]u;Ú°±v¥~J^ _‘vu²1i{。 $ XY@4Z $# ! GH’&IEF
«¬~³：!&, -ªp§v !-Ç，d´µ，!& -¯«¬~ v!-。¶·i¸O~!-，V¹~¸O~ !!- -、º~¸O~ & -。»,，¼[½K¡¾ ¿«¬~v@A。{À，~@A~ Á、©ÂªJ，«¬~¡ª。¥~@ A、~@Av«¬~¡(±ji $G E $; E ,) （à !）、$G E ,; E -)（à !）。 3 ! [&’（\）@%&’（]）GH’^_NO（ # !$$） %&’( ! )*+,-.&/*0 *1 23.*+*/*+4 05+64. *1 7&,8*&7（8419）-07 ,*8:,8*&7（.&’39） $# $ ‘abcdef!"#$+,g(hi klmnklwxJ^_‘defghv Ä ! ×Å：tuyzklmntuwx{| J^_‘ghv!§o}ªÆÇ。 Èklmnyzv，J^_‘v!§ÉÊ ËÌ，Íyzi )# !* wx ,- . {，!§ÜÎ Ì，i $!# H* 。¶J^_‘~vo}Èk lmnvyzvÏ8ºÐ¨ËvÑú，]k + I 567：J^_‘~v‘o} ++=