生 第四节蛋白质的理化性质 化学 及其分膏轮化 4、浓缩与保存 理化性质 浓缩方法： 保存方法： 2 分离纯化 ①晶体保存： 原则 结晶过程本身也伴随着一定程度的提纯。能否 方法 结晶不仅是纯度的一个指标，也是判断制品是 3分析鉴定 否有活性的指标。纯度越高，溶液越浓，越容 易结晶。 结晶方法：使溶液略处于过饱和状态。降低温 度、盐析、加有机溶剂、调节pH、接入晶种。 ②冻干粉保存： ③溶液保存： 加入抗冻剂（50%甘油)后-20~-70℃保存。 生物 化学 第四节 蛋白质的理化性质 及其分离纯化 分离纯化蛋白质的一般原则 分离和纯化蛋白质就是要增加制品的 纯度或比活性。 一般流程为：前处理、粗分级、细分级、 浓缩与保存 分离纯化 电泳 前 处 理 粗 分 离 细 分 离 生物组织 无细胞提取液 破碎、溶解、差速离心 选择性沉淀法 亲和 层析 离子交 换层析 精制后蛋白质保存 凝胶 过滤 疏水 层析 吸附 层析 1、前处理： ①将组织和细胞破碎 动物组织和细胞：电动捣碎机、匀浆器、超 声波处理植物组织和细胞：石英砂+提取液， 研磨、 纤维素酶处理 细菌：超声波震荡、与砂研磨、高压挤压、 溶菌酶处理（分解肽聚糖） ②差速离心法收集细胞的某一组分 在不同离心力下沉降的细胞组分 ③如果提取膜蛋白： 超声波或去污剂使膜解聚，然后用适当的介 质提取。 2、粗分级： 一般用选择性沉淀法。 ①（NH4）2SO4分级沉淀法 （盐析） ②等电点选择性沉淀法 ③有机溶剂分级沉淀法 ④热处理选择性沉淀法 ⑤生物碱或三氯乙酸选择性 沉淀法 3、细分级： ①透析除盐 ②sephdex G-25凝胶过滤除盐 层析法：凝胶过滤层析、离子交换层析、吸 附层析、亲和层析、疏水层析 电泳法：自由界面电泳、区带电泳（凝胶 电泳、滤纸和薄膜电泳、粉末电泳、细丝电 泳等）、盘状电泳、等电聚焦、双向电泳 离心法：密度梯度离心 4、浓缩与保存 浓缩方法： 保存方法： ①晶体保存： 结晶过程本身也伴随着一定程度的提纯。能否 结晶不仅是纯度的一个指标，也是判断制品是 否有活性的指标。纯度越高，溶液越浓，越容 易结晶。 结晶方法：使溶液略处于过饱和状态。降低温 度、盐析、加有机溶剂、调节pH、接入晶种。 ②冻干粉保存： ③溶液保存： 加入抗冻剂（50%甘油）后-20～-70℃保存。 分析鉴定 理化性质 原则 方法 (1) (2) 1