式中[Q]为猝灭剂浓度,单位为mol·dm-3.K=K4/(K2|k3)称为猝灭常数。猝灭常数K 与溶液的粘度和温度有关,它们的近似关系式为K=T/200n(式中T为热力学温度,n为粘 度).可见,碰擅猝灭将随温度升高而增强,而在粘度大的溶剂中,猝灭作用较小 i)静态猝灭(又称组成化合物的猝灭).由于部分荧光物质分子M与猝灭剂分子Q 生成非荧光的配合物MQ而产生。这一过程往往还会引起溶液吸收光谱的改变 i)转人三重态的猝灭,分子由于系问的跨越跃迁,由单重态跃迁至三重态。转人三重 态的分子在常温下不发光,它们在与其他分子的碰撞中消耗能量而使荧光猝灭。溶液里的溶 解氧可能对有机化合物的光产生猝灭作用,尤其是芳香烃较为显著。其原因可能就是转入 三重态的猝灭。三重态基态的氧分子和单重激发态的荧光物质分子碰撞形成了单重激发态 的氧分子和三重态的荧光物质分子,使荧光猝灭 也有人认为氧和其他顺磁性气休会促进荧光物质的激发态分子系间跨越跃迁,或者是荧 光物质受到氧化,从而使荧光猝灭 iv)发生电子转移反应的猝灭,某些猝灭剂分子与荧光物质分子相互作用时,发生了电 子转移反应,因而引起荧光的猝灭。甲基蓝溶液的荧光被Fe2+离子猝灭便是一例。其他,如 I、Br,CNSˉ、S2O3等易于给出电子的阴离子,对奎宁罗丹明及荧光素钠等的荧光也会发 生猝灭作用 (v)荧光物质的自猝灭。在浓度较高的荧光物质溶液中往往会发生自猝灭现象。其原 因是单重激发态的分子在发生荧光之前和未激发的荧光物质分子碰撞而引起自猝灭,蒽和苯 的自猝灭便是一例,有些荧光物质分子在溶液浓度高时会形成二聚体或多聚体,使它们的吸 收光谱发生变化,也引起溶液荧光强度的降低或消失 (二)荧光分析仪 用于测量荧光的仪器都有以下四个组成部件:激发光源样品池用于选择激发光波长和 荧光波长的单色器以及检测器。图45是荧光分析仪的结构示意图 第一单色器 或 滤光片 记录仪 光「第三单色湣 滤光片 检测器 图45荧光分析仪基本部件示意图 由光源发出的光经第一单色器得到所需要的激发光波长。如其强度为l0,通过样品池后, 由于一部分光能被荧光物质吸收其透射光强度减为l。荧光物质被激发后,将发射荧光。为 了消除入射光和散射光的影响荧光的测量通常在与激发光成直角的方向上进行。为消除可 能共存的其他光线的干扰如由激发光所产生的反射光 Rayleigh散射光和 Raman光,以及 为将溶液中杂质所发生的荧光滤去,以获得所需要的荧光,在样品池和检测器之间设置了第二 2