在稳态条件下，胰凝乳蛋白酶对这个底物的裂解遵循米氏动力学，Km是20uM,kcat 是T7sl。停留法(stopped-flow method)检测反应的起始状态，能够在毫秒范围内混合酶和底 物、跟踪毫秒时间内的反应结果。结果显示起始状态迅速形成一种颜色产物，随后缓慢（即 进入稳态)（图9.4）。这些结果提示，酶促反应过程有两个步骤，第一步很快，第二步很慢。 Steady-state phase Burst phase Milliseconds after mixing- 图9.4胰兼乳蛋白酶催化的动力学。胰凝乳蛋白酶水解N-乙酰L-苯丙氨酸-p-硝基苯酚酯有 两个阶段：快速（稳态前）阶段和稳态阶段。 胰凝乳蛋白酶促水解反应的两个步骤涉及酶与底物的共价结合（图9.5）。第一步，底物 的酰基与酶共价结合，同时释放对硝基苯酚或胺类（如果底物是酰胺键）。酶-酰基复合物称 为酰化酶中间物。第二步，酰化酶中间物水解，释放底物的羧酸组分和游离酶。因此，酶酰 化并释放对硝基苯酚的速度很快，但是水解酰化酶“恢复”游离酶的速度很慢。而这两个步 骤都是酶促反应必需的。 (A) (B) Acylation Deacylation OH XH XH=ROH(ester), RNH2(amide) Enzyme Acyl-enzyme Enzyme Figure 9-5 图95共价催化。胰凝乳蛋白酶水解有两个阶段：(A)酰化形成酰化-酶中间体；随后(B) 去酰化释放游离酶。在稳态条件下，胰凝乳蛋白酶对这个底物的裂解遵循米氏动力学，Km 是 20 M，kcat 是 77 s -1。停留法(stopped-flow method)检测反应的起始状态，能够在毫秒范围内混合酶和底 物、跟踪毫秒时间内的反应结果。结果显示起始状态迅速形成一种颜色产物，随后缓慢（即 进入稳态）（图 9.4）。这些结果提示，酶促反应过程有两个步骤，第一步很快，第二步很慢。 图 9.4 胰凝乳蛋白酶催化的动力学。胰凝乳蛋白酶水解 N-乙酰-L-苯丙氨酸-p-硝基苯酚酯有 两个阶段：快速（稳态前）阶段和稳态阶段。 胰凝乳蛋白酶促水解反应的两个步骤涉及酶与底物的共价结合（图 9.5）。第一步，底物 的酰基与酶共价结合，同时释放对硝基苯酚或胺类（如果底物是酰胺键）。酶-酰基复合物称 为酰化酶中间物。第二步，酰化酶中间物水解，释放底物的羧酸组分和游离酶。因此，酶酰 化并释放对硝基苯酚的速度很快，但是水解酰化酶“恢复”游离酶的速度很慢。而这两个步 骤都是酶促反应必需的。 图 9.5 共价催化。胰凝乳蛋白酶水解有两个阶段：（A）酰化形成酰化-酶中间体；随后(B) 去酰化释放游离酶