3.质粒选择的要求。质粒的选择主要依据实验目的决 定。类似的实验不同公司往往有大量的不同型号质粒可供选 择，此时通常要考虑质粒上多克隆位点中是否有与插入片段 相匹配的限制性内切酶位点。我们建议购买前先征询有关经 常使用类似质粒的专家的建议，采用一些使用起来顺手且性 能可靠的质粒。 4.插入片段的处理。当插入片段两端缺少与质粒相匹 配的末端时，可以采用相应的酶补平末端，形成钝端，使之 可以与载体上的钝端相连接。由于载体钝端自身环化，使重 组成功率极大地下降，因此建议采用以下质粒的5’去磷酸 化处理，以减少载体的自身环化，提高重组的成功率