1、酶活力与酶促反应速度 酶活力:用在一定条件下,酶催化某一反应的反应速度表示。反应速度快,活力就越高 酶量一酶活力一反应速度 酶促反应速度的表示方法:单位时间、单位体积中底物的减少量或产物的增加量 单位:浓度/单位时间 P243图4-4酶反应速度曲线 研究酶促反应速度,以酶促反应的初速度为准。因为底物浓度降低、酶部分失活产物抑制和逆 反应等因素,会使反应速度随反应时间的延长而下降。 2、酶的活力单位(U) 国际酶学会标准单位:在特定条件下,1分钟内能转化 luol底物的酶量,称一个国际单位(IU) 特定条件:25℃pH及底物浓度采用最适条件(有时底物分子量不确定时,可用转化底物中 lumo 的有关基团的酶量表示)。 实际工作中,每一种酶的测活方法不同,对酶单位分别有一个明确的定义。 如:限制性核酸内切酶 用粘度法测活性:定义为30℃,1分钟,使底物DNA溶液的比粘度下降25%的酶量为1个酶 单位。 转化率法:标准条件,5分钟使lug供体DNA残留37%的转化活性所需的酶量为1个酶单位 凝胶电泳法测活:37℃,1小时,使1 UglDNA完全水解的酶量为1个酶单位。 可见,同一种酶采用不同的测活方法,得到的酶活单位是不同的,即使是同一种测活法,实验 条件稍有相同,测得的酶单位亦有差异 如淀粉酶,两种定义 A:1g可溶性 starch,在h内液化所需的 enzyme量。 B:lml2%可溶性 starch,在h内液化所需的 enzyme量。 lg酶制剂溶于100mnH2O,取0.5ml与2%的 starch20m反应,pH60,10分钟完全液化,求 酶活力 A:60/10×20×2%×10.5×1000=4800u/克 enzyme制剂 B:6010×200.5×1000=24000克 enzyme制剂 3、酶的比活力 Specific activity 每毫克酶蛋白所具有的酶活力。酶的比活力是分析酶的纯度是重要指标。 单位:Umng蛋白质 有时用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少个活力单位表示。 举例:一个酶的分离纯化分为4步８ 1、 酶活力与酶促反应速度 酶活力：用在一定条件下，酶催化某一反应的反应速度表示。反应速度快，活力就越高。 酶量—酶活力一反应速度 酶促反应速度的表示方法：单位时间、单位体积中底物的减少量或产物的增加量。 单位：浓度/单位时间 P243 图 4-4 酶反应速度曲线 研究酶促反应速度，以酶促反应的初速度为准。因为底物浓度降低、酶部分失活产物抑制和逆 反应等因素，会使反应速度随反应时间的延长而下降。 2、 酶的活力单位（U） 国际酶学会标准单位：在特定条件下，1 分钟内能转化 1umol 底物的酶量，称一个国际单位（IU）。 特定条件：25℃ pH 及底物浓度采用最适条件（有时底物分子量不确定时，可用转化底物中 1umol 的有关基团的酶量表示）。 实际工作中，每一种酶的测活方法不同，对酶单位分别有一个明确的定义。 如 ：限制性核酸内切酶 用粘度法测活性：定义为 30℃， 1 分钟，使底物 DNA 溶液的比粘度下降 25%的酶量为 1 个酶 单位。 转化率法：标准条件，5 分钟使 1ug 供体 DNA 残留 37%的转化活性所需的酶量为 1 个酶单位。 凝胶电泳法测活：37℃，1 小时，使 1ugλDNA 完全水解的酶量为 1 个酶单位。 可见，同一种酶采用不同的测活方法，得到的酶活单位是不同的，即使是同一种测活法，实验 条件稍有相同，测得的酶单位亦有差异。 如 淀粉酶，两种定义 A：1 g 可溶性 starch，在 1h 内液化所需的 enzyme 量。 B：l ml 2%可溶性 starch ，在 1h 内液化所需的 enzyme 量。 1g 酶制剂溶于 1000ml H2O，取 0.5ml 与 2%的 starch 20ml 反应，pH6.0，10 分钟完全液化，求 酶活力。 A：60/10×20×2%×1/0.5×1000=4800u/克 enzyme 制剂 B：60/10×20/0.5×1000=240000u/克 enzyme 制剂 3、 酶的比活力 Specific activity 每毫克酶蛋白所具有的酶活力。酶的比活力是分析酶的纯度是重要指标。 单位：U/mg 蛋白质。 有时用每克酶制剂或每毫升酶制剂含有多少个活力单位表示。 举例：一个酶的分离纯化分为 4 步