单色器。荧光作用于检测器上,得到相应的电信号,经放大后再记录下来 (1)激发光源在紫外-可见区范围,常用的光源是氤灯和高压汞灯 (2)样品池荧光用的样品池须用低荧光的材料制成,通常用石英,形状以方形和长方形 为宜。 (3)单色器较精密的荧光分光光度计均采用光棚,有两个:第一单色器用于选择激发波 长;第二单色器用于分离出荧光发射波长。 (4)检测器荧光的强度迸常比较弱,因此要求检测器具有较高的灵敏度,一般由光电管 或光电倍增管作检测器,并与激发光成直角 (三)分子荧光分析法及其应用 【.荧光分析法的特点 1)灵敏度高与紫外-可见分光光度法比较,荧光是从入射光的直角方向检测,即在黑 背景下检测荧光的发射,所以一般来说,荧光分析的灵敏度要比紫外-可见分光光度法高2~4 个数量级,它的测定下限在01-9001·cm-3之间 用检出限来表示荧光法的灵敏度,即相对灵敏度,在实际应用中是比较方便的.一种相对 灵敏度是以喹宁在0.05mol·dm-3H2SO4溶液屮的荧光强度为标准,并定为1(荧光峰在 450nm).然后与相同浓度荧光物质的荧光强度进行比较,即可求得该物质的相对灵敏度,如 多数荧光仪器的检出限为0.05ng·cm3套宁,也有的为0005ng·cm-3奎宁。另一种灵敏 度的表示方法是以水的 Raman光的信噪比来表示,由于纯水易于获得,且便于测试,近来为 较多的厂家所采用。当水分子被光激发时,水分子蒙受暂时的畸变,在短时间内 (102-103)该分子会向各个不同方向发射出与激发波长相等的 Rayleigh光和波长略长 的 Raman光。用同一波长光线激发所产生的 Raman光波长也是一样的 (2)选择性强荧光法既能依据特征发射,又能依据特征吸收来鉴定物质。假如某几个 物质的发射光谱相似可以从激发光谱的差异把它们区分开来;而如果它们的吸收光谱相同, 则可用发射光谱将其区分 (3)试样量少和方法简便 (4)提供比较多的物理参数荧光分析法能提供包括激发光谱和发射光谱以及荧光强度 荧光效率、荧光寿命等许多物理参数。这些参数反映了分予的各种特性,能从不同角度提供被 研究的分子的信息 荧光分析法的弱点是它的应用范围还不够广泛。因为木身能发荧光的物质相对较少,用 加入某种试剂的方法将非荧光物质转化为荧光物质来进行分析,其数量也不是很多。另一方 面,由于荧光分析的灵敏度高测定时对环境因素敏感,干扰因素也较多。 2.定量测定方法 (1)校准曲线法荧光分析一般多采用校准曲线法,即用已知量的标准物质经过和试样一 样的处理后,配成一系列标准溶液在一定的仪器条件下测定这些溶液的荧光强度,作出校准 曲线。然后在同样的仪器条件下,测定试样溶液的荧光强度,从校准曲线上查出它们的浓度 (2)比较法如果已知某测定物质的荧光校准曲线的浓度线性范围,取已知量的荧光物 质(此量在校准曲线的线性范围之内)配成一标准溶液,测定其荧光强度。然后在同样条件下 测定试样溶液的荧光强度由标准溶液的浓度和两个溶液的荧光强度的比值,求得试样中荧光 物质的含量 93