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病毒感染后通常诱发针对病击一种或多种坑原免疫应答,特异性抗体效价升高或M抗体出现有错助临床诊新的价值。 (一)补体结合试验(CF)CF分二个阶段:1抗原与抗体(一个为已知,一个为待检)混合,加入定量补体,若抗原与抗体相对应,则 补体被消耗:2.在上述混合物中加入溶血素致敏的绵羊红细抱,若补本已与抗原抗体复合物完全结合,没有利补体存在,那么绵羊红细跑不会 溶血,结果为阳性,说明待检标本中有特异性存在,出现阳性结果时血清标本最高稀释度为抗体的效价。反之为阴性结果。由于补体结合抗体 产生早,消失快。话于诊断病毒近期感染。(表23.5), 取时期 116 一抗体效价 此例的抗体效价升高信,有诊断意义 (二)中和试验(NT)在活体或活细抱内测定病毒被特异性抗体中和、而失去致病力的试验。试验时:@须先测出病毒的半数致死星 (LD50)或半数感染量(1D50):②随即取话病毒与被试血清按不同比例混合 ,放置1~2小时让其充分中和:③将病毒与血清混合液注入 组动物、鸡胚或组织细胞培养管内培养;④根据动物鸡胚死亡数或细胞病变的管数,计算出百分比(%) 然后再计算这些试验对象中的半 数兔于死亡或免于致病所需要的最少量血清(或最大量的病毒),就是该血清的中和抗体效价(称为50%终点的中和效价)。诊新病毒性疾病 时,须取病人双份血清同时做对比试验,病后血清的中和抗体效价也必须超过病初血清4倍以上,才能确诊(表236)。用此法鉴定病毒时 须将病毒分别与免疫血清及血清正常血清(对粥)混合做对比试验,免疫血清比正常血清多中和50~100倍剂量的病毒,才能断定是该病 毒。 表23·6病人双份血请的病毒中和试验结果(组织细胞培养的中和试验】 试验病毒(用10个TCLDS0)@ 病人血清(取血时 甲病 说明:@TC1D50-组织培养半数感染剂量】 每种稀程度接种4支组织细跑培关管:0一未出现细跑致病作用:+一出现细附致病作用 角比的病后血毒中和抗体决价比信切血清增高双倍,有诊新音义 病吉中和抗体的特异性高,持续时间久,以往受显性或隐性感染后,血中可长期存在中和抗体,所以适用于流行病学调查或人群免疫水平 研究,但因试验方法素杂,耗用动物、鸡还或细孢培养较多,故一般不作常规使用。 (三)血凝抑制试验(Hem世glutinationinhibition test,HIT)某些病毒(流感病毒、副流感病毒、想腺炎病毒、脑炎向毒等)能凝集红 细胞,而抗体与这些病毒结合后却能阳止它们的凝集,若双份血清有≥4倍以上滴度增高,也可用于诊断这类病毒感染,本法简便、快速、经 济、特异性高,常用于流行病学调查等。 (四)g铺提ELISA特异性gM出现于病毒感染的早期或病毒感染的活动期,因此可从急性期病人单份血清中检出特异性1gM,这是病 声感染实验室早期诊断的可靠方法。实验中先用u链血清包被微培板孔,用以铺捉血清标本中的1M类抗体,再加入特异性病声抗原及确标抗体 以证实特异性1gM的存在。现已广泛用于病毒病的早期诊断。在先天性感染中,1gM检测有特殊意义,因gM不能通过胎盘,新生儿血清中发现 抗病毒1gM提示为宫内感 第二节病毒感染的防治原则 一、免疫预防 ()人工自动免 减毒活病毒位苗((Liveattenuated virus vaccines))选用抗原性与野毒株一致而稳定无毒或显着减毒的活病毒突变株做为疫苗。可筛选 然减毒株,或在多种宿主中连续传代培养诱导出减毒株。,接种活病毒菌近似自然感染,在宿主中可繁殖,仅接种一次便可较长时间刺激抗体 产生及细胞介导的免疫应答,并可产生局部抗体。目前推荐使用的减毒活病毒疫苗见表23-7, 表237预防人类病击性疾病的疫苗 历毒状态 使用方法 鸡还细泡培苏 话高击 鸡胚细跑培养 减毒活病毒株 皮下接种 眼腺炎 风疹 鸭还或人二倍体细胞 减毒活病毒 皮下接种 减毒活病毒株 乙型肝炎 血源纯化HBsAg、.酵母表达 皮下接种 重组HBsAg 病毒业单位 皮下接种 乙型脑黄 灭活病志 地凤肾细饱培养 皮下接种 狂犬病 地鼠骨或人二倍体细跑 灭活病毒 皮下接种 活疫苗的不利之处在于:①在接种者体内增殖中有恢复毒力的潜在危险性:②哥毒株感染可干扰疫苗株的免疫效果:③老年人,免疫缺陷 者不宜接种:④保存期、有效期有限病毒感染后通常诱发针对病毒一种或多种抗原免疫应答,特异性抗体效价升高或lgM抗体出现有辅助临床诊断的价值。 (一)补体结合试验(CF) CF分二个阶段:1.抗原与抗体(一个为已知,一个为待检)混合,加入定量补体,若抗原与抗体相对应,则 补体被消耗;2.在上述混合物中加入溶血素致敏的绵羊红细胞,若补本已与抗原抗体复合物完全结合,没有剩补体存在,那么绵羊红细胞不会 溶血,结果为阳性,说明待检标本中有特异性存在,出现阳性结果时血清标本最高稀释度为抗体的效价。反之为阴性结果。由于补体结合抗体 产生早,消失快,适于诊断病毒近期感染。(表23-5)。 取血时期 血清稀释倍数及试验结果 抗体效价 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 发病2~3内血清 发病2~3周后血清 + + + + + + - + - + - - - - 1:8 1:32* *此例的抗体效价升高4倍,有诊断意义。 (二)中和试验(NT)在活体或活细胞内测定病毒被特异性抗体中和、而失去致病力的试验。试验时:①须先测出病毒的半数致死量 (LD50)或半数感染量(ID50);②随即取活病毒与被试血清按不同比例混合,放置1~2小时让其充分中和;③将病毒与血清混合液注入各 组动物、鸡胚或组织细胞培养管内培养;④根据动物、鸡胚死亡数或细胞病变的管数,计算出百分比(%),然后再计算这些试验对象中的半 数免于死亡或免于致病所需要的最少量血清(或最大量的病毒),就是该血清的中和抗体效价(称为50%终点的中和效价)。诊断病毒性疾病 时,须取病人双份血清同时做对比试验,病后血清的中和抗体效价也必须超过病初血清4倍以上,才能确诊(表23-6)。用此法鉴定病毒时, 须将病毒分别与免疫血清及血清正常血清(对照)混合做对比试验,免疫血清比正常血清多中和50~100倍剂量的病毒,才能断定是该病 毒。、 表23-6 病人双份血清的病毒中和试验结果(组织细胞培养的中和试验) 试验病毒(用100个TCLD50)① 病人血清(取血时期) 活病毒+稀释血清对细胞致病② 50%终点血清中和抗体效价③ (血清稀释倍数) 1:5 1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 甲病毒 病初(2日) 0000 00++ ++++ ++++ ++++ ++++ 10(1:10) 病后(20日) 0000 0000 0000 0000 00++ ++++ 80(1:80 说明:①TCID50=组织培养半数感染剂量。 ②每种稀释度接种4支组织细胞培养管;0=未出现细胞致病作用;+=出现细胞致病作用。 ③此例的病后血清中和抗体效价比病初血清增高8倍,有诊断意义。 病毒中和抗体的特异性高,持续时间久,以往受显性或隐性感染后,血中可长期存在中和抗体,所以适用于流行病学调查或人群免疫水平 研究,但因试验方法繁杂,耗用动物、鸡胚或细胞培养较多,故一般不作常规使用。 (三)血凝抑制试验(Hemagglutinationinhibition test,HIT)某些病毒(流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、脑炎病毒等)能凝集红 细胞,而抗体与这些病毒结合后却能阻止它们的凝集,若双份血清有≥4倍以上滴度增高,也可用于诊断这类病毒感染。本法简便、快速、经 济、特异性高,常用于流行病学调查等。 (四)lgM捕捉ELISA 特异性lgM出现于病毒感染的早期或病毒感染的活动期,因此可从急性期病人单份血清中检出特异性lgM,这是病 毒感染实验室早期诊断的可靠方法。实验中先用u链血清包被微培板孔,用以捕捉血清标本中的lgM类抗体,再加入特异性病毒抗原及酶标抗体 以证实特异性lgM的存在。现已广泛用于病毒病的早期诊断。在先天性感染中,lgM检测有特殊意义,因lgM不能通过胎盘,新生儿血清中发现 抗病毒lgM提示为宫内感染。 第二节 病毒感染的防治原则 一、免疫预防 (一)人工自动免疫 1.减毒活病毒疫苗(Liveattenuated virus vaccines)选用抗原性与野毒株一致而稳定无毒或显着减毒的活病毒突变株做为疫苗。可筛选自 然减毒株,或在多种宿主中连续传代培养诱导出减毒株。接种活病毒疫苗近似自然感染,在宿主中可繁殖,仅接种一次便可较长时间刺激抗体 产生及细胞介导的免疫应答,并可产生局部抗体。目前推荐使用的减毒活病毒疫苗见表23-7。 表23-7 预防人类病毒性疾病的疫苗 疾病 疫苗来源 病毒状态 使用方法 脊髓炎质炎 麻疹 腮腺炎 风疹 乙型肝炎 乙型脑炎 狂犬病 人二倍体细胞系 鸡胚细胞培养 鸡胚细胞培养 鸭胚或人二倍体细胞 血源纯化HBsAg、酵母表达 重组HBsAg 地鼠肾细胞培养 地鼠肾或人二倍体细胞 减毒活病毒株 减毒活病毒株 减毒活病毒株 减毒活病毒株 病毒亚单位 灭活病毒 灭活病毒 口服 皮下接种 皮下接种 皮下接种 皮下接种 皮下接种 皮下接种 活疫苗的不利之处在于:①在接种者体内增殖中有恢复毒力的潜在危险性;②野毒株感染可干扰疫苗株的免疫效果;③老年人、免疫缺陷 者不宜接种;④保存期、有效期有限
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