菌能产生一种溶解人、兔红细胞的溶血毒素“O”,该毒素的溶血毒性可被抗溶血毒素“O” 抗体所中和而不出现溶血。试验时将病人血清与溶血毒素“O”混合,作用一段时间后加入 人红细胞,红细胞不被溶解为阳性反应,表示病人血清中存在抗溶血毒素“O”抗体。血清 抗体效价达400单位以上时提示患者曾感染乙型溶血性链球菌,有助于风湿热的诊断 4.免疫荧光法(荧光抗体法)。是应用荧光素染料(如异硫氰酸荧光黄等)来标记抗 体,但不影响其活性,此种抗体称荧光抗体。用已知种类的荧光抗体浸染待检的含有抗原的 细胞或组织切片,如有相应抗原存在,则抗原即与此种抗体发生特异性结合,形成复合物而 粘着在细胞上,不易洗脱,在荧光显微镜下成为发出荧光的可见物,可达到诊断或定位的目 直接法。将已知种类的荧光抗体加到待检标本上,作用半小时后,用缓冲液冲洗, 将未结合的荧光抗体全部洗去,干燥后在荧光显微镜下观察,如发现荧光表明标本中有相应 抗原存在,是为阳性。此法的优点是特异性高,可应用于早期检查病原,如细菌、病毒等 缺点是每检查一种抗原,必须制备与其相应的荧光抗体 2)间接法。先使未标记的已知抗体与待检抗原作用,如待检抗原与已知抗体相对应, 即发生特异性结合成复合物,再加入荧光标记的抗免疫球蛋白(或称抗抗体,能与抗体结合), 由于抗抗体与抗原抗体复合物中的抗体相结合,在荧光显微镜下即能见到荧光,是为阳性 5.酶联免疫吸附试验。本法的原理是利用酶(常用辣根过氧化物酶)标记的抗原或 抗体,以测定被检标本中有无相应的抗原或抗体。有间接法、双抗体法、竞争法三种。 现以间接法为例,简述其检测血清中抗体的基本过程。1)使已知可溶性抗原吸附于 固相载体(聚苯乙烯板凹孔、聚苯乙烯管等)上,孵育后冲洗去未吸附的抗原;2)加待检 血清并孵育,若血清中含有相应抗体,即与吸附的抗原结合,再行冲洗,去除未被结合的抗 体;3)加入酶标记抗球蛋白(抗抗体),使之与抗原抗体复合物上的抗体相结合,再洗涤去 除未吸附的酶标记抗球蛋白:4)加入酶作用底物(二氨基联苯胺,DAB),酶即能分解底 物并显色,用分光光度计检测其显色程度。颜色的深浅与标本中相应抗原或抗体的量成正比。 6.溶血空斑试验。详见7.13实验的论述。 7.免疫印迹技术。免疫印迹或免疫转印技术( immunoblotting或 Western blot)是在 Southern(1975)创建的DNA印迹术( Southern blotting)基础上发展起来的新型免疫生化 技术。其原理是应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)将蛋白质样品分离 后,通过转移电泳或直接印渍方式原位转印至固相介质上,并保持其原有的物质类型和生物 学活性不变,然后应用抗原抗体反应进行特异性检测。由于此项技术具有SDS-PAGE的高 分辨力和固相免疫测定的高度特异性和敏感性,方法简便易行,标本可以长期保存和便于比 较等优点。因此,问世十多年来经过不断改进,已广泛应用于生物学和医学领域,成为免疫 学、微生物学及其它生命科学常用的一种重要研究方法 6.6.1.2细胞免疫检测法 近代免疫学广泛采用了细胞生物学、免疫血清学、免疫标记、免疫组化等多方面技术, 不断发展和完善了一系列细胞免疫检测技术,用于检测各类免疫细胞的表面标志(包括抗原 及受体)、细胞的活化、增殖、吞噬、杀伤功能、各种细胞因子的活性或含量等方面。这些 技术为深入研究和认识机体免疫系统的生理、病理改变,阐明某些疾病的发病机制和临床诊 治提供了有用的手段。随着细胞免疫学的迅猛发展,时有新的细胞免疫检测技术出现。近年 来,新发展的项目集中在对有关细胞因子以及细胞受体方面的检测。在中医中药的研究方面, 近年来也得到广泛应用。 淋巴细胞转化试验。人类淋巴细胞在体外与特异性抗原(如结核菌素)或非特异 性有丝分裂原(如植物血凝素,PHA)等一起孵育,T细胞即被激活而向淋巴母细胞转化 T细胞转化过程可伴随有DNA、RNA、蛋白质的合成增加,最后导致细胞分裂。在光学显 微镜下可计数转化后的淋巴母细胞数,也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷(H-TdR)掺入正在 分裂的淋巴细胞,用液闪测定仪来确定掺入量以确定淋巴细胞转化率。最近有一种不用同位 素,又可用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检查法,称为MIT检测法。MTT是一种甲氮唑 盐,它是细胞线粒体脱氢酶的底物,细胞内的酶可将MIT分解产生蓝黑色成分。该产物的 多少与活细胞数成正比,结果可用酶标仪(595m)测量光密度,作为MTT法的指标 2.E-花环法。人类T细胞表面有羊细胞受体(CD2)能与羊红细胞结合形成玫瑰花样 结构。即将分离液分离出的外周的单个核细胞悬液与羊红细胞在体外混合,经37℃培养5菌能产生一种溶解人、兔红细胞的溶血毒素“O”，该毒素的溶血毒性可被抗溶血毒素“O” 抗体所中和而不出现溶血。试验时将病人血清与溶血毒素“O”混合，作用一段时间后加入 人红细胞，红细胞不被溶解为阳性反应，表示病人血清中存在抗溶血毒素“O”抗体。血清 抗体效价达 400 单位以上时提示患者曾感染乙型溶血性链球菌，有助于风湿热的诊断。 4. 免疫荧光法（荧光抗体法）。是应用荧光素染料（如异硫氰酸荧光黄等）来标记抗 体，但不影响其活性，此种抗体称荧光抗体。用已知种类的荧光抗体浸染待检的含有抗原的 细胞或组织切片，如有相应抗原存在，则抗原即与此种抗体发生特异性结合，形成复合物而 粘着在细胞上，不易洗脱，在荧光显微镜下成为发出荧光的可见物，可达到诊断或定位的目 的。 1）直接法。将已知种类的荧光抗体加到待检标本上，作用半小时后，用缓冲液冲洗， 将未结合的荧光抗体全部洗去，干燥后在荧光显微镜下观察，如发现荧光表明标本中有相应 抗原存在，是为阳性。此法的优点是特异性高，可应用于早期检查病原，如细菌、病毒等， 缺点是每检查一种抗原，必须制备与其相应的荧光抗体。 2）间接法。先使未标记的已知抗体与待检抗原作用，如待检抗原与已知抗体相对应， 即发生特异性结合成复合物，再加入荧光标记的抗免疫球蛋白（或称抗抗体，能与抗体结合）， 由于抗抗体与抗原抗体复合物中的抗体相结合，在荧光显微镜下即能见到荧光，是为阳性。 5．酶联免疫吸附试验。本法的原理是利用酶（常用辣根过氧化物酶）标记的抗原或 抗体，以测定被检标本中有无相应的抗原或抗体。有间接法、双抗体法、竞争法三种。 现以间接法为例，简述其检测血清中抗体的基本过程。1）使已知可溶性抗原吸附于 固相载体（聚苯乙烯板凹孔、聚苯乙烯管等）上，孵育后冲洗去未吸附的抗原；2）加待检 血清并孵育，若血清中含有相应抗体，即与吸附的抗原结合，再行冲洗，去除未被结合的抗 体；3）加入酶标记抗球蛋白（抗抗体），使之与抗原抗体复合物上的抗体相结合，再洗涤去 除未吸附的酶标记抗球蛋白；4）加入酶作用底物（二氨基联苯胺，DAB），酶即能分解底 物并显色，用分光光度计检测其显色程度。颜色的深浅与标本中相应抗原或抗体的量成正比。 6．溶血空斑试验。详见 7.13 实验的论述。 7．免疫印迹技术。免疫印迹或免疫转印技术（immunoblotting 或 Western blot）是在 Southern（1975）创建的 DNA 印迹术（Southern blotting）基础上发展起来的新型免疫生化 技术。其原理是应用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）将蛋白质样品分离 后，通过转移电泳或直接印渍方式原位转印至固相介质上，并保持其原有的物质类型和生物 学活性不变，然后应用抗原抗体反应进行特异性检测。由于此项技术具有 SDS-PAGE 的高 分辨力和固相免疫测定的高度特异性和敏感性，方法简便易行，标本可以长期保存和便于比 较等优点。因此，问世十多年来经过不断改进，已广泛应用于生物学和医学领域，成为免疫 学、微生物学及其它生命科学常用的一种重要研究方法。 6．6．1．2 细胞免疫检测法 近代免疫学广泛采用了细胞生物学、免疫血清学、免疫标记、免疫组化等多方面技术， 不断发展和完善了一系列细胞免疫检测技术，用于检测各类免疫细胞的表面标志（包括抗原 及受体）、细胞的活化、增殖、吞噬、杀伤功能、各种细胞因子的活性或含量等方面。这些 技术为深入研究和认识机体免疫系统的生理、病理改变，阐明某些疾病的发病机制和临床诊 治提供了有用的手段。随着细胞免疫学的迅猛发展，时有新的细胞免疫检测技术出现。近年 来，新发展的项目集中在对有关细胞因子以及细胞受体方面的检测。在中医中药的研究方面， 近年来也得到广泛应用。 1．淋巴细胞转化试验。人类淋巴细胞在体外与特异性抗原（如结核菌素）或非特异 性有丝分裂原（如植物血凝素，PHA）等一起孵育，T 细胞即被激活而向淋巴母细胞转化。 T 细胞转化过程可伴随有 DNA、RNA、蛋白质的合成增加，最后导致细胞分裂。在光学显 微镜下可计数转化后的淋巴母细胞数，也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入正在 分裂的淋巴细胞，用液闪测定仪来确定掺入量以确定淋巴细胞转化率。最近有一种不用同位 素，又可用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检查法，称为 MTT 检测法。MTT 是一种甲氮唑 盐，它是细胞线粒体脱氢酶的底物，细胞内的酶可将 MTT 分解产生蓝黑色成分。该产物的 多少与活细胞数成正比，结果可用酶标仪（595nm）测量光密度，作为 MTT 法的指标。 2．E-花环法。人类 T 细胞表面有羊细胞受体（CD2）能与羊红细胞结合形成玫瑰花样 结构。即将分离液分离出的外周的单个核细胞悬液与羊红细胞在体外混合，经 37℃培养 5～