的基因表达差异,可为分析生命活动过程提供重要信息。因此,基因的表达谱研 究是揭示细胞生长、细胞分化、组织器官建立以及细胞衰老死亡的重要方向。 研究基因表达谱的方法主要有基因表达系列分析、基因芯片技术、差异显示 PCR法以及消减杂交技术等(表23-1) 表2-3-1不同基因表达谱研究技术的比较 技术与原理 优点 缺点 基因表达系列克隆、DNA测序不需特殊设备、实验成本克隆步骤较多、基因片段有可能丢失、提供 分析 较低、测序效率较高、可信息有限 获得新基因 基因芯片 分子杂交 操作简便、不需测序。实验费用高、需要特殊设备:存在假阳性和 假阴性:图象和数据分析工作量较大 差异显示PCR电泳、分子杂交、不需特殊设备、可展示所方法繁琐、假阳性高、片段短而靠近 PCR技术、DNA有基因、差异表达基因片mRNA3′末端。 测序 段、可获得新基因。 代表性差异分克隆、PCR技术、mRNA需求少、特异性高酶切连接步骤多、cDNA存在丢失现象、获 分子杂交 得的片段是酶切片段 抑制消减杂交PCR、克隆、测序特异性高 低丰度cDNA存在丢失、不能合成全长 技术 DNA 基于PCR的消分子杂交、PCR、设备要求不高、操作简研究经费高、不能同时展示所有的基因和差 减杂交技术克隆、测序 便、可获得新基因 异基因、存在一定的假阳性、需大量测序 、SAGE技术 (一)概述 基因表达系列分析( serial analysis of gene expression,SAGE)是由 Velculescu 等建立并用以分析基因组表达的方法,可以在未知目的基因的前提下,分析来自 一个细胞的全部转录本信息:;对已知或未知基因表达进行定性和定量分析;假阳 性率低,可重复性强 随着SAGE技术的日益成熟,在基因表达方面己经得到了广泛的使用。 (二)SAGE的原理 mRNA的3′末端特定部位存在可以标识其特异性的标签(tag),其长度 般在10~14个核苷酸之间,检测tag可以获得该mRNA的表达信息。SAGE技 术主要是基于以上原理,通过获得tag从而确定基因的表达情况。其次,分离获 得的tag可以通过串联连接克隆于载体上,以便测序,提高了分析效率。同时,的基因表达差异，可为分析生命活动过程提供重要信息。因此，基因的表达谱研 究是揭示细胞生长、细胞分化、组织器官建立以及细胞衰老死亡的重要方向。 研究基因表达谱的方法主要有基因表达系列分析、基因芯片技术、差异显示 PCR 法以及消减杂交技术等（表 2-3-1）。 表 2-3-1 不同基因表达谱研究技术的比较 方法 技术与原理 优点 缺点 基因表达系列 分析 克隆、DNA 测序 不需特殊设备、实验成本 较低、测序效率较高、可 获得新基因。 克隆步骤较多、基因片段有可能丢失、提供 信息有限。 基因芯片 分子杂交 操作简便、不需测序。 实验费用高、需要特殊设备；存在假阳性和 假阴性；图象和数据分析工作量较大。 差异显示 PCR 电泳、分子杂交、 PCR 技术、DNA 测序 不需特殊设备、可展示所 有基因、差异表达基因片 段、可获得新基因。 方 法 繁 琐 、 假 阳 性 高 、 片 段 短 而 靠 近 mRNA3＇末端。 代表性差异分 析技术 克隆、PCR 技术、 分子杂交 mRNA 需求少、特异性高 酶切连接步骤多、cDNA 存在丢失现象、获 得的片段是酶切片段。 抑制消减杂交 技术 PCR、克隆、测序 特异性高 低丰度 cDNA 存在丢失、不能合成全长 cDNA。 基于 PCR 的消 减杂交技术 分子杂交、PCR、 克隆、测序 设备要求不高、操作简 便、可获得新基因。 研究经费高、不能同时展示所有的基因和差 异基因、存在一定的假阳性、需大量测序。 一、SAGE 技术 （一）概述 基因表达系列分析（serial analysis of gene expression，SAGE）是由 Velculescu 等建立并用以分析基因组表达的方法，可以在未知目的基因的前提下，分析来自 一个细胞的全部转录本信息；对已知或未知基因表达进行定性和定量分析；假阳 性率低，可重复性强。 随着 SAGE 技术的日益成熟，在基因表达方面已经得到了广泛的使用。 （二）SAGE 的原理 mRNA 的 3＇末端特定部位存在可以标识其特异性的标签（tag），其长度一 般在 10～14 个核苷酸之间，检测 tag 可以获得该 mRNA 的表达信息。SAGE 技 术主要是基于以上原理，通过获得 tag 从而确定基因的表达情况。其次，分离获 得的 tag 可以通过串联连接克隆于载体上，以便测序，提高了分析效率。同时