同位素示踪术是用放射性核素的射线作用，研究细胞对某种物质的吸收、合成、转运和分 泌等代谢过程。将放射性核素或其标记物注入动物体内或加入细胞培养的培养基内，细胞摄取 该物质后，取被检组织制成切片或细胞涂片。可用显微镜放射自显影术(microa叫 toradiography)检测该放射性物质在细胞内的原位分布及其代谢转归，即将薄层感光乳胶涂在 切片或涂片的表面，标本在暗盒内保存一定时间后，细胞内的放射性核素产生的射线使乳胶中 的溴化银还原为银粒，经显影和定影后在光镜下观察银粒的分布。射线能量低，射程短，电 离作用强，常用的β射线核素是3H、14C、32p、35s、45Ca、131。如用H-胸腺嘧啶核苷研究 细胞DNA合成及细胞增殖动态（图1~1I)。用35S~蛋氨酸研究某些腺细胞分泌物的合成与排 泄，用31-碘化钠研究甲状腺素的合成等。还可做标本中的银粒数计量或其光密度测定，进 行定量分析。另外，也可用液体闪烁计数器测定分离细胞或其匀浆的放射线强度，进行定量研 究。 (六)原位杂交术 原位杂交术(in situ hybridization)是一种核酸分子杂交技术，它是通过检测细胞内 mRNA和DNA序列片段，原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基 图1~11大鼠肝大部切除后再生过程中增殖期肝细胞 摄取H标记的胸腺嘧啶核苷放射自显影像 ↑增殖期肝细胞核 因表达。其基本原理是根据两条单链核苷酸互补碱基序列专一配对的特点，应用已知碱基 序列并具有标记物的RNA或DNA片段即核酸探针(probe),与组织切片或细胞内的待测核酸 (RNA或DNA片段)进行杂交，通过标记物的显示，在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA 的存在与定位。此项技术需首先制备某种核酸探针，其种类主要有三种：①利用大肝杆菌重组 带有目的基因的质粒DNA,制成互补DNA探针(CDNA):②应用限制性核酸内切酶消化制成线性 DNA模板，在体外转录获得反意RNA探针(cDNA):③依照待测核酸的核苷酸序列，应用DNA合 成仪合成寡聚核苷酸探针。cRNA和cDNA的常用标记物有32S、32p、3H等放射性核素和荧光 素、生物素、地高辛等非放射性物质。组织学应用的原位杂交术主要是染色体原位杂交和细胞 同位素示踪术是用放射性核素的射线作用，研究细胞对某种物质的吸收、合成、转运和分 泌等代谢过程。将放射性核素或其标记物注入动物体内或加入细胞培养的培养基内，细胞摄取 该 物 质 后 ， 取 被 检 组 织 制 成 切 片 或 细 胞 涂 片 。 可 用 显 微 镜 放 射 自 显 影 术 （ microau toradiography）检测该放射性物质在细胞内的原位分布及其代谢转归，即将薄层感光乳胶涂在 切片或涂片的表面，标本在暗盒内保存一定时间后，细胞内的放射性核素产生的射线使乳胶中 的溴化银还原为银粒，经显影和定影后在光镜下观察银粒的分布。β射线能量低，射程短，电 离作用强，常用的β射线核素是3H、14C、32P、35S、45Ca、131 I。如用3H－胸腺嘧啶核苷研究 细胞DNA合成及细胞增殖动态（图1－11）。用35S－蛋氨酸研究某些腺细胞分泌物的合成与排 泄，用131 I－碘化钠研究甲状腺素的合成等。还可做标本中的银粒数计量或其光密度测定，进 行定量分析。另外，也可用液体闪烁计数器测定分离细胞或其匀浆的放射线强度，进行定量研 究。 （六）原位杂交术 原位杂交术（in situ hybridization）是一种核酸分子杂交技术，它是通过检测细胞内 mRNA和DNA序列片段，原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基 图1－11 大鼠肝大部切除后再生过程中增殖期肝细胞 摄取3H标记的胸腺嘧啶核苷放射自显影像 ↑ 增殖期肝细胞核 因表达。其基本原理是根据两条单链核苷酸互补碱基序列专一配对的特点，应用已知碱基 序列并具有标记物的RNA或DNA片段即核酸探针（probe），与组织切片或细胞内的待测核酸 （RNA或DNA片段）进行杂交，通过标记物的显示，在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA 的存在与定位。此项技术需首先制备某种核酸探针，其种类主要有三种：①利用大肝杆菌重组 带有目的基因的质粒DNA，制成互补DNA探针(cDNA);②应用限制性核酸内切酶消化制成线性 DNA模板，在体外转录获得反意RNA探针(cDNA);③依照待测核酸的核苷酸序列，应用DNA合 成仪合成寡聚核苷酸探针。cRNA和cDNA的常用标记物有32S、32P、3H等放射性核素和荧光 素、生物素、地高辛等非放射性物质。组织学应用的原位杂交术主要是染色体原位杂交和细胞