那么，攻击底物羰基的亲核试剂是什么？胰凝乳蛋白酶有一个活泼的丝氨酸残基，用 DPF处理使胰凝乳蛋白酶活性不可逆丧失（图9.2）。DIPF处理只修饰195位丝氨酸。该化 学修饰提示这个活泼的丝氨酸在胰凝乳蛋白酶催化过程中起关键作用。 Ala Phe Asn Ser Met Glu 图91胰凝乳蛋白酶的特异性。胰凝乳蛋白酶裂解芳香氨基酸或大的疏水氨基酸（已经用桔 色涂出)C-端肽键（用红色标出)。 CHs CH3 +F-+H+ 5er195 H CH3 CH3 CH: CH3 DIPF 图9.2胰藏乳蛋白酶有一个很活泼的丝氨酸。用DIP℉处理，胰凝乳蛋白酶分子28个丝氨 酸残基中195位丝氨酸与DIPF反应，导致胰凝乳蛋白酶失活。 经过两步共价连接的中间物，胰凝乳蛋白酶催化蛋白质裂解 酶促动力学研究给胰凝乳蛋白酶促反应机制提供了另一个线索。用那些产物有颜色的底 物类似物易于进行酶动力学检测。例如，胰凝乳蛋白酶动力学检测的颜色底物是N-乙酰L~ 苯丙氨酸-P-硝基苯酚酯。这个物质是酯（不是酰胺键），但是很多蛋白酶能够水解酯，产生 黄色化合物对硝基苯酚（图9.3)。光吸收数值能够测定对硝基苯酚的产量。 子Acetyl-- p-Mitrophenolate 2品 图9.3颠色底物。胰凝乳蛋白酶水解N-乙酰L-苯丙氨酸-p-硝基苯酚酯产生黄色产物对硝基 苯酚。在pH7.0,对硝基苯酚解离。那么，攻击底物羰基的亲核试剂是什么？胰凝乳蛋白酶有一个活泼的丝氨酸残基，用 DIPF 处理使胰凝乳蛋白酶活性不可逆丧失（图 9.2）。DIPF 处理只修饰 195 位丝氨酸。该化 学修饰提示这个活泼的丝氨酸在胰凝乳蛋白酶催化过程中起关键作用。 图 9.1 胰凝乳蛋白酶的特异性。胰凝乳蛋白酶裂解芳香氨基酸或大的疏水氨基酸（已经用桔 色涂出）C-端肽键（用红色标出）。 图 9.2 胰凝乳蛋白酶有一个很活泼的丝氨酸。用 DIPF 处理，胰凝乳蛋白酶分子 28 个丝氨 酸残基中 195 位丝氨酸与 DIPF 反应，导致胰凝乳蛋白酶失活。 经过两步共价连接的中间物，胰凝乳蛋白酶催化蛋白质裂解 酶促动力学研究给胰凝乳蛋白酶促反应机制提供了另一个线索。用那些产物有颜色的底 物类似物易于进行酶动力学检测。例如，胰凝乳蛋白酶动力学检测的颜色底物是 N-乙酰-L- 苯丙氨酸-p-硝基苯酚酯。这个物质是酯（不是酰胺键），但是很多蛋白酶能够水解酯，产生 黄色化合物对硝基苯酚（图 9.3）。光吸收数值能够测定对硝基苯酚的产量。 图 9.3 颜色底物。胰凝乳蛋白酶水解 N-乙酰-L-苯丙氨酸-p-硝基苯酚酯产生黄色产物对硝基 苯酚。在 pH7.0，对硝基苯酚解离