Matrix蛋白三位点突变的重组水泡性口炎病毒的构建 参与学生：宋时华学院：农业与生物学院学号：5111509083 指导教师：孙涛学院：农业与生物学院 摘要 重组水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)是一种具有良好应用的前 景的病毒载体，可应用于制备疫苗和治疗肿瘤，但该载体仍存在安全性问题，高剂量注射实 验动物可导致产生神经毒性。因此，作者针对VSV重要毒力因子，对水泡性口炎病毒的Matrix 蛋白进行了三位点突变，敲出了原来的Matrix蛋白的第51位氨基酸，将Matrix蛋白的第221 位和226位氨基酸（缬氨酸和丝氨酸）进行了突变，分别突变为苯丙氨酸和精氨酸，得到了 Matrix蛋白发生三位点突变的水泡性口炎病毒(VSV△MT),希望能够降低水泡性口炎病毒的 致病性。 关键词：水泡性口炎病毒，VSV△MT,M蛋白 ABSTRACT Recombinant Vesiclar stomatitis virus is an ideal viral vector for vaccine and virotherapy, however,there still exists toxicities in VSV vector.Animals exhibited neurotoxicity when injected with high dose of VSV.Therefore recombinant VSV aiming at its virulent factors was developed, which included deletion of methionine 51 in matrix protein and mutation of valine 221 to phenylalanine and serine 226 to arginine.Then we gained the novel VSV that is VSVAMT which maybe be decreased the pathogenesis. KEY WORDS:VSV,VSVAMT,Matrix protein 正文 1绪论 水泡性口炎(Vesicular stomatitis,.VS)是由水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)引起的一种急性高度接触性传染病，马、牛、猪等动物较易感，绵羊和山羊也 可感染。临床上以舌、唇、口腔粘膜、乳头和蹄冠等处上皮发生水疱为主要特征。水泡 性口炎在临床症状上很难与口蹄疫(FMD)、猪水疱病(SV)、猪水疱性疹(VES)等传染性 疾病区别开来。在我国，水泡性口炎为外来动物病，还未有大规模爆发的报道，国家进出境 动物检疫对象中将其列为二类疫病。但随着我国加入WTO,动物及动物产品的国际贸易量增 加，外来动物病传入我国的风险逐渐加大。目前，国际上还无预防VSV的有效疫苗，国内也 还未见相关研究的报道，因此，亟需有效的技术和有效疫苗储备以应对可能的挑战。 VSV是一种属于弹状病毒科，是一种具囊膜的虫媒病毒，其基因组是一条单链负义RNA 分子，长度约为11kb,由5个基因组成，分别编码病毒的核衣壳蛋白(N)、磷酸化蛋白(P)、 基质蛋白(matrix,M)、囊膜蛋白(G)和病毒RNA复制酶(L)口。利用重组病毒载体在体 内表达目的抗原，并且能模拟病毒的自然感染，因此能够激发有效地激发机体的综合免疫， 其中包括细胞免疫、体液免疫和黏膜免疫，VSV是一个很有前景的病毒载体，不仅可以本身作 为预防水泡性口炎的疫苗，还具有本身的一些特点，其中包括：(1)对人无致病性，比Matrix蛋白三位点突变的重组水泡性口炎病毒的构建 参与学生：宋时华 学院：农业与生物学院 学号：5111509083 指导教师：孙涛 学院：农业与生物学院 摘要 重组水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus, VSV）是一种具有良好应用的前 景的病毒载体，可应用于制备疫苗和治疗肿瘤，但该载体仍存在安全性问题，高剂量注射实 验动物可导致产生神经毒性。因此，作者针对VSV重要毒力因子，对水泡性口炎病毒的Matrix 蛋白进行了三位点突变，敲出了原来的Matrix蛋白的第51位氨基酸，将Matrix蛋白的第221 位和226位氨基酸（缬氨酸和丝氨酸）进行了突变，分别突变为苯丙氨酸和精氨酸，得到了 Matrix蛋白发生三位点突变的水泡性口炎病毒（VSVΔMT）,希望能够降低水泡性口炎病毒的 致病性。 关键词：水泡性口炎病毒，VSVΔMT，M蛋白 ABSTRACT Recombinant Vesiclar stomatitis virus is an ideal viral vector for vaccine and virotherapy, however, there still exists toxicities in VSV vector. Animals exhibited neurotoxicity when injected with high dose of VSV. Therefore recombinant VSV aiming at its virulent factors was developed, which included deletion of methionine 51 in matrix protein and mutation of valine 221 to phenylalanine and serine 226 to arginine. Then we gained the novel VSV that is VSVΔMT which maybe be decreased the pathogenesis. KEY WORDS：VSV，VSVΔMT，Matrix protein 正文 1 绪论 水泡性口炎（Vesicular stomatitis, VS）是由水泡性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus, VSV）引起的一种急性高度接触性传染病，马、牛、猪等动物较易感，绵羊和山羊也 可感染。临床上以舌、唇、口腔粘膜、乳头和蹄冠等处上皮发生水疱为主要特征 [1,2]。水泡 性口炎在临床症状上很难与口蹄疫（FMD）、猪水疱病（SV）、猪水疱性疹（VES）等传染性 疾病区别开来。在我国，水泡性口炎为外来动物病，还未有大规模爆发的报道, 国家进出境 动物检疫对象中将其列为二类疫病。但随着我国加入WTO，动物及动物产品的国际贸易量增 加，外来动物病传入我国的风险逐渐加大。目前，国际上还无预防VSV的有效疫苗，国内也 还未见相关研究的报道，因此，亟需有效的技术和有效疫苗储备以应对可能的挑战。 VSV是一种属于弹状病毒科，是一种具囊膜的虫媒病毒，其基因组是一条单链负义RNA 分子，长度约为11kb, 由5个基因组成，分别编码病毒的核衣壳蛋白（N）、磷酸化蛋白（P）、 基质蛋白（matrix, M）、囊膜蛋白（G）和病毒RNA复制酶（L） [1]。利用重组病毒载体在体 内表达目的抗原，并且能模拟病毒的自然感染，因此能够激发有效地激发机体的综合免疫， 其中包括细胞免疫、体液免疫和黏膜免疫，VSV是一个很有前景的病毒载体,不仅可以本身作 为预防水泡性口炎的疫苗 [3]，还具有本身的一些特点，其中包括：（1）对人无致病性，比