86.原核生物主要有两种类型的DNA连接酶:E. coli DNA连接酶和T4DNA连接酶。 基因工程中使用的主要是T4DNA连接酶,它是从T4噬菌体感染的E.coli中分 离的一种单链多肽酶,分子量为 kDa,由T4噬菌体基因 编 码。E. coli dNA连接酶是由大肠杆菌基因 编码,也是一条多肽链的 单体,分子量为 kDa。这两种DNA连接酶有两个重要的差异 第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同,T4DNA连接酶用 而E. cOli dNA连接酶则用 作为能源。第二是它们催化平末 端连接的能力不同,在正常情况下只有性4DNA连接酶能够连接平末端,E. cOli DNA 连接酶则不能。即使是调整反应条件,E. cOli dNa连接酶催化平末端的连接效 率也只有T4DNA连接酶的 87.DNA连接酶的单位通常用 Weiss单位表示,一个 Weiss单位是: 88.DNA聚合酶Ⅰ是 在1965年从大肠杆菌细胞中分离的,所以 又称为 聚合酶。该酶由大肠杆菌基因 编码 是一种单链球蛋白,分子量为109kDa,酶蛋白中含有一个Zn原子。 89.T4DNA聚合酶与 Klenow酶一样,具有5→3’聚合酶和3’→5’外切酶两种活 性,但是它的3’→5’外切酶的活性比 Klenow酶强 倍。该酶的3 5’外切活性既能作用于单链DNA也能作用于双链DNA,不过作用于 链的活性要强于 0.反向转录酶( reverse transcriptase)是由 和 kDa两个亚 单位组成的二聚体,作用时以RNA为模板合成DNA 91.从小牛胸腺中分离纯化的末端转移酶催化的基本反应是将 同时释放出游离的无机磷。催化反应时不需 但 需要引物,单链DNA是最好的引物,单链DNA受体的长度最短需有 个 dNTP。具有3’突出末端的双链DNA也是较好的反应底物。二价离子和DNA末端 状态对催化反应影响较大,但是用 作为辅助离子,可以催化任何形 式的末端(突出的、隐含的、平齐的)加接单核苷酸,但突出的3’端效率较高。以 Mn2/Mg2作为辅助因子,只能在单链DNA或双链DNA的3’突出端加尾c 92.S1核酸酶(S1 nuclease)是从米曲霉( Aspergillus oryzae)中分离纯化的一种含 的金属蛋白,分子量为32kDa,是一种耐热的酶(37-65℃)。 93.在S1保护实验中,S1切割的温度有两种:20℃和45℃,这是因为:在20℃时 在45℃时 技术可以用来鉴定DNA分子中与DNA结合蛋白相互作用 的特定序列。 95.真核生物有两种DNA连接酶,连接酶I主要是参与 而连接酶 Ⅱ则是参与 96.T4RNA连接酶是1972年发现的,并于1977年纯化。该酶是由T4噬菌体基因57 86.原核生物主要有两种类型的 DNA 连接酶： E．coli DNA 连接酶和 T4 DNA 连接酶。 基因工程中使用的主要是 T4 DNA 连接酶，它是从 T4 噬菌体感染的 E．coli 中分 离的一种单链多肽酶，分子量为 kDa，由 T4 噬菌体基因 编 码。E．coli DNA 连接酶是由大肠杆菌基因 编码，也是一条多肽链的 单体，分子量为 kDa。这两种 DNA 连接酶有两个重要的差异： 第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同，T4 DNA 连接酶用 ， 而 E．coli DNA 连接酶则用 作为能源。第二是它们催化平末 端连接的能力不同，在正常情况下只有 T4 DNA 连接酶能够连接平末端，E．coli DNA 连接酶则不能。即使是调整反应条件，E．coli DNA 连接酶催化平末端的连接效 率也只有 T4 DNA 连接酶的 。 87.DNA 连接酶的单位通常用 Weiss 单位表示，一个 Weiss 单位是： 。 88.DNA 聚合酶Ⅰ是 在 1965 年从大肠杆菌细胞中分离的，所以 又称为 聚合酶。该酶由大肠杆菌基因 编码， 是一种单链球蛋白，分子量为 109kDa，酶蛋白中含有一个 Zn 原子。 89.T4 DNA 聚合酶与 Klenow 酶一样，具有 5’→3’聚合酶和 3’→5’外切酶两种活 性，但是它的 3’→5’外切酶的活性比 Klenow 酶强 倍。该酶的 3’ → 5’外切活性既能作用于单链 DNA 也能作用于双链 DNA，不过作用于 链的活性要强于 链。 90.反向转录酶(reverse transcriptase)是由 kDa 和 kDa 两个亚 单位组成的二聚体，作用时以 RNA 为模板合成 DNA。 91．从小牛胸腺中分离纯化的末端转移酶催化的基本反应是将 ， 同时释放出游离的无机磷。催化反应时不需 ，但 需要引物，单链 DNA 是最好的引物，单链 DNA 受体的长度最短需有 个 dNTP。具有 3’突出末端的双链 DNA 也是较好的反应底物。二价离子和 DNA 末端 状态对催化反应影响较大，但是用 作为辅助离子，可以催化任何形 式的末端(突出的、隐含的、平齐的)加接单核苷酸，但突出的 3’端效率较高。以 Mn2+／Mg2+作为辅助因子，只能在单链 DNA 或双链 DNA 的 3’突出端加尾。 92. S1 核酸酶(S1 nuclease)是从米曲霉(Aspergilluc oryzae)中分离纯化的一种含 的金属蛋白，分子量为 32kDa，是一种耐热的酶(37—65℃)。 93．在 S1 保护实验中， S1 切割的温度有两种：20℃和 45℃，这是因为：在 20℃时， ;在 45℃时， 。 94. 技术可以用来鉴定 DNA 分子中与 DNA 结合蛋白相互作用 的特定序列。 95.真核生物有两种 DNA 连接酶，连接酶Ⅰ主要是参与 ，而连接酶 Ⅱ则是参与 。 96．T4RNA 连接酶是 1972 年发现的，并于 1977 年纯化。该酶是由 T4 噬菌体基因