二、基因重组菌外漏的防范 首先应了解培养微生物在普通通气搅拌罐中可能发生外漏的部位和操作。归纳 起来有：(1)排气，(2)机械密封，(3)接种，(4)取样，(5)培养后的灭菌(通入湿热蒸气)， (6) 排液(输至下一工序)。针对这些均应采取一些措施以防菌体外漏。现分别说明如 下。 1，排气 排出的气中含有大量气溶胶，在激烈起泡的培养时，培养液呈泡沫状。它们从 排气口向外排出，重组菌也容易随之外漏。 以往培养病原菌时；为防止菌体外流，采取加药剂槽的方法，但效果如何尚有 疑问。有人试验证明，排气中的微生物数量随着培养液中菌体浓度和通风速度等而 变化。用 5L 培养罐(装液量 2.5L)，以搅拌速度 400r/min，通气速度 1：1(VVM)， 即 2.5L/min(换算成罐内通气速度为 11cm/min)来培养大肠杆菌，发现每毫升培养液 中含 109 个菌体，每小时有 150~400 个菌随气排出；而培养酿酒酵母时，每小时从 每毫升含 108 个菌体培养液的排气中检出 30~70 个。由此可见，虽然培养液中菌体 浓度相差很大，但大肠杆菌和酵母菌仍以几乎相同程度从排气中漏出，并不取决于 菌体个体的大小。再有，提高通气速度时，单位体积的排气中，大肠杆菌和酵母菌 菌数都增加，通气速度与漏菌数之间也密切相关。总之，排气过程中含有相当多的 菌。为此，在通用通气搅拌型培养罐上安装排气鼓泡器，以防止激烈起泡时泡沫直 接外溢和外部微生物侵入污染，同时还能肉眼观察通气状态等(图 11-8)。气体通过 排气管到鼓泡瓶，再通过膜滤器。进而考察了该排气鼓泡瓶中加入药剂(如 2mol/L NaOH)的效果。 另外，为了解加热能否对排气灭菌，进行了与上述类似的实验。图 11-9 的结果 表明。用电热器对排气进行加热时，在电热器出口处的排气温度被控制在 200°C 左 右。电热器之后附有冷凝器，旨在使高温的排气冷却，以防膜滤器烧毁。 图 11-8 和图 11-9 的结果如表 11-4 所示。表中数字为培养开始启 12h 中在膜滤 器上捕集到的活菌数。结果表明，排气仅通过药剂还不能完全灭菌。使用药剂时若 能在排气鼓泡瓶内进行搅拌、消泡的话，是会有效果的。用电热器将排气加热至 200°C 时，均末在膜滤器上检出大肠杆菌和酵母菌。 图 11-10 是基因重组菌培养装置中普遍采用的排气除菌系统。为减少培养液的 蒸发量和降低排气的相对湿度。在罐排气口外安装冷却冷凝器，其后才是加热器， 排气气体经此加热至 60~80°C。相对湿度降低可预防滤器上凝结水汽。除菌滤器与 培养罐空气入口处的相同