证型与免疫功能的关系、开发中药时的动物实验皆可以应用免疫学方法进行研究观察 在介绍具体方法的时候,请大家考虑,中医药研究如何应用。 6.6.1.1体液免疫检测法 讲抗原与抗体在体外结合反应的一些基本条件,和为什么叫“血清学反应”,以及其 应用领域 1.凝集反应。颗粒性抗原(细菌或红细胞等)与相应抗体特异性结合,在电解质参与 下形成肉眼可见的凝集物,称之为凝集反应。 凝集反应的原理是:抗原与抗体均带负电荷,又皆为亲水胶体,由于同种电荷的相互 排斥及其分子周围的水化膜而呈稳定的胶体溶液。当抗原与抗体特异性结合时,相应的极性 基团(羟基、氨基等)的相互吸附,破坏了水化膜,使亲水胶体变成了憎水胶体:加上存在 的电解质离子会中和一部分负电荷而使抗原抗体相互凝集,形成肉眼可见的凝集物。 )直接凝集反应。颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象,前者多为细 胞表面的结构成分,如细菌或红细胞的表面结构抗原。 (1)玻片法:多用于抗原的定性检测。将含有已知抗体的诊断血清与待测抗原(细 菌或红细胞)滴于玻片上混合并摇动,数分钟后出现肉眼可见的凝集物即为阳性反应。此 法简便快速,常用于鉴定细菌和血型。 (2)试管法:多用于抗体的定量检测。在试管中用生理盐水将待检血清作系列倍比 稀释,然后加入等量已知抗原,混匀、振荡后置37℃过夜,以观察凝集现象。凡最高稀释 度具有明显凝集现象者为该待测血淸的效价(或称滴度)。凝集效价表示血清中抗体的含量, 可根据有关抗体含量高低来辅助诊断或作流行病的调查,如诊断伤寒或副伤寒的肥达氏反 2)间接凝集反应。将可溶性抗原吸附于载体颗粒(如乳胶颗粒、红细胞等)的表面, 称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合,即可出现凝集现象。这个反应常用于测定细 菌性抗体、病毒性抗体、钩端螺旋体和梅毒螺旋体抗体及某些自身抗体(如抗核抗体、抗肾 抗体、抗甲状腺抗体等)。 根据凝集反应的原理,还有间接凝集抑制试验、反向间接凝集试验、协同凝集试验等。 2.沉淀反应。可溶性抗原(外毒素、血清、细菌培养的滤液、组织浸出液等)与相 应抗体特异性结合,在电解质参与下,形成沉淀物,称为沉淀反应。沉淀反应的抗原多为多 糖、类脂、蛋白质等 )单向扩散试验。这是一种抗原定量试验,是可溶性抗原在含抗体的琼脂介质中扩 散的沉淀反应。试验时,将已知抗体与融化的琼脂混匀倾注于平皿或玻片上。琼脂凝固后打 孔,孔内加入待检抗原,置湿盒于室温使其扩散,次日观察结果。由于抗体均匀地分布于琼 脂内,抗原从孔中向四周扩散,抗原抗体复合物在孔周围形成沉淀环。沉淀环的直径与孔中 抗原浓度成正比。如事先用不同浓度的已知标准抗原作单向琼脂扩散,并绘制成抗原浓度与 沉淀环直径的标准曲线,则可根据待检抗原孔的沉淀环直径从标准曲线查明其抗原含量。此 法常用于检测血清免疫球蛋白和补体各成分的含量 2〕双向扩散试验。这是可溶性抗原与抗体在琼脂介质中相互扩散的沉淀反应。将融 化的琼脂倾注于平皿或玻片上,琼脂凝固后打孔,抗原、抗体分别注入孔内,置湿盒内室温 过夜。如抗原与抗体相对应,两者相互扩散可在抗原、抗体孔间呈现清晰的白色沉淀线 对抗原与抗体只形成一条沉淀线,几对抗原与抗体则形成几条沉淀线。本法常用于 定性试验,如检测血清免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等。 3)对流免疫电泳。对流电泳是一敏感快速的检测方法,即在电场作用下的双向免疫 扩散。在用pH86巴比妥缓冲液配制的琼脂板上挖出成对且平行的小孔,将琼脂板放入电 泳槽内,使琼脂板的两孔沿着电场方向,于负极侧的孔内加入抗原,于正极侧的孔内加入抗 体,通电后,抗原带负电荷向正极泳动,抗体分子虽也带负电荷,但受琼脂中电渗作用向负 极移动,抗原和抗体能较快集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的白色沉淀线。只需1 小时左右即可观察结果。此法常用于检测血清中的乙型肝炎表面抗原与甲胎蛋白等 3.中和试验。特异性抗体可抑制相应抗原物质的活性,抗体使相应抗原的毒性或传 染性消失的反应为中和试验。例如抗毒素中和外毒素的毒性,病毒的中和抗体可使病毒失去 感染性等。诊断风湿热的抗链球菌溶血毒素“O”试验也为一种中和试验。乙型溶血性链球证型与免疫功能的关系、开发中药时的动物实验皆可以应用免疫学方法进行研究观察。” 在介绍具体方法的时候，请大家考虑，中医药研究如何应用。 6．6．1．1 体液免疫检测法 讲抗原与抗体在体外结合反应的一些基本条件，和为什么叫“血清学反应”，以及其 应用领域。 1. 凝集反应。颗粒性抗原（细菌或红细胞等）与相应抗体特异性结合，在电解质参与 下形成肉眼可见的凝集物，称之为凝集反应。 凝集反应的原理是：抗原与抗体均带负电荷，又皆为亲水胶体，由于同种电荷的相互 排斥及其分子周围的水化膜而呈稳定的胶体溶液。当抗原与抗体特异性结合时，相应的极性 基团（羟基、氨基等）的相互吸附，破坏了水化膜，使亲水胶体变成了憎水胶体；加上存在 的电解质离子会中和一部分负电荷而使抗原抗体相互凝集，形成肉眼可见的凝集物。 1）直接凝集反应。颗粒性抗原与相应抗体直接结合所产生的凝集现象，前者多为细 胞表面的结构成分，如细菌或红细胞的表面结构抗原。 （1）玻片法：多用于抗原的定性检测。将含有已知抗体的诊断血清与待测抗原（细 菌或红细胞） 滴于玻片上混合并摇动，数分钟后出现肉眼可见的凝集物即为阳性反应。此 法简便快速，常用于鉴定细菌和血型。 （2）试管法：多用于抗体的定量检测。在试管中用生理盐水将待检血清作系列倍比 稀释，然后加入等量已知抗原，混匀、振荡后置 37℃过夜，以观察凝集现象。凡最高稀释 度具有明显凝集现象者为该待测血清的效价（或称滴度）。凝集效价表示血清中抗体的含量， 可根据有关抗体含量高低来辅助诊断或作流行病的调查，如诊断伤寒或副伤寒的肥达氏反 应。 2）间接凝集反应。将可溶性抗原吸附于载体颗粒（如乳胶颗粒、红细胞等）的表面， 称之为致敏颗粒。当致敏颗粒与相应抗体结合，即可出现凝集现象。这个反应常用于测定细 菌性抗体、病毒性抗体、钩端螺旋体和梅毒螺旋体抗体及某些自身抗体（如抗核抗体、抗肾 抗体、抗甲状腺抗体等）。 根据凝集反应的原理，还有间接凝集抑制试验、反向间接凝集试验、协同凝集试验等。 2．沉淀反应。可溶性抗原（外毒素、血清、细菌培养的滤液、组织浸出液等）与相 应抗体特异性结合，在电解质参与下，形成沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应的抗原多为多 糖、类脂、蛋白质等。 1）单向扩散试验。这是一种抗原定量试验，是可溶性抗原在含抗体的琼脂介质中扩 散的沉淀反应。试验时，将已知抗体与融化的琼脂混匀倾注于平皿或玻片上。琼脂凝固后打 孔，孔内加入待检抗原，置湿盒于室温使其扩散，次日观察结果。由于抗体均匀地分布于琼 脂内，抗原从孔中向四周扩散，抗原抗体复合物在孔周围形成沉淀环。沉淀环的直径与孔中 抗原浓度成正比。如事先用不同浓度的已知标准抗原作单向琼脂扩散，并绘制成抗原浓度与 沉淀环直径的标准曲线，则可根据待检抗原孔的沉淀环直径从标准曲线查明其抗原含量。此 法常用于检测血清免疫球蛋白和补体各成分的含量。 2）双向扩散试验。这是可溶性抗原与抗体在琼脂介质中相互扩散的沉淀反应。将融 化的琼脂倾注于平皿或玻片上，琼脂凝固后打孔，抗原、抗体分别注入孔内，置湿盒内室温 过夜。如抗原与抗体相对应，两者相互扩散可在抗原、抗体孔间呈现清晰的白色沉淀线， 一对抗原与抗体只形成一条沉淀线，几对抗原与抗体则形成几条沉淀线。本法常用于 定性试验，如检测血清免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等。 3）对流免疫电泳。对流电泳是一敏感快速的检测方法，即在电场作用下的双向免疫 扩散。在用 pH 8.6 巴比妥缓冲液配制的琼脂板上挖出成对且平行的小孔，将琼脂板放入电 泳槽内，使琼脂板的两孔沿着电场方向，于负极侧的孔内加入抗原，于正极侧的孔内加入抗 体，通电后，抗原带负电荷向正极泳动，抗体分子虽也带负电荷，但受琼脂中电渗作用向负 极移动，抗原和抗体能较快集中在两孔之间的琼脂中形成免疫复合物的白色沉淀线。只需 1 小时左右即可观察结果。此法常用于检测血清中的乙型肝炎表面抗原与甲胎蛋白等。 3．中和试验。特异性抗体可抑制相应抗原物质的活性，抗体使相应抗原的毒性或传 染性消失的反应为中和试验。例如抗毒素中和外毒素的毒性，病毒的中和抗体可使病毒失去 感染性等。诊断风湿热的抗链球菌溶血毒素“O”试验也为一种中和试验。乙型溶血性链球