14实验方法 肿瘤反应性TCR?962(OT3)-Fc融合蛋白的表达:利用昆虫表达系统表达 TCR9/62(OT3)Fc融合蛋白,实验方法见本研究前期发表文章6。 荷瘤裸鼠模型的建立:取新鲜传代培养的人卵巢癌细胞SKOV3,用0.25% 的胰酶消化,用PBS清洗3变,重悬,计数;给裸鼠右前腋下接种1×106/只人 卵巢癌细胞SKOV3,标准饲养,约14d肿瘤长至约0.5cm3,进行下步实验。 TCRγ9/62(OT3)}Fc在荷人卵巢癌(SKOV3)裸鼠体内显像实验:取0.5mg 抗体TCR?9/62(OT3)Fc,加入50μL的2mg/mL2IT,避光,室温反应45min 过PD-10柱纯化:修饰后融合蛋白TCRγ9/62(OT3)Fc加入10μ100mgmL葡 庚糖酸纳溶液和8μ的1 mg/mL SnCl2溶液,立即加入0.2mL2.lmCi的mTe, 室温反应15min后过PD-10柱纯化分离,收集标记产品,测定放射性计数并计 算标记率和产率。收集2.5mL产品,放射性活度1.7mCi。尾静脉注射标记的融 合蛋白02mL(024mCi),分别于于注射后10min、3h、7h和24h进行显像 采集计数为500k,采集炬阵为128×128,ZOOM为3.67,能峰为140keV,能 窗20%,使用低能髙分辨平行孔准直器。观察标记药物在裸鼠体内的显像情况 TCRγ9/62(OT3)Fcc的在荷人卵巢癌(SKOV3)裸鼠体内分布实验:给每只 裸鼠前腋下接种1×106人卵巢癌细胞SKOⅤ3细胞,标准饲养。当肿瘤长至约 07cm时,平均分成2组,每组3只,其中两组尾静脉注射 9mc-TCR?9/62(OT3}Fc,体积0.1mL(1.85MBq,含抗体约25μg)分别于用 药后4h和24h,从眼球取血,扭断颈椎至死,解剖,取心、肝、脾、肾、肺、 胃、畅、肌肉、骨和肿瘤等主要脏器,称重,并测定放射性计数,计算每克组织 摄取放射性的百分比(ID%g)和肿瘤/非肿瘤组织放射性(TNT)的比值。 TCRγ9)62(O3}Fc融合蛋白的荷瘤(SKoⅴ3)裸鼠治疗实验:荷瘤裸鼠模 型的建立:方法同前。肿瘤大小为0.1cm3时,将裸鼠随机分为2组:PBS对照 组和治疗组。每次治疗剂量:PBS对照组40μPBS只;抗体治疗组每只荷瘤裸 鼠与肿瘤周边注射40μL,浓度为1uguL(即40g/只)TR?9/62(OT3)Fc。第 一次注射记为第1天,每3d治疗一次,共治疗4次。从第1天起每3d观察肿 瘤结节生长情况。用卡尺测量肿瘤结节的长径与短径,计算肿瘤体积。瘤体体积 计算公式:瘤体体积(mm3)=a×b2×0.5。a:瘤体长径(mm),b:瘤体短径(mm)。 并观察各组小鼠的生存期。1.4 实验方法 肿瘤反应性 TCR9/2(OT3)-Fc 融合蛋白的表达：利用昆虫表达系统表达 TCR9/2(OT3)-Fc 融合蛋白，实验方法见本研究前期发表文章[6]。 荷瘤裸鼠模型的建立：取新鲜传代培养的人卵巢癌细胞 SKOV3，用 0.25% 的胰酶消化，用 PBS 清洗 3 变，重悬，计数；给裸鼠右前腋下接种 1×106 /只人 卵巢癌细胞 SKOV3，标准饲养，约 14 d 肿瘤长至约 0.5 cm3，进行下步实验。 TCR9/2(OT3)-Fc 在荷人卵巢癌（SKOV3）裸鼠体内显像实验：取 0.5 mg 抗体 TCR9/2(OT3)-Fc，加入 5.0 L 的 2mg/mL 2-IT，避光，室温反应 45 min， 过 PD-10 柱纯化；修饰后融合蛋白 TCR9/2(OT3)-Fc 加入 10 L 100 mg/mL 葡 庚糖酸纳溶液和 8 L 的 1 mg/mL SnCl2 溶液，立即加入 0.2 mL 2.1mCi 的 99mTc， 室温反应 15 min 后过 PD-10 柱纯化分离，收集标记产品，测定放射性计数并计 算标记率和产率。收集 2.5 mL 产品，放射性活度 1.7 mCi。尾静脉注射标记的融 合蛋白 0.2 mL（0.24mCi）,分别于于注射后 10 min、3 h、7 h 和 24 h 进行显像。 采集计数为 500k，采集炬阵为 128×128，ZOOM 为 3.67，能峰为 140 keV，能 窗 20%，使用低能高分辨平行孔准直器。观察标记药物在裸鼠体内的显像情况。 TCR9/2(OT3)-Fc c 的在荷人卵巢癌（SKOV3）裸鼠体内分布实验：给每只 裸鼠前腋下接种 1×106 人卵巢癌细胞 SKOV3 细胞，标准饲养。当肿瘤长至约 0.7 cm 时，平均分成 2 组，每组 3 只 ， 其 中 两 组 尾 静 脉 注 射 99mTc-TCR9/2(OT3)-Fc，体积 0.1 mL（1.85 MBq，含抗体约 2.5μg）分别于用 药后 4 h 和 24 h，从眼球取血，扭断颈椎至死，解剖，取心、肝、脾、肾、肺、 胃、畅、肌肉、骨和肿瘤等主要脏器，称重，并测定放射性计数，计算每克组织 摄取放射性的百分比（ID%/g）和肿瘤/非肿瘤组织放射性（T/NT）的比值。 TCR9/2(OT3)-Fc 融合蛋白的荷瘤（SKOV3）裸鼠治疗实验：荷瘤裸鼠模 型的建立：方法同前。肿瘤大小为 0.1 cm3 时，将裸鼠随机分为 2 组：PBS 对照 组和治疗组。每次治疗剂量：PBS 对照组 40 L PBS/只；抗体治疗组每只荷瘤裸 鼠与肿瘤周边注射 40 L，浓度为 1 g/L（即 40 g/只）TCR9/2(OT3)-Fc。第 一次注射记为第 1 天，每 3 d 治疗一次，共治疗 4 次。从第 1 天起每 3 d 观察肿 瘤结节生长情况。用卡尺测量肿瘤结节的长径与短径，计算肿瘤体积。瘤体体积 计算公式：瘤体体积（mm3）=a  b 2  0.5。a：瘤体长径（mm），b：瘤体短径（mm）。 并观察各组小鼠的生存期