第三章酶活性的测定及分离纯化 在酶的分离纯化、性质研究以及酶制剂的生产和应用时,都要遇到对酶的活性、纯度及含量 进行经常的、大量的测定工作,这是必不可少的指标。酶活性是指酶催化一定化学反应的能力, 检查酶的含量及存在,通常是用该酶在一定条件下催化某一特定反应的速度,即酶的活性来表示 3.1酶活性单位 酶活性指的是酶制剂催化能力的大小,它既与酶蛋白的浓度有关,又与酶分子的催化能力大 小有关。酶活性用单位体积或单位质量酶制剂所含的酶单位来表示,即um或umg 3.1.1实用单位 不同的酶采用不同的标准。如DNA聚合酶Ⅰ以在特定反应条件下,30分钟内催化10nmol dNTP合成为TCA(三氯乙酸)不溶物所需的酶量;又如T4DNA连接酶的单位定义为:在20 u反应体积中,16℃,30分钟内,将50%的HindⅢ酶切的ADNA片段重新连接起来所需的酶 量。ACC合成酶的单位是:30℃,1小时转化SAM生成 Inmol Aco所需的酶量 3.12国际酶活性单位 1961年,国际酶学会议为酶活性单位规定了一个统一的标准,即在特定的条件下,1分钟转 化1mol底物,或转化1uN底物有关基团所需的酶量为1个单位(u)。这是酶活性的国际单位。 3.1.3 Katal 1972年,国际酶学委员会提出了一个新的酶活单位,叫 katal(kat),kata是一个很大的酶活 单位,1kata是指1秒钟转化lmo底物,或转化IN底物有关基团所需的酶量。1kata=6×10u。 3.14转换数 在标准条件下,每摩尔单体酶或每摩尔催化中心在1分钟内转换底物成产物的μmol数,可 表示为: max mo1·n1-1,min-1 [Eo l/Kp称为一个催化循环,单位为分钟 3.1.5比活性 酶的纯度往往用比活性来表示,比活性是用同一酶制剂的酶活性除以蛋白质的质量,即单位 质量蛋白质所具有的酶活性,常用的单位为 u/mg protein。酶制剂的比活性越高说明酶的纯度越1 第三章 酶活性的测定及分离纯化 在酶的分离纯化、性质研究以及酶制剂的生产和应用时，都要遇到对酶的活性、纯度及含量 进行经常的、大量的测定工作，这是必不可少的指标。酶活性是指酶催化一定化学反应的能力， 检查酶的含量及存在，通常是用该酶在一定条件下催化某一特定反应的速度，即酶的活性来表示。 3.1 酶活性单位 酶活性指的是酶制剂催化能力的大小，它既与酶蛋白的浓度有关，又与酶分子的催化能力大 小有关。酶活性用单位体积或单位质量酶制剂所含的酶单位来表示，即 u/ml 或 u/mg。 3.1.1 实用单位 不同的酶采用不同的标准。如 DNA 聚合酶Ⅰ以在特定反应条件下，30 分钟内催化 10nmol dNTP 合成为 TCA（三氯乙酸）不溶物所需的酶量；又如 T4 DNA 连接酶的单位定义为：在 20 μl 反应体积中，16℃，30 分钟内，将 50%的 HindⅢ酶切的λDNA 片段重新连接起来所需的酶 量。ACC 合成酶的单位是：30℃，1 小时转化 SAM 生成 1nmol ACC 所需的酶量。 3.1.2 国际酶活性单位 1961 年，国际酶学会议为酶活性单位规定了一个统一的标准，即在特定的条件下，1 分钟转 化 1μmol 底物，或转化 1μN 底物有关基团所需的酶量为 1 个单位(u)。这是酶活性的国际单位。 3.1.3 Katal 1972 年，国际酶学委员会提出了一个新的酶活单位，叫 katal(kat)，katal 是一个很大的酶活 单位，1 katal 是指 1 秒钟转化 1mol 底物，或转化 1N 底物有关基团所需的酶量。1 katal＝6×10u。 3.1.4 转换数 在标准条件下，每摩尔单体酶或每摩尔催化中心在 1 分钟内转换底物成产物的μmol 数，可 表示为： 1/Kp 称为一个催化循环，单位为分钟。 3.1.5 比活性 酶的纯度往往用比活性来表示，比活性是用同一酶制剂的酶活性除以蛋白质的质量，即单位 质量蛋白质所具有的酶活性，常用的单位为 u/mg protein。酶制剂的比活性越高说明酶的纯度越