2年 Bolton等创立了固相 核酸杂交( solid phase hybridization) 1968年 Britten等开始了 DNA-DNA杂交的动力学研究 1972年AvV利用多聚 U- Sepharose和寡聚dT-纤维素 ( cellulose)从总RNA中分离含有多聚 A的mRN 1976年 Weiss等还从网织细胞 ( reticulocyte)RNA中纯化主要为a-珠 蛋白mRNA和β-珠蛋白mRNA的 mRNA混合液,并经寡聚dT引物,以 a-珠蛋白mRNA、B-珠蛋白mRNA为 模板,在RNA依赖的DNA聚合酶(反 转录酶)的作用下合成互补 DNA( complementary dNA,cDNA)探针 来分析珠蛋白基因的表达。由此开始了 利用这一技术进行某些特定基因表达 研究的探索 70年代在细菌中发现限制酶 ( restriction enzyme)或称为限制核内切 核酸酶( (restriction endonuclease) 13分子杂交技术的技术路线 分子杂交技术路线分为1.样 品的分离、纯化。2限制酶及限制酶切 反应。3.探针的制备。4分子杂交 以下我们分别详述各步骤。 13.1样品的分离、纯化 13.1.1核酸的分离、纯化 核酸是遗传信息以及基因表达的 物质基础。它与生命的正常活动,如种 族遗传、生长等有密切联系。它与生命 的异常活动,如肿瘤的发生、放射损伤 以及抗癌、抗病毒药物的作用机理也有 密切的关系。因此,核酸是现代生物化1962 年 Bolton 等创立了固相 核酸杂交 (solid phase hybridization) 1968 年 Britten 等开始了 DNA-DNA 杂交的动力学研究 1972 年 Aviv 利用多聚 U-Sepharose 和寡聚 dT -纤维素 （cellulose）从总 RNA 中分离含有多聚 A 的 mRNA 1976年Weiss等还从网织细胞 (reticulocyte)RNA 中纯化主要为α-珠 蛋白 mRNA 和β-珠蛋白 mRNA 的 mRNA 混合液，并经寡聚 dT 引物，以 α-珠蛋白 mRNA、β-珠蛋白 mRNA 为 模板，在 RNA 依赖的 DNA 聚合酶（反 转录酶）的作用下合成互补 DNA(complementary DNA，cDNA)探针 来分析珠蛋白基因的表达。由此开始了 利用这一技术进行某些特定基因表达 研究的探索。 70 年代在细菌中发现限制酶 (restriction enzyme)或称为限制核内切 核酸酶(restriction endonuclease)。 1.3 分子杂交技术的技术路线 分子杂交技术路线分为 1.样 品的分离、纯化。 2.限制酶及限制酶切 反应。 3.探针的制备。 4.分子杂交。 以下我们分别详述各步骤。 1.3.1 样品的分离、纯化 1.3.1.1 核酸的分离、纯化 核酸是遗传信息以及基因表达的 物质基础。它与生命的正常活动，如种 族遗传、生长等有密切联系。它与生命 的异常活动，如肿瘤的发生、放射损伤 以及抗癌、抗病毒药物的作用机理也有 密切的关系。因此，核酸是现代生物化