2.固定 将制成的涂片干燥固定，固定时通过火焰12次即可，不可过热，以载玻片 不烫手为宜。 3.染色 ()初染将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液（加量以盖满菌膜为 度)，染色1-2min。倾去染色液，用自来水小心地冲洗。 (2)煤染滴加Lugol)碘液，染1-2min,水洗。 (3)脱色滴加95%乙醇，脱色20-25s立即水洗，以终止脱色。 (④复染滴加蕃红，染色2-3min,水洗。最后用吸水纸轻轻吸干。 4.镜检 干燥后，置油镜观察。被染成紫色者即为革兰氏阳性菌(G);被染成红色者 是革兰氏阴性菌(G)。 五、注意事项 1.革兰氏染色成败的关键是脱色时间。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱 色而被误认为是革兰氏阴性菌：如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被认为是革 兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄、脱色时玻片晃动的快慢及乙醇用量 多少等因素的影响，难以严格规定。一般可用已知革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 作练习，以掌握脱色时间。当要确证一个未知菌的革兰氏反应时，应同时做一张 己知革兰氏阳性菌和阴性菌的混合涂片，以资对照。 2.染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染 色液被稀释而影响染色效果。 3.选用培养16-24h菌龄的细菌为宜。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使 革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 2 2 2. 固定 将制成的涂片干燥固定，固定时通过火焰 1-2 次即可，不可过热，以载玻片 不烫手为宜。 3. 染色 ⑴初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液(加量以盖满菌膜为 度)，染色 1-2min。倾去染色液，用自来水小心地冲洗。 ⑵媒染 滴加(Lugol)碘液，染 1-2min，水洗。 ⑶脱色 滴加 95%乙醇，脱色 20-25s 立即水洗，以终止脱色。 ⑷复染 滴加蕃红，染色 2-3min，水洗。最后用吸水纸轻轻吸干。 4. 镜检 干燥后，置油镜观察。被染成紫色者即为革兰氏阳性菌(G )；被染成红色者 是革兰氏阴性菌(G-)。 五、注意事项 1. 革兰氏染色成败的关键是脱色时间。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱 色而被误认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被认为是革 兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄、脱色时玻片晃动的快慢及乙醇用量 多少等因素的影响，难以严格规定。一般可用已知革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 作练习，以掌握脱色时间。当要确证一个未知菌的革兰氏反应时，应同时做一张 已知革兰氏阳性菌和阴性菌的混合涂片，以资对照。 2. 染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上的残水，以免染 色液被稀释而影响染色效果。 3. 选用培养 16-24h 菌龄的细菌为宜。若菌龄太老，由于菌体死亡或自溶常使 革兰氏阳性菌转呈阴性反应