蚌埠医学院学报2011年1月第36卷第1期 11 【文章编号】1000-2200(2011)010011-04 ,基础医学 多药耐药相关蛋白在肝癌耐药细胞系 HepG2/Oxal中的作用机制研究 滕凤猛，吴穷，陈昌杰，杨清玲，王惠 [摘要jg的：探讨多药耐药(muidrugresistance,MDR)相关蛋白在肝癌细胞系HepG2及不同浓度耐奥沙利铂(ptin Oxl)亚系中的表达及参与肝癌对Oxl耐药的机制。方法：以浓度递增法诱导肝癌细孢系HepC2,建立2.55.0/ml的Oal 耐药亚系，以半定量RT-PCR法测定MDR,多药耐药相关蛋自(muli-dge e related protein,MRP)和乳腺痛耐药蛋白 (breast cancer resistance protein,BCRP)在亲代和不同耐药亚系中的mRNA表达，并在蛋白水平以Wese 的差异性。结果：成功建立了1C50值为15和25倍代细胞的Oxl耐药亚系(HpG2/Oxal):在mRNA和蛋白水平，BCRP的 表达 表技与2地西益送五R心的表达东的百不用显度的润双原 BCRP在HepG2对Oal获得性耐药中起着重要作用，MDR和MRP在 度的横加麦接来越高 [关键词]肝肿痛：奥沙 腺癌耐药蛋白 [中国围书资料分类法分类号] :R979 [文献标识码】A Role of multi-drug resistance proteins in drug resistance cell line HepG2/Oxal of hepatocellular carcinoma TENG Fen ng'.WU Oiong CHEN Chang-jie'.YANG Oing-ling'WANG Hui' (1.Research Center of Clinical Iabon Bengbu Anhui 233030 [Abstract]Objective:To investigate the expression of multi-drug esiated proteins(MDR)in Hepatocellular cancer cell line HepG2 and in differenoofeline of opatin(Oxa),andtostudy the mechanis of their resistanee to Oxal. Methods:HepG2 multi-drug resistance sub-cell line was induced by increasing the concentration of Oxal progressively.and the drus ance cell line 2.5 ue/ml HepC2/Oxal and 5.0 ug/ml HenG2/Oxal was successfully established.The mRNA expression of the MDR,the expression of multi-trug resistance related protein MRP)and breast cancer resistance protein BCRP)in the cell lines HepG2/Oxal)of 2.5 ug/ml HepG2/Oxal and 5.0 ug/ml HepG2/Oxal were detected using RT-PCR,and the variability of the gen expression was verified by Westemn blot.Results.Hepc2/Oxal drug resistanee cell subseries with Ic5o value of 15 and 25 times successfully constructed.BCRP expression was positively correlated with HepC2 drug resistance at mRNA and the protein level.But MDR and MRP did not display significant high pression in the prophase drug resi ce expression of MDR and MRP reased along with the rise of drug resistance level.Conclusions:BCRP pla ortant role in the d characte HepG2 cell jine to Oxal:the ex es with the rise o the [Keywords]liverneoplasms;oxaliplatin;multi-dnugresistanceprotein;breas 肝癌为我国最常见的恶性程度极高、预后极差 者，采取消融和介人治疗等手段，虽然提高了局部 的恶性肿瘤 ·,发病率高，治疗难度大 ,手术切 ,却在延长 者的生存时间上不能令 人满总 (包括肝移植)是治愈的唯一方法：对于不能切除 晚期肝癌的系统性化疗仍有重要的临床价值，但部 分患者往往由于肝癌细胞的多药耐药(multi-.dug resistance.MDR)而导致化疗无效或涤渐由有效其 为无效。MDR的产：生与多药耐药基因、多药耐药蛋 白表达增多密切相关)。肝癌的MDR是严重影响 233030,2.蚌医学院第一附属医院肿瘤内科，安蚌 化疗效果及患者生存的主要原因。故研究肝癌对新 作者简介1 代化疗药 物的MDR产生机制，对提高屏 的化 通讯作者】陈昌态，博士.颈士研究生导师，教授，Eml:bbmccej@ 疗效果，延长患者的生存期及合理化疗方案的应用 sohu.com 有者重要的意义。因此，深讨奥沙利铂(oxaliplatin 蚌埠 医学院学报 2011年 1月第 36卷第 1期 [文章编号 ]1000—2200(2011)Ol43011-04 多药耐药相关蛋 白在肝癌耐药细胞 系 HepG2／Oxal中的作用机制研究 滕凤 猛 ，吴 穷 ，陈 昌杰 ，杨清 玲 ，王 惠 ll · 基 础 医学 · [摘要】目的：探讨多药耐药 (multi—drugresistance，MDR)相关 蛋 白在肝 癌细胞 系 HepG2及 不 同浓度 耐奥沙 利铂 (oxaliplatin， Oxa1)亚系中的表达及参与肝癌对 Oxal耐药 的机制。 方法 ：以浓度递增法诱 导肝 癌细胞 系 HepG2，建立 2．5、5．0 _／m1的 Oxal 耐药亚系 ，以半定量 RT—PCR法测定 MDR、多 药耐药 相关 蛋 白(multi—drugresistancerelatedprotein，MRP)和乳腺 癌耐 药蛋 白 (breastcancerresistanceprotein，BCRP)在 亲代和不 同耐药亚系中的 mRNA表达 ，并在蛋 白水平 以 Westernblot法验证基 因表达 的差 异性 。结果：成功建立 了 IC50值 为 15和 25倍亲代细胞 的 Oxal耐药亚系 (HepG2／Oxa1)；在 mRNA和蛋 白水平 ，BCRP的 表达与 HepG2的耐药性呈正相关 ，而 MDR、MRP的表达在耐药 的早期升 高不明显 ，随着耐药 程度的增加 其表达增 加。 结论 ： BCRP在 HepG2对 Oxal获得性耐药中起着 重要作用 ，MDR和 MRP在 HepG2／Oxal耐药过程 中早期起 的作用不 明显 ，随着耐药 浓度 的增加 ，表达越来越高。 [关键词]肝肿瘤 ；奥沙利铂 ；多药耐药蛋 白；乳腺癌耐药蛋 白 [中国图书资料分类法分类号]R735．7；R979．1 [文献标识码 ]A Roleofm ulti-drug resistance proteinsin drug resistance cellline HepG2／Oxalofhepatocellular carcinom a TENG Feng—meng‘， WUQiong，CHENChang-jie。，YANGQing—ling’，WANGHui (1．ResearchCenterofClinicalLaboratoryScience，BengbuMedicalCollege，BengbuAnhui233030； 2．DepartmentofMedicalOncology，TheF ￡AffiliatedHospitalofBengbuMedicalCollege，BengbuAnhui233004，China) [Abstract]Objective：Toinvestigatetheexpressionofmulti—drugresistance—associatedproteins(MDR)inHepatocellularcancercell lineHepG2andindifferentconcentrationsofsub—celllineofoxaliplatin(Oxa1)，andtostudythemechanismoftheirresistancetoOxa1． M ethods：HepG2multi—drugresistance sub—celllinewasinduced by increasing the concentration ofOxalprogressively，andthe drug resistancecellline2．5 g／mlHepG2／Oxaland5．0 mlHepG2／Oxalwassuccessfullyestablished．ThemRNA expressionofthe MDR，theexpressionofmulti—drugresistancerelatedprotein(MRP)andbreastcancerresistanceprotein(BCRP)inthecelllines (HepG2／Oxa1)of2．5 g／mlHepG2／Oxaland5．0 mlHepG2／OxalweredetectedusingRT—PCR，andthevariabilityofthegene expressionwasverifiedbyW estern blot．Results：HepG2／Oxaldrugresistance cellsubserieswith IC50valueof15 and25 timeswere successfullyconstructed．BCRP expression waspositively correlated with HepG2 dru gresistanceatmRNA and theprotein leve1．But MDR and MRP didnotdisplaysignificanthigh expression in the prophasedrugresistancesubseries；theexpressionofMDR andMRP increasedalongwiththeriseofdrugresistanceleve1．Conclusions：BCRP playsanimportantroleintheacquiredcharacterresistanceof HepG2 celllinetoOxal；theexpressionofMDR andMRP isnotobviousattheprophaseoftheresistance，butincreaseswiththeriseof theresistanceleve1． [Keywords]liverneoplasms；oxaliplatin；multi—drugresistanceprotein；breastcancerresistanceprotein 肝癌为我国最常见 的恶性程度极高、预后极差 的恶性肿瘤之一 ，发病率 高，治疗难度大，手术切除 (包括肝移植 )是 治愈的唯一方法 ；对于不能 切除 [收稿 日期]2010-02-03 [作者单位]1．蚌 埠医学 院 』临床检 验诊 断学实 验 中心 ，安徽 蚌 埠 233030，2．蚌埠 医学院第一附属医院 肿瘤 内科 ，安徽 蚌 坦 233004 [作者简介 ]滕风猛 (1981一)，男 ，硕士研究生． [通讯作者]陈昌杰 ，博士 ，硕士研究生导师 ，教授 ，E．mail：bbmcccj@ SOhl】．COIll 者 ，采取消融和介入治疗等手段 ，虽然提高了局部控 制率 ，却在延长患者 的生存 时间上不能令人满意。 晚期肝癌的系统性化疗仍有重要 的临床价值 ，但部 分 患者 往 往 由于 肝 癌 细 胞 的 多 药 耐 药 (multi—drug resistance，MDR)而导 致化疗无 效或逐渐 由有效 转 为无效。MDR的产生与多药耐药基 因、多药耐药蛋 白表达增多密切相关 。肝癌的 MDR是严重影 响 化疗效果及患者生存的主要原因。故研究肝癌对新 一 代化疗药物 的 MDR产生机制 ，对提 高肝癌 的化 疗效果 ，延长患者的生存期及 合理化疗方案 的应用 有着重要的意义。因此 ，探讨奥沙利铂 (oxaliplatin