用加样枪将细菌培养物加入15m离心管,12000pm,1min v重复2次 加250 ul Buffer SI,吹打混匀(也可 Vortex)以充分悬浮细菌 请保持同步! 离心机配平 加250μ l Buffer S2,上下颠倒,温和混匀46次使菌体裂解 避免剧烈摇晃,此步骤不宜超过5mn 加350 pl Buffer S3,上下颠倒,温和混匀6-8次,12000离心10min v避免剧烈摇晃 吸取上清至已置于2m离心管的制备管中,12000离心lmin,弃滤液 同上,在制备管中加500μ Buffer w1,12000g离心lmin,弃滤液 在制备管中加700 l Buffer w2,12000离心min,弃 滤液,重复以Burw洗涤(离心)一次,再空离心1次 将制备管移入新的15m离心管,在膜中央加60 ul Eluent或去 离子水,室温静置1min,12000离心lmin,即为质粒DNA。 16 Eluent液65度温育可提高洗脱效率