分子生物学实验报告二 实验名称:二、多聚酶链式反应(PCR)基因扩增及电泳检测 专业班级: 姓名 学号: Email: 实验日期 同组者 一,实验名称:PCR扩增 二,实验目的和要求 1学习和掌握PCR实验原理及操作步骤 2.掌握移液器的使用和电泳操作 三,实验仪器设备与材料 10叫移液枪、100叫移液枪、镊子、离心机、条浒苔 四实验原理 PCR( Polymerase Chain Reaction)技术就是在体外中通过酶促反应有选择地大量扩增 (包括分离)一段目的基因的技术。PCR是体外酶促合成特异DNA片段的方法,主要由高 温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成:即在髙温(95℃)下,待扩增 的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条 人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最适温 度(72℃)下,以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延 伸,合成DNA新链。这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤 的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能成 为下一次循环的模板,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增 倍,PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增,经过25~30个循环后,理论上可使基因扩增 109倍以上,实际上一般可达106~107倍 五,实验步骤 实验流程 1.加样 prin IHL dNTP 50μ buffer ddh,o 37叫 2.反应条件 94℃C cocycles 72℃ 4℃ 3.电泳分子生物学实验报告二 实验名称:二、多聚酶链式反应（PCR）基因扩增及电泳检测 专业班级: 姓名: 学号： Email: 实验日期: 同组者: 一,实验名称：PCR 扩增 二,实验目的和要求： 1.学习和掌握 PCR 实验原理及操作步骤 2.掌握移液器的使用和电泳操作 三,实验仪器,设备与材料 10µl 移液枪、100µl 移液枪、镊子、离心机、条浒苔、 四,实验原理 PCR (Polymerase Chain Reaction) 技术就是在体外中通过酶促反应有选择地大量扩增 （包括分离）一段目的基因的技术。PCR 是体外酶促合成特异 DNA 片段的方法，主要由高 温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成： 即在高温（95℃）下，待扩增 的靶 DNA 双链受热变性成为两条单链 DNA 模板；而后在低温（37～55℃）情况下，两条 人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链 DNA 模板结合，形成部分双链；在 Taq 酶的最适温 度（72℃）下，以引物 3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以 5’→3’方向延 伸，合成 DNA 新链。这样，每一双链的 DNA 模板，经过一次解链、退火、延伸三个步骤 的热循环后就成了两条双链 DNA 分子。如此反复进行，每一次循环所产生的 DNA 均能成 为下一次循环的模板，每一次循环都使两条人工合成的引物间的 DNA 特异区拷贝数扩增一 倍，PCR 产物得以 2n 的批数形式迅速扩增，经过 25～30 个循环后，理论上可使基因扩增 109 倍以上，实际上一般可达 106～107 倍。 五,实验步骤 实验流程： 1. 加样 primer1 1µL primer2 1µL dNTP 4µL 50µL buffer 5µL Temple 1µL ddH2O 37µL Taq 1µL 2. 反应条件 94℃ 3min 94℃ 30s 55℃ 1.5min 30cycles 72℃ 1min 72℃ 5min 4℃ hold 3. 电泳