菌种的传代与保藏 内蒙自治区药品检验所
菌种的传代与保藏 内蒙自治区药品检验所
菌种保藏的意义 菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本 材料,在医学领域中,诊断制品的制备,菌苗的 生产、微生物致病性研究,药物的抑菌试验及药 品徼生物检验等都有一套完整的菌种.微生物具 有生命活力,在传代过程中易发生变异甚至死亡, 因此菌种保藏是一项重要的基础工作,是微生物 学基础工作的一项重要内容,也是药品微生物工 作中的一项常用技术
菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本 材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的 生产、微生物致病性研究，药物的抑菌试验及药 品微生物检验等都有一套完整的菌种.微生物具 有生命活力，在传代过程中易发生变异甚至死亡， 因此菌种保藏是一项重要的基础工作，是微生物 学基础工作的一项重要内容，也是药品微生物工 作中的一项常用技术。 一、菌种保藏的意义
如药品中的控制菌检查使用的阳性对照 菌须防止因多次传代而使阳性对照菌的典 型生物学特征发生变化及菌株的死亡,保 证达到菌种长期正确的形态; 如药品微生物学检验过程中,检出的可疑 致病菌须妥善保藏,以达到进一步鉴定的目 的,保证用药安全
如药品中的控制菌检查使用的阳性对照 菌须防止因多次传代而使阳性对照菌的典 型生物学特征发生变化及菌株的死亡，保 证达到菌种长期正确的形态； 如药品微生物学检验过程中，检出的可疑 致病菌须妥善保藏，以达到进一步鉴定的目 的，保证用药安全
菌种代号的意义 ●国内药品微生物检验所用的菌种代号是 CMCC(F)或CMCC(B) ●CMCC—中国医学菌种保藏中心 B 代表细菌,F—代表真菌 ●大肠杆菌CMCC(B)44102 乙型副伤寒沙门杆菌 ICMCO(B)5004 ●铜绿假单胞菌|CMCC(B)10104 ●金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003 生孢梭菌[CMCC(B)64941 ●白色念珠菌|CMCC(F)98001
二、菌种代号的意义 ⚫ 国内药品微生物检验所用的菌种代号是 ⚫ CMCC（F）或 CMCC（B） ⚫ CMCC —— 中国医学菌种保藏中心 ⚫ B —— 代表细菌， F ——代表真菌。 ⚫ 大肠杆菌 [CMCC (B) 44102] ⚫ 乙型副伤寒沙门杆菌 [CMCC (B) 50094] ⚫ 铜绿假单胞菌 [CMCC (B)10104] ⚫ 金黄色葡萄球菌 [CMCC (B)26003] ⚫ 生孢梭菌[CMCC(B)64941] ⚫ 白色念珠菌[CMCC(F)98001]
、常用菌种保藏方法 (-)菌种保藏的原理 ●根据微生物的菌种生理、生化特性,在人工创造 的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度,使细 胞基本处于休眠状态,生长繁殖受到抑制但又不 至于死亡,以减低菌种的变异率。低温、干燥、 缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代 谢作用。 ●低温、干燥、真空是用于菌种保藏的重要手段
三、常用菌种保藏方法 (一) 菌种保藏的原理 ⚫ 根据微生物的菌种生理、生化特性，在人工创造 的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细 胞基本处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但又不 至于死亡，以减低菌种的变异率。低温、干燥、 缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代 谢作用。 ⚫ 低温、干燥、真空是用于菌种保藏的重要手段
选择保藏方法时,首先应考虑方法能否长期地 保持菌种原有的特性,同时也应兼顾到方法的经济 和简便。在实际工作中,往往多种条件同时使用, 以提高保藏效果。 二)菌种保藏步骤 ①挑选特征典型的纯菌菌落; ②确定保藏的合适菌体形态; ③选择最适宜的保藏方法; ④定期对保藏菌种进行检查,观察是否发生变化, 若有变化,须改变保藏方法。保藏期满应及时进 行移种
选择保藏方法时，首先应考虑方法能否长期地 保持菌种原有的特性，同时也应兼顾到方法的经济 和简便。在实际工作中，往往多种条件同时使用, 以提高保藏效果。 （二）菌种保藏步骤 ① 挑选特征典型的纯菌菌落； ②确定保藏的合适菌体形态； ③ 选择最适宜的保藏方法； ④定期对保藏菌种进行检查，观察是否发生变化， 若有变化，须改变保藏方法。保藏期满应及时进 行移种
1.琼脂斜面低温保存法 (1)方法:将经常使用的菌种的典型菌落接 种在斜面(某些特殊菌种可用液体培养基)上, 按规定的温度和时间培养,待充分生长后,把 培养好的新鲜菌种用牛皮纸保好,为减缓培养 基的水分蒸发,延长保藏时间,可将菌种保藏 管的棉花塞换成橡胶塞。放在4℃左右的冰箱 中保藏。每隔2~3个月移种一次,继续进行保 藏。若用半固体高层培养基穿刺培养,一般可 保藏半年~一年。有的甚至更长时间。 ●(2)适用范围:细菌、酵母菌、霉菌保藏
1.琼脂斜面低温保存法 ⚫ （1）方法：将经常使用的菌种的典型菌落接 种在斜面（某些特殊菌种可用液体培养基）上， 按规定的温度和时间培养，待充分生长后，把 培养好的新鲜菌种用牛皮纸保好，为减缓培养 基的水分蒸发，延长保藏时间，可将菌种保藏 管的棉花塞换成橡胶塞。放在4℃左右的冰箱 中保藏。每隔 2~3个月移种一次，继续进行保 藏。若用半固体高层培养基穿刺培养，一般可 保藏半年 ~ 一年。有的甚至更长时间。 ⚫ （2）适用范围：细菌、酵母菌、霉菌保藏
大肠杆菌斜面 金黄色葡萄球菌斜面
大肠杆菌斜面 金黄色葡萄球菌斜面
生孢梭菌 白色念珠菌 需气菌、厌气菌培养基 真菌培养基
生孢梭菌 白色念珠菌 需气菌、厌气菌培养基 真菌培养基
各类菌种保藏条件及时间 菌种 培养基 保存温 度 传种时间 般多用于营养琼脂 细菌或根据菌种规定选用46℃芽孢杆菌36个月, 培养基 其它细菌每个月 酵母菌麦芽汁酵母箐琼用 般4-6个月 般用PDA琼脂、蔡 丝状真氏琼脂或麦芽汁琼脂46℃每4个月移植一次 菌等 (每2个月移植一次
各类菌种保藏条件及时间 菌 种 培 养 基 保存温 度 传 种 时 间 细 菌 一般多用于营养琼脂 或根据菌种规定选用 培养基 4~6℃ 芽孢杆菌3~6个月， 其它细菌每个月 酵母菌 一般用麦芽汁琼脂或 麦芽汁酵母膏琼脂 4~6℃ 一般4~6个月 丝状真 菌 一般用PDA琼脂、蔡 氏琼脂或麦芽汁琼脂 等 4~6℃ 每 4 个 月 移 植 一 次 （每2个月移植一次）