【实验步骤】 一、洋葱根尖细胞过氧化物酶(POD)的显示 1.取新鲜洋葱根尖(1~2cm),用刀片纵向切开。 2.将切开的根尖置于载玻片上，滴加1滴0.1%钼酸胺，放置5min。 3.滴加1滴1%联苯胺溶液，用镊子轻搅几下，放置5mi左右，待其出现蓝色 4.用吸水纸吸去多余溶液，用生理盐水冲洗1次。 5.加盖玻片，压片展开，显微镜下观察，可见细胞内部分区域被染成蓝色，即为过氧 化物酶存在的部位 二、马铃薯细胞中过氧化氢酶(CAT)的间接显示 1.将马铃薯洗净，用刀片切成小薄片，置于载玻片上。 2.将3%的过氧化氢溶液滴加在马铃薯薄片上，可见组织四周出现大量的气泡，提示植 物细胞中有过氧化氢酶存在，气泡为过氧化氢水解产生的氧气。 三、过氧化物酶(POD)活性的测定 1.酶液提取：取不同玉米或水稻根系（根系表面水分吸干）1g,剪碎置于研体中，加 5ml0.1MTms-HC1缓冲液(pH85),研磨匀浆。 2.取匀浆液1.5ml,以4000pm离心5min,取出上清液转入新管，保存在冰箱（或冰 浴)备用。 3.取光径1cm比色杯2个，向其中之一加入上述酶液1ml(如醇活性过高可稀释之)， 再加入反应混合液3ml,立即开启秒表记录时间：而向另一比色杯中加入0.2M磷酸缓冲液 (pH6.0),作为零对照。 4.反应时间到达5min时，用分光光度计在470nm波长下测定吸光值。 5.结果计算：以每min吸光度变化（以每ninOD7变化0.01为1个活力单位）表示酶 活性大小（单位：U/g鲜重）。 【实验结果与思考题】 1.简述联苯胺反应显示过氧化物酶的原理。 2.简述间接显示过氧化物氢酶的原理。【实验步骤】 一、洋葱根尖细胞过氧化物酶(POD)的显示 1. 取新鲜洋葱根尖（1~2cm），用刀片纵向切开。 2. 将切开的根尖置于载玻片上，滴加1滴0.1%钼酸胺，放置5 min。 3. 滴加1滴1%联苯胺溶液，用镊子轻搅几下，放置5 min左右，待其出现蓝色。 4. 用吸水纸吸去多余溶液，用生理盐水冲洗1次。 5. 加盖玻片，压片展开，显微镜下观察，可见细胞内部分区域被染成蓝色，即为过氧 化物酶存在的部位。 二、马铃薯细胞中过氧化氢酶（CAT）的间接显示 1. 将马铃薯洗净，用刀片切成小薄片，置于载玻片上。 2. 将3%的过氧化氢溶液滴加在马铃薯薄片上，可见组织四周出现大量的气泡，提示植 物细胞中有过氧化氢酶存在，气泡为过氧化氢水解产生的氧气。 三、过氧化物酶(POD)活性的测定 1. 酶液提取：取不同玉米或水稻根系（根系表面水分吸干）1 g，剪碎置于研钵中，加 5 ml 0.1 M Tris-HCl缓冲液（pH8.5），研磨匀浆。 2. 取匀浆液1.5 ml，以4 000 rpm离心5 min，取出上清液转入新管，保存在冰箱（或冰 浴）备用。 3. 取光径1cm比色杯2个，向其中之一加入上述酶液1 ml（如酶活性过高可稀释之）， 再加入反应混合液3 ml，立即开启秒表记录时间；而向另一比色杯中加入0.2 M磷酸缓冲液 （pH6.0），作为零对照。 4. 反应时间到达5 min时，用分光光度计在470nm波长下测定吸光值。 5. 结果计算：以每min吸光度变化（以每minOD470nm变化0.01为1个活力单位）表示酶 活性大小（单位：U/g鲜重）。 【实验结果与思考题】 1. 简述联苯胺反应显示过氧化物酶的原理。 2. 简述间接显示过氧化物氢酶的原理。 18