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分子生物学实验报告一 实验名称二、基因DNA提取及电泳检测 专业班级: 姓名 学号: Email: 实验日期 同组者 一,实验名称:CTAB法提取条浒苔基因DNA 二,实验目的和要求 1学习和掌握CTAB方法提取基因组DNA的原理、方法和技术 2.为PCR扩增提供模板 三,实验仪器设备与材料 10叫移液枪、100叫移液枪、镊子、离心机、条浒苔、CTAB 四实验原理 CIAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法,其原理是:采用机械破碎植物细 胞,然后加入CIAB分离缓冲液将DNA溶解出来,再经氯仿一异戊醇抽提除去蛋白质,最 后得到DNA 五,实验步骤 ①取新鲜条浒苔适量,用液氮快速磨成粉末 ②将粉末转移到 eppendorf管中,加入0.5 ml Lysis buffer,5℃消化过夜 ③加入82.55 NAcL及825叫CTAB56℃恒温20分钟 ④加入等体积试剂(试剂成分为酚:氯仿:异丙醇=25:24:1)12000pm离心10分钟, 取上清,转移到新的 eppendorf管中 ⑤加入等体积氯仿,12000pm离心10分钟,取上清,转移到新的 eppendorf管中 ⑥加入等体积异丙醇,轻柔地摇晃,直到看见絮状沉淀 ⑦1200pm离心15分钟,去除上清; ⑧加入0.5ml75%乙醇洗涤沉淀,6000pm离心2分钟,除去上清,小心的将管壁上残留 的液体去除 ⑨晾晒DNA5-10分钟; ⑩0用30-50uL无菌水溶解DNA 制备0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA产物,取8μIDNA溶液并与1.5μ上样缓冲液混合, 用移液枪加入凝胶孔。电泳缓冲液为θ.5×TBE溶液,电泳结朿后用凝胶呈像系统观察, 并拍照记录。 六实验数据结果分析 七讨论、心得与体会
分子生物学实验报告一 实验名称:一、基因 DNA 提取及电泳检测 专业班级: 姓名: 学号： Email: 实验日期: 同组者: 一,实验名称：CTAB 法提取条浒苔基因 DNA 二,实验目的和要求： 1.学习和掌握 CTAB 方法提取基因组 DNA 的原理、方法和技术 2.为 PCR 扩增提供模板 三,实验仪器,设备与材料 10µl 移液枪、100µl 移液枪、镊子、离心机、条浒苔、CTAB 四,实验原理 CTAB 法是一种快速简便的提取植物总 DNA 的方法，其原理是：采用机械破碎植物细 胞，然后加入 CTAB 分离缓冲液将 DNA 溶解出来，再经氯仿－异戊醇抽提除去蛋白质，最 后得到 DNA。 五,实验步骤 ①取新鲜条浒苔适量，用液氮快速磨成粉末 ②将粉末转移到 eppendorf 管中，加入 0.5ml Lysis buffer,55℃消化过夜； ③加入 82.5µL 5M NaCl 及 82.5µL CTAB 56℃恒温 20 分钟 ④加入等体积试剂（试剂成分为酚：氯仿：异丙醇=25：24：1）12000rpm 离心 10 分钟， 取上清，转移到新的 eppendorf 管中 ⑤加入等体积氯仿，12000rpm 离心 10 分钟，取上清，转移到新的 eppendorf 管中 ⑥加入等体积异丙醇，轻柔地摇晃，直到看见絮状沉淀； ⑦12000rpm 离心 15 分钟，去除上清； ⑧加入 0.5ml 75%乙醇洗涤沉淀，6000rpm 离心 2 分钟，除去上清，小心的将管壁上残留 的液体去除. ⑨晾晒 DNA 5-10 分钟； ⑩用 30-50µL 无菌水溶解 DNA； 制备 0.8％琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 产物，取 8µlDNA 溶液并与 1.5µl 上样缓冲液混合， 用移液枪加入凝胶孔。电泳缓冲液为 0.5×TBE 溶液，电泳结束后用凝胶呈像系统观察， 并拍照记录。 六,实验数据,结果分析 七,讨论、心得与体会;
分子生物学实验报告二 实验名称:二、多聚酶链式反应(PCR)基因扩增及电泳检测 专业班级: 姓名 学号: Email: 实验日期 同组者 一,实验名称:PCR扩增 二,实验目的和要求 1学习和掌握PCR实验原理及操作步骤 2.掌握移液器的使用和电泳操作 三,实验仪器设备与材料 10叫移液枪、100叫移液枪、镊子、离心机、条浒苔 四实验原理 PCR( Polymerase Chain Reaction)技术就是在体外中通过酶促反应有选择地大量扩增 (包括分离)一段目的基因的技术。PCR是体外酶促合成特异DNA片段的方法,主要由高 温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成:即在髙温(95℃)下,待扩增 的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条 人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最适温 度(72℃)下,以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延 伸,合成DNA新链。这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤 的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能成 为下一次循环的模板,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增 倍,PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增,经过25~30个循环后,理论上可使基因扩增 109倍以上,实际上一般可达106~107倍 五,实验步骤 实验流程 1.加样 prin IHL dNTP 50μ buffer ddh,o 37叫 2.反应条件 94℃C cocycles 72℃ 4℃ 3.电泳
分子生物学实验报告二 实验名称:二、多聚酶链式反应（PCR）基因扩增及电泳检测 专业班级: 姓名: 学号： Email: 实验日期: 同组者: 一,实验名称：PCR 扩增 二,实验目的和要求： 1.学习和掌握 PCR 实验原理及操作步骤 2.掌握移液器的使用和电泳操作 三,实验仪器,设备与材料 10µl 移液枪、100µl 移液枪、镊子、离心机、条浒苔、 四,实验原理 PCR (Polymerase Chain Reaction) 技术就是在体外中通过酶促反应有选择地大量扩增 （包括分离）一段目的基因的技术。PCR 是体外酶促合成特异 DNA 片段的方法，主要由高 温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成： 即在高温（95℃）下，待扩增 的靶 DNA 双链受热变性成为两条单链 DNA 模板；而后在低温（37～55℃）情况下，两条 人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链 DNA 模板结合，形成部分双链；在 Taq 酶的最适温 度（72℃）下，以引物 3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以 5’→3’方向延 伸，合成 DNA 新链。这样，每一双链的 DNA 模板，经过一次解链、退火、延伸三个步骤 的热循环后就成了两条双链 DNA 分子。如此反复进行，每一次循环所产生的 DNA 均能成 为下一次循环的模板，每一次循环都使两条人工合成的引物间的 DNA 特异区拷贝数扩增一 倍，PCR 产物得以 2n 的批数形式迅速扩增，经过 25～30 个循环后，理论上可使基因扩增 109 倍以上，实际上一般可达 106～107 倍。 五,实验步骤 实验流程： 1. 加样 primer1 1µL primer2 1µL dNTP 4µL 50µL buffer 5µL Temple 1µL ddH2O 37µL Taq 1µL 2. 反应条件 94℃ 3min 94℃ 30s 55℃ 1.5min 30cycles 72℃ 1min 72℃ 5min 4℃ hold 3. 电泳
制备0.8%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物,取8 HInA溶液并与1.5μ上样缓冲液混合, 用移液枪加入凝胶孔。电泳缓冲液为0.5×TBE溶液,电泳结束后用凝胶呈像系统观察,并 拍照记录。 六实验数据结果分析 七讨论、心得与体会;
制备 0.8％琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物，取 8µlDNA 溶液并与 1.5µl 上样缓冲液混合， 用移液枪加入凝胶孔。电泳缓冲液为 0.5×TBE 溶液，电泳结束后用凝胶呈像系统观察，并 拍照记录。 六,实验数据,结果分析 七,讨论、心得与体会;
分子生物学实验报告三 实验名称三、条浒苔总RNA的提取和反转录 专业班级: 姓名 学号: Email: 实验日期 同组者 一,实验名称:PCR扩增 二,实验目的和要求 1学习和掌握植物总RNA的提取方法 2学习和掌握反转录PCR的方法 三,实验仪器设备与材料 l0叫移液枪、10叫移液枪、条浒苔、RNA提取液、PCR仪 四实验原理 RT-PCR是一种将cDNA合成与PCR技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法,主要 用于对表达信息进行检测或定量分析还可以用来检测基因表达差异而不必构建cDNA文库 克隆cDNA。 RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆转录反应可以使用 逆转录酶,以随机引物、 oligo(dn或基因特异性的引物(GsSP)起始。在实际应用中,RT PCR又常常分为一步法RT一PCR和两步法 RT-PCR 五,实验步骤 ①液氮研磨藻体,分装到1.5ml离心管中末 ②向离心管中加入 Iml trizol,充分振荡 ③1200mp/l0min取上清 ④加200微升氯仿,充分振荡15秒,静置2分钟 ⑤12000pm/15分钟,取上清 ⑥加500微升异丙醇,混匀,静置10分钟,12000pm/10分钟 ⑦去上清,加lml75%酒精,混匀,7500rpm/5分钟; ⑧晾晒RNA ⑨30微升DEPC处理水溶解RNA 制备0.8%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物,取8μDNA溶液并与1.5μ上样缓冲液混 合,用移液枪加入凝胶孔。电泳缓冲液为05×TBE溶液,电泳结束后用凝胶呈像系统观 察,并拍照记录 A.反转录反应 1按下列组成配制反转录反应液 IOXRNA PCR Buffer MgCl2(25mM 2叫 DNTP Mixture(10mM) 1叫 AMV Reverse Transcriptase XL (SU/HD) RNase Inhibitor (40U/HI) 0.25叫 Oligo Dt-3sites Adaptor Primer(2.5-M) 0.5叫 Positive Control rNa(2X10° copies/叫) 0.5叫 RNase Free dH,O 4.25凹 2按以下条件进行反转录反应 30℃10min
分子生物学实验报告三 实验名称: 三、条浒苔总 RNA 的提取和反转录 专业班级: 姓名: 学号： Email: 实验日期: 同组者: 一,实验名称：PCR 扩增 二,实验目的和要求： 1.学习和掌握植物总 RNA 的提取方法 2.学习和掌握反转录 PCR 的方法 三,实验仪器,设备与材料 10µl 移液枪、100µl 移液枪、条浒苔、RNA 提取液、PCR 仪 四,实验原理 RT—PCR 是一种将 cDNA 合成与 PCR 技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法，主要 用于对表达信息进行检测或定量分析,还可以用来检测基因表达差异而不必构建 cDNA 文库 克隆 cDNA。RT-PCR 的模板可以为总 RNA 或 poly(A)+选择性 RNA。逆转录反应可以使用 逆转录酶，以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始。在实际应用中，RT —PCR 又常常分为一步法 RT—PCR 和两步法 RT—PCR。 五,实验步骤 ①液氮研磨藻体，分装到 1.5ml 离心管中末 ②向离心管中加入 1ml TRIzol，充分振荡； ③12000rmp/10min 取上清 ④加 200 微升氯仿，充分振荡 15 秒，静置 2 分钟 ⑤12000rpm/15 分钟，取上清 ⑥加 500 微升异丙醇，混匀，静置 10 分钟，12000rpm/10 分钟； ⑦去上清，加 1ml 75%酒精，混匀，7500rpm/5 分钟； ⑧晾晒 RNA ⑨30 微升 DEPC 处理水溶解 RNA； 制备 0.8％琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物，取 8µlDNA 溶液并与 1.5µl 上样缓冲液混 合，用移液枪加入凝胶孔。电泳缓冲液为 0.5×TBE 溶液，电泳结束后用凝胶呈像系统观 察，并拍照记录。 A.反转录反应 1 按下列组成配制反转录反应液： 10XRNA PCR Buffer 1µl MgCl2 (25mM) 2µl DNTP Mixture (10mM) 1µl AMV Reverse Transcriptase XL (5U/µl) 0.5µl RNase Inhibitor (40U/µl) 0.25µl Oligo Dt-3sites Adaptor Primer (2.5µM) 0.5µl Positive Control RNA (2X105 copies/µl) 0.5µl RNase Free dH2O 4.25µl 2 按以下条件进行反转录反应 30℃ 10min
50℃30min 95℃5min 5℃5min 六实验数据结果分析 七实验心得与体会
50℃ 30min 95℃ 5min 5℃ 5min 六,实验数据,结果分析 七,实验心得与体会
分子生物学实验报告四 实验名称四、定量PCR原理与实验操作 专业班级: 姓名 学号: Email: 实验日期 同组者 一,实验名称:定量PCR原理与实验操作 二,实验目的和要求 1学习和掌握定量PCR原理与应用 2.学习和掌握定量PCR实验操作 三,实验仪器设备与材料 10叫移液枪、100叫移液枪、荧光定量PCR仪、 四实验原理 实时荧光定量PCR(Rea- Time C-PCR):在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光 信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。常 规PCR技术对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析,无法对起始模板准确定量, 无法对扩增反应实时检测,实时定量PCR技术利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反 应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析. 五,实验步骤 准备模板DNA或RNA,RNA反转录成cDNA) PCR反应( DNA/CDNA+引物探针+ PCR mix) 填样品表(样品名、孔位,样品类型、探针颜色) 设置参数(循环参数、反应体积、熔解曲线) 运行PCR,自动分析数据 进一步分析数据(基线、阈值、CT值、相对表达等) 六实验数据结果分析 七讨论、心得与体会;
分子生物学实验报告四 实验名称: 四、定量 PCR 原理与实验操作 专业班级: 姓名: 学号： Email: 实验日期: 同组者: 一,实验名称：定量 PCR 原理与实验操作 二,实验目的和要求： 1.学习和掌握定量 PCR 原理与应用 2.学习和掌握定量 PCR 实验操作 三,实验仪器,设备与材料 10µl 移液枪、100µl 移液枪、荧光定量 PCR 仪、 四,实验原理 实时荧光定量 PCR（Real-Time Q-PCR）：在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光 信号累积实时监测整个 PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。常 规 PCR 技术:对 PCR 扩增反应的终点产物进行定量和定性分析，无法对起始模板准确定量， 无法对扩增反应实时检测，实时定量 PCR 技术:利用荧光信号的变化实时检测 PCR 扩增反 应中每一个循环扩增产物量的变化，通过 Ct 值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析. 五,实验步骤 准备模板(DNA 或 RNA，RNA 反转录成 cDNA) ↓ PCR 反应(DNA/cDNA+引物探针+PCR mix) ↓ 填样品表(样品名、孔位，样品类型、探针颜色) ↓ 设置参数(循环参数、反应体积、熔解曲线) ↓ 运行 PCR，自动分析数据 ↓ 进一步分析数据(基线、阈值、CT 值、相对表达等) 六,实验数据,结果分析 七,讨论、心得与体会;
分子生物学实验报告五 实验名称五、蛋自质分离纯化 专业班级: 姓名 学号: Email: 实验日期 同组者 一,实验名称:蛋白质分离纯化 二,实验目的和要求 1.掌握蛋白质层析技术的原理和实验步骤 2学习层析仪的使用 三,实验仪器设备与材料 层析仪等 四实验原理 层析原理:待分离蛋白质溶液(流动相)经过一个固态物质(固定相)时,根据溶液中待分 离的蛋白质颗粒大小、电核多少及亲和力等,使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配,并 以不同的速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。 五,实验步骤 柱平衡一一样品准备——上样——过柱一—收集——洗柱 六实验数据, Sephadex G-25层析参数: 样品:高盐BSA蛋白溶液2ml 仪器:蛋白质层析仪 Biologic duoflow Sephadex g-25层析柱规格:1.2cm*20cm(直径*高) 洗脱液:ImM磷酸钠缓冲液(Ph74) 流速:1 ml/min 七结果分析 八,实验心得与体会
分子生物学实验报告五 实验名称: 五、蛋白质分离纯化 专业班级: 姓名: 学号： Email: 实验日期: 同组者: 一,实验名称：蛋白质分离纯化 二,实验目的和要求： 1.掌握蛋白质层析技术的原理和实验步骤 2.学习层析仪的使用 三,实验仪器,设备与材料 层析仪等 四,实验原理 层析原理：待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分 离的蛋白质颗粒大小、电核多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并 以不同的速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。 五,实验步骤 .柱平衡——样品准备——上样——过柱——收集——洗柱 六,实验数据, Sephadex G-25 层析参数： 样品：高盐 BSA 蛋白溶液 2ml 仪器：蛋白质层析仪 Biologic DuoFlow Sephadex G-25 层析柱规格：1.2cm*20cm（直径*高） 洗脱液：1mM 磷酸钠缓冲液（Ph7.4） 流速：1ml/min 七 结果分析 八,实验心得与体会