进行凝胶电泳时，常常用一种染料作前沿物质，蛋白质分子在电泳中的移动距离和 前沿物质移动的距离之比值称为相对迁移率，相对迁移率和分子质量的对数成直线关系。 以标准蛋白质分子质量的对数和其相付千移率作图.得到标准曲线。将未知蛋白质在同 洋条件下电泳，根据测得的样品相对迁移率，从标准曲线上便可查出其分子量（图2-30） 样品孔 上层缓冲液 几n 94 正极 144 图2.30聚丙烯酰胺凝胶申泳法测定分子量 ()聚内酰按胶电示意：电泳分离图：（©）蛋白质分子量对数与其迁移率的关 (三)沉降法 沉降法又称超速离心法。蛋白质溶液在受到强大的离心力作用时，蛋白质分子趋于 下沉，沉降速度与蛋白质分子的大小、率度和分子形状有关，也与溶剂的密度和粘度有 关。蛋白质颗粒在离心场中的沉降速度用每单位时间内颗粒下沉的距离来表示 在离心场中，蛋白质分子所受到的净离心力（离心力减去浮力）与溶剂的摩擦力平 衡时，每单位离心场强度的沉降速度称为沉降系数(Sedimentation Coefficient)。国际上 采用Svedberg单位作为沉降系数的单位，用S表示，以纪念超速离心法的创始人，瑞典 著名的蛋白质化学家工Svedbere 。一个Svedberg单位（或直接称一个S)为110s. 蛋白质的沉降系数大约在110520010s范围内，即1S一200S。 如测得蛋白质的沉降系数及扩散系数等有关参数，可按下列公式计算出蛋白质的相 对分子量。 RTS M=D(1-0P) 式中：S沉降系数，S: 绝对温度，K D 扩散系数，在数值上等于当浓度梯度为1单位时，在1s内，通过1cm2面积 而扩散的溶质量，g(cm2s: M蛋白质的分子量： R 气体常数，R=8314/(m0lK): 溶剂密度，20℃时1mL溶剂的质量 g/cm 蛋白质分子的微分比体积，即向无限大体积的溶剂中加入1g蛋白质时溶液 6262 进行凝胶电泳时，常常用一种染料作前沿物质，蛋白质分子在电泳中的移动距离和 前沿物质移动的距离之比值称为相对迁移率，相对迁移率和分子质量的对数成直线关系。 以标准蛋白质分子质量的对数和其相对迁移率作图，得到标准曲线。将未知蛋白质在同 样条件下电泳，根据测得的样品相对迁移率，从标准曲线上便可查出其分子量（图 2-30）。 图 2-30 聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定分子量 （a）聚丙烯酰胺凝胶电泳示意；(b)电泳分离图谱；（c）蛋白质分子量对数与其迁移率的关系 （三）沉降法 沉降法又称超速离心法。蛋白质溶液在受到强大的离心力作用时，蛋白质分子趋于 下沉，沉降速度与蛋白质分子的大小、密度和分子形状有关，也与溶剂的密度和粘度有 关。蛋白质颗粒在离心场中的沉降速度用每单位时间内颗粒下沉的距离来表示。 在离心场中，蛋白质分子所受到的净离心力（离心力减去浮力）与溶剂的摩擦力平 衡时，每单位离心场强度的沉降速度称为沉降系数（Sedimentation Coefficient）。国际上 采用 Svedberg 单位作为沉降系数的单位，用 S 表示，以纪念超速离心法的创始人，瑞典 著名的蛋白质化学家 T. Svedberg。一个 Svedberg 单位（或直接称一个 S）为 1 10 13 s。 蛋白质的沉降系数大约在 1 10 13～200 10 13 s 范围内，即 1S～200S。 如测得蛋白质的沉降系数及扩散系数等有关参数，可按下列公式计算出蛋白质的相 对分子量。 M = RTS D（1－υρ） 式中：S 沉降系数，S； T 绝对温度，K； D 扩散系数，在数值上等于当浓度梯度为 1 单位时，在 1s 内，通过 1cm 2 面积 而扩散的溶质量，g/（cm 2 s）； M 蛋白质的分子量； R 气体常数，R=8.314J/（mol K）； ρ 溶剂密度，20℃时 1mL 溶剂的质量，g/cm 3 ； υ 蛋白质分子的微分比体积，即向无限大体积的溶剂中加入 1g 蛋白质时溶液